国家自然科学基金(30770972)
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
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- NGX6基因联用5-Fu对人结肠癌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨侯选抑瘤基因NGX6联用5-Fu对结肠癌细胞凋亡的影响。方法:以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用作为实验组,以PDTC与5-Fu联用的HT-29细胞作为对照组,通过EMSA检测各组结肠癌HT-29细胞核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,利用MTT比色法检测各组细胞增殖的情况,吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)双染法显微镜观测以及PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞以及应用了PDTC的HT-29细胞NF-κB的激活均明显受到抑制;与5-Fu作用的HT-29细胞组比较,5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞后,HT-29细胞增殖受到明显抑制,5-Fu诱导HT-29细胞凋亡作用增强;与5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞的对照组比较,在诱导细胞凋亡以及抑制细胞增殖方面,稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用组和对照组所取得一致的效果,NGX6基因增强5-Fu对HT-29细胞增殖抑制的能力及诱导HT-29细胞凋亡的能力。结论:NGX6基因抑制了肿瘤细胞NF-κB的激活,具有增强5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其机制可能是抑制肿瘤细胞NF-κB的激活,NGX6基因对肿瘤的治疗及预后起积极作用。
- 连平郭勤彭娅肖志明刘芬王晓艳沈守荣李桂源
- 关键词：结肠癌NGX6基因核转录因子-ΚB凋亡
- 结肠癌中NGX6抑制EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/cyclin D1信号通路的研究被引量：10
- 2008年
- 候选抑瘤基因NGX6具有抑制结肠癌增殖和转移的作用,研究表明其为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的负性调控因子,并可下调JNK通路中重要分子MADD(MAP-kinase activating death domain)的表达,其抑瘤机制是否与抑制EGFR介导的JNK信号通路的活性有关?在已建立的转染NGX6的细胞模型基础上,借助蛋白质印迹(Western blot)和免疫组化方法在细胞和组织水平检测NGX6转染前后EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/cyclin D1信号通路中重要蛋白质的表达.结果表明,NGX6转染后结肠癌细胞HT-29在裸鼠体内成瘤明显受抑,差异有统计学意义.Western blot结果显示,在结肠癌细胞中NGX6可明显下调EGFR、K-ras、p-JNK、c-Jun和cyclin D1的表达;进一步采用Western blot和免疫组化法验证NGX6在体内对上述关键分子表达的影响,发现NGX6可抑制裸鼠移植瘤组织中EGFR、K-ras、p-JNK、c-Jun和cyclin D1的表达,与体外结果一致.上述研究表明,NGX6在结肠癌中主要通过抑制EGFR介导的JNK通路的活性而发挥其抑瘤作用,该研究为深入探讨NGX6的机制提供了重要的实验依据.
- 王晓艳沈守荣刘芬彭娅李桂源范松青
- 关键词：结肠癌NGX6基因EGFRJNK信号通路
- 抑瘤基因NGX6对人结肠癌细胞凋亡的影响被引量：8
- 2008年
- NGX6基因是中南大学肿瘤研究所分子遗传室在对鼻咽癌研究中筛选克隆出的一个新基因.以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞为实验组,转染空白质粒的HT-29细胞以及HT-29细胞为对照组,利用PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡情况,通过EMSA分析体外培养的结肠癌细胞及种植瘤细胞内核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况.研究结果表明:在裸鼠结肠癌种植瘤中,转染了NGX6基因的与未转染及空白载体组比较,结肠癌细胞凋亡率明显增高;EMSA(electrophoretic mobility shift assay)分析体外培养的结肠癌细胞及种植瘤细胞内核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,发现转染了NGX6基因的细胞NF-κB的激活均明显受到抑制.此研究说明,NGX6基因具有诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其可能的机制是抑制了结肠癌细胞NF-κB的激活.
- 连平郭勤彭娅肖志明刘芬王晓艳沈守荣李桂源
- 关键词：结肠癌NGX6基因裸鼠凋亡
- 抑瘤基因NGX6启动子的克隆与功能鉴定被引量：2
- 2010年
- NGX6是一个结直肠癌候选抑瘤基因,其转录调控机制不明.采用生物信息学技术预测其启动子区,并构建NGX6启动子荧光素酶报告基因重组体pGL3/Enhancer/1126.荧光素酶活性检测结果表明该区域具有强启动子活性.应用PromoterInspector program,FistEF,CpGplot和MatInspector Professional软件分析发现,NGX6基因转录调控区为一个不含TATA盒,而含有CAAT盒的GC富集区.凝胶迁移阻滞实验确定NGX6基因启动子区域具有Sp1特异性结合位点,Sp1特异性阻断剂光神霉素(mithramycin A)能明显抑制NGX6启动子的活性和NGX6基因的表达;封闭内源性Sp1能下调NGX6基因mRNA表达水平.
- 刘敏姬王晓艳沈守荣李楠张德才彭娅郭勤李桂源
- 关键词：NGX6转录调控启动子SPL
- NGX6基因两转录本在不同分期结直肠癌中的表达及与癌胚抗原的关系(英文)
- 2010年
- 目的:探讨NGX6mRNA两种转录本NGX6-S和NGX6-L在结直肠癌中的表达及功能。方法:采用原位杂交法检测NGX6-L和NGX6-S在不同分期结直肠癌癌组织及其配对正常组织中的表达特征,并分析其与血清癌胚抗原(CEA)的相关性。结果:在结直肠癌组织中短转录本NGX6-S的表达明显高于长转录本NGX6-L(P=0.008)。NGX6-S和NGX6-L在不同分期结直肠癌癌组织中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。NGX6-S在Duke A,B和C三期结直肠癌组织中的表达与其在配对正常组织的表达差异无统计学意义(P>0.05),在有远处转移的Duke D期结直肠癌组织中的表达低于配对正常组织(P=0.033)。NGX6-L在Duke A,B,C和D期结直肠癌组织中的表达与配对正常组织差别无统计学意义(P>0.05)。结直肠癌中NGX6-S,NGX6-L的表达与血清CEA浓度无相关性。结论:在结直肠癌中NGX6基因发挥抑瘤功能的主要形式是短转录本NGX6-S,其表达下调可能与结直肠癌的远处转移相关。
- 苏峥王晓艳沈守荣王理李予李楠李曾
- 关键词：结直肠癌NGX6基因转录本癌胚抗原
- 鼻咽癌相关基因6在人结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用
- 2011年
- 目的:探讨鼻咽癌相关基因6(NGX6)对结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子的影响,明确NGX6与Wnt通路之间是否存在反馈调节。方法:将pCMV-myc-NGX6真核表达载体及pCMV-myc空白载体瞬时转染结肠癌细胞系SW620,Western印迹检测转染NGX6前后Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子c-Jun,c-myc,细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。构建LEF1缺失突变体(缺乏N末端,即β-catenin结合区域)pcDNA3.1(+)-LEF1DN瞬时转染SW620细胞,阻断Wnt通路,并通过Western印迹及T细胞转录因子4(TCF-4)荧光素酶报告质粒检测确定阻断效果。通过RT-PCR检测Wnt通路阻断后NGX6的表达。结果:NGX6基因瞬时转染结肠癌细胞系SW620后,可明显下调Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子c-Jun,c-myc,cyclin D1的表达。成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-LEF1DN,Western印迹及TCF-4荧光素酶报告质粒均证实pcDNA3.1(+)-LEF1DN能够下调Wnt通路下游靶分子c-Jun,c-myc,cyclin D1的表达及TCF/LEF的转录活性,对Wnt通路具有阻断作用。瞬时转染pcDNA3.1(+)-LEF1DN抑制Wnt通路后,NGX6在转录水平的表达有上升。结论:NGX6对Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子具有抑制作用。阻断Wnt通路对NGX6的表达有影响,Wnt通路与NGX6之间可能存在反馈调节作用。
- 刘芬沈守荣王晓艳彭娅郭勤肖志明刘劼
- 关键词：结肠癌信号转导WNT/Β-CATENIN
