国家自然科学基金(81070676)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：陶凌郭云萍张英起屈延王增禄更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学太原钢铁(集团)有限公司总医院医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 无标签重组人硫氧还蛋白的大规模表达、纯化及活性检测被引量：2
- 2012年
- 目的:利用基因工程的方法原核表达无标签的重组人硫氧还蛋白(rhTrx)并对其进行大规模表达、纯化和鉴定。方法:从人胚胎肾HEK293细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,经PCR扩增、酶切后连入pET-22b(+)载体构建重组质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,经两步离子交换层析纯化重组蛋白,采用SDS-PAGE、Western blotting、HPLC、MALDI-TOF-MS及经典的胰岛素二硫键还原法对重组蛋白进行鉴定。结果:构建成功了rhTrx基因表达载体;实现了rhTrx在原核细胞中的可溶性表达;纯化出的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting分析证实为rhTrx;HPLC和MALDI-TOF-MS分析表明,纯化出的目的蛋白纯度大于95%;胰岛素二硫键还原法证实纯化出的rhTrx具有生物学活性。结论:成功构建了rhTrx的原核表达体系,建立了rhTrx的纯化和鉴定方法,为其进一步的理论研究和生产开发提供了有效基础数据。
- 郭云萍孙璐张立剑王增禄高超杨强刘毅张英起屈延陶凌
- 关键词：表达纯化生物活性
- 重组人硫氧还蛋白工程菌生物学特性稳定性的检测被引量：1
- 2013年
- 【目的】观察和检测重组人硫氧还蛋白工程菌BL21/pET-22b(+)-rhTrx生物学特性的稳定性。【方法】工程菌连续传代50代,通过对每10代进行质粒性状、蛋白表达水平、透射电镜观察、革兰氏染色及各项生化检查,全面检测工程菌可能影响生产性能的生物学特性稳定性。【结果】各代工程菌提取的质粒经双酶切后均可见315 bp的目的基因片段;各代工程菌中Trx蛋白的表达量均为菌体总蛋白的20%左右;透射电镜观察呈现典型的大肠杆菌特性;革兰染色显示为阴性杆菌;各项生化检测结果与原始菌种无显著差异。【结论】该菌种生物学特性稳定,可作为生产用菌种。
- 郭云萍陶凌李刚任阳王慧峰
- 关键词：人硫氧还蛋白生物学特性稳定性
