国家自然科学基金(30770951)
- 作品数：43 被引量：122H指数：7
- 相关作者：周向东李琪余红梅尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院俄罗斯医学科学院西南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中俄政府间科技合作项目政府间科技合作项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转染重组Elafin对炎症状态下巨噬细胞表面受体CD14的保护作用被引量：1
- 2011年
- 目的:研究转染重组Elafin对炎症状态下巨噬细胞表面受体CD14的保护作用。方法:重组质粒pEG-FP-C1-Elafin转染入离体培养巨噬细胞株,与多形核中性粒细胞(polymorphonuclear granulocyte,PMN)、脂多糖(li-popolysaccharide,LPS)共作用4 h后,倒置荧光显微镜观察重组Elafin胞内表达,流式细胞仪检测巨噬细胞表面受体CD14表达情况。同时,转染重组质粒的巨噬细胞与凋亡PMN共孵育1 h后,观测结合凋亡PMN的巨噬细胞百分比。结果:pEGFP-C1-Elafin转染入巨噬细胞后被成功表达,其表面受体CD14数量明显升高,结合凋亡PMN的巨噬细胞的数量的增加。结论:通过转染重组人Elafin,可保护炎症状态下巨噬细胞表面凋亡相关受体CD14,促进PMN凋亡。
- 王晓龙周向东
- 关键词：巨噬细胞多形核中性粒细胞凋亡ELAFIN
- 鞘氨醇激酶1对肿瘤坏死因子α诱导的气道黏蛋白5AC的调节作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨鞘氨醇激酶1（SphK1）对肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的气道黏蛋白（MUC）5AC的调节机制。方法培养正常人气道上皮细胞HBE16，给予SphK1特异性抑制剂N，N-二甲基鞘氨醇（DMS）处理及转染SphK1的小干扰RNA（siRNA）后，再各施以TNF-α刺激，四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞增殖活力，Westernblot法检测各组SphK1、环氧化酶2（COX-2）、磷酸化P38（P—P38）、磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）和IKBα蛋白相对含量，酶联免疫分析法检测各组MUC5AC、前列腺素E2（PGE2）和环单磷酸腺苷（cAMP）的相对含量，荧光素酶报告基因系统测定cAMP反应结合蛋白（CREB）和核因子-κB（NF-κB）的相对活性，RT-PCR检测各组SphK1和SphK1 mRNA的表达水平，免疫荧光法检测胞内MUC5AC含量。结果与对照组相比，TNF．d组的SphK1 mRNA和蛋白水平显著升高（均P〈0．01），COX-2、PGE2、cAMP、P—P38和p-ERK的含量明显增加（均P〈0．01），IkBα含量明显降低（P〈0．01），CREB和NF—KB的活性明显增强（均P〈0．01），MUC5AC mRNA和蛋白含量亦显著高于对照组（均P〈0．01）；与TNF-α组相比，给予DMS处理后COX-2、PGE2、cAMP、P—P38和p-ERK的含量明显降低（均P〈0．01），IkBα含量显著增加（P〈0．01），CREB和NF-κB的活性明显减弱（均P〈0．01），MUC5AC mRNA和蛋白含量也显著降低（均P〈0．01），转染SphK1 siRNA后上述指标出现同DMS处理一致的变化（均P〈0．01）。结论SphK1参与调节了TNF-α所诱导的MUC5AC高表达过程中的主要信号因子及转录因子的表达，可能是MUC5AC合成及分泌过程中的重要调节因子。
- 余红梅李琪尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫周向东
- 关键词：鞘氨醇肿瘤坏死因子Α黏蛋白类转录因子
- 血红素加氧酶-1对人气道黏液高分泌的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对炎性刺激时人气道上皮细胞黏液分泌的影响。方法通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激下气道黏液高分泌模型,给予HO-1诱导剂氯化高铁血红素(Hemin)及HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPPⅨ)干预,观察黏蛋白5AC(MUC5AC)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化EGFR(p-EGFR)、HO-1及双功能氧化酶1(Duox1)的表达。将A549细胞分为对照组、HNE刺激组、Hemin干预组和ZnPPⅨ干预组。用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定Hemin及ZnPPⅨ对细胞活性的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组HO-1、Duox1、EGFR及MUC5ACmRNA的转录水平;Westernblot法检测p-EGFR、EGFR、Duox1和HO-1蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞裂解液中MUC5AC蛋白表达水平的变化;并用细胞免疫化学激光共聚焦显微镜观察不同条件下MUC5AC蛋白表达的变化。结果 HNE刺激组MUC5ACmRNA积分吸光度值和蛋白水平分别为(0.845±0.044)和(192.68±4.71)μg/mg,EGFRmRNA和蛋白的积分吸光度值分别为(0.868±0.039)和(0.623±0.052),均较对照组[(0.462±0.053)、(104.95±6.82)μg/mg和(0.528±0.054)、(0.297±0.055)]明显升高(均P<0.01);p-EGFR蛋白水平亦明显升高,且HO-1及Duox1的mRNA和蛋白水平也较对照组显著增高(均P<0.01)。给予Hemin预处理后,与HNE刺激组相比,HO-1mRNA及蛋白明显增多,p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均降低(均P<0.01)。给予ZnPPⅨ预处理后,与对照组相比,HO-1mRNA及蛋白水平无明显增高(P>0.05),而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均明显增高(均P<0.01)。结论 HO-1可通过下调Duox1的表达,阻断EGFR活化上游的配体依赖信号途径,减少EGFR活化,抑制MUC5AC的表达,此机制为气道黏液高分泌疾病的防治提供了新的方向。
- 雷蕊霞周向东
- 关键词：气道上皮黏蛋白类血红素加氧酶-1
- 张力敏感性阳离子通道在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用被引量：13
- 2010年
- 目的观察张力敏感性阳离子通道、Ca^2＋内流和豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物（MARCKS）在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用。方法人气道黏膜上皮细胞（HBE16）体外培养，采用小型生物撞击机给予机械牵张刺激，各组培养细胞依施加条件不同而分为对照、牵张、牵张＋钆、牵张＋硝苯吡啶、牵张＋低分子量肝素、牵张＋MARCKS效应结构域（ED）锁核酸（LNA）以及牵张＋MARCKS的ED无关对照LNA序列共7组，分别采用逆转录聚合酶链反应（RT—Pert）和免疫荧光法观察与胞吐相关的突触相关膜蛋白SNAP23以及黏蛋白（MUC）5ACmRNA和蛋白表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测细胞培养上清中MUC5AC分泌。结果机械牵张能显著升高人气道黏膜上皮细胞中SNAP23和MUC5AC表达，显著提升细胞培养上清中MUC5AC分泌（P〈0．05）；钆、硝苯吡啶、MARCKS的ED—LNA均能抑制机械牵张对SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌的提升作用（均P〈0．05）；而低分子量肝素未能显著降低SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌（P〉0．05）。结论机械牵张能升高人气道黏膜上皮细胞MUC5AC的表达，其机制可能与张力敏感性阳离子通道、Ca^2＋内流和MARCKS途径有关。
- 钟甜尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫周向东
- 关键词：机械牵张胞吐黏蛋白
- 柚皮素和PI3K/PKB信号途径对气道黏液高分泌的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨柚皮素对炎症反应时气道上皮细胞黏液高分泌的影响。方法:通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎症反应时气道黏液高分泌模型,分别以柚皮素和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002进行干预,观察黏蛋白5AC(MUC5AC)、PI3K、PKB、P-PKB及核因子-κB(NF-κB)的表达。培养细胞经甲基偶氮唑盐法测定活性后分为对照组、HNE处理组、LY294002组、柚皮素组和柚皮素+LY294002组。逆转录PCR方法检测各组MUC5ACmRNA变化;Western blot法检测PI3K、PKB、P-PKB和NF-κB蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法观察MUC5AC蛋白表达的变化,并用细胞免疫激光共聚焦显微镜观察柚皮素作用前后黏蛋白的分布。结果:HNE处理组MUC5AC的mRNA和蛋白的吸光度面积积分值较对照组明显降低;PI3K、PKB、P-PKB和NF-κB蛋白表达均较对照组明显升高;给予柚皮素预处理后,与HNE刺激组相比均明显下调;而柚皮素+LY294002组MUC5ACmRNA和蛋白均较单独LY294002处理组更为明显。结论:柚皮素可通过抑制PI3K/PKB信号途径,抑制NF-κB的活化,从而发挥抑制气道黏液高分泌的作用。
- 杨娟周向东
- 关键词：柚皮素黏蛋白核因子-ΚB
- 重组人Elafin转染气道上皮细胞对脂多糖致气道黏液高分泌的影响被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨重组人自细胞弹性蛋白酶抑制因子Elafin对脂多糖（LPS）致气道黏液高分泌的影响.方法 通过构建人Elafin重组质粒pEGFP-C1-Elafin,并转染人人气道黏液上皮细胞系NCI-H292,将其与多形核粒细胞（PMN）共孵育,并用LPS刺激24 h,采用底物检测法、酶联免疫吸附测定（ELISA）和RT-PCR分别检测培养细胞上清中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）活性、黏蛋白（MUC）5AC蛋白含量和细胞中MUC5AC mRNA水平.结果 LPS各浓度均可明显提高转染空载体组培养细胞上清液的NE活性、MUC5AC含最及细胞中MUC5AC mRNA水平,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.01） 并且在0.5～25 mg/L终浓度范围内呈剂量依赖关系.转染Elafin组与转染空载体组在不同浓度LPS（终浓度分别为0.5 mg/L和5.0 mg/L）干预时各个指标相比较差异有统计学意义（P＜0.05）,但在LPS终浓度为25 mg/L组各指标与转染空载体组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 转染重组人Elafin可抑制一定浓度范围LPS引起的炎症终效应因子NE活性及其诱导的黏液高分泌,但不能抑制高浓度LPS的作用.
- 徐晓艳元东明周向东
- 关键词：ELAFIN脂多糖类白细胞弹性蛋白酶粘蛋白类
- 肝素在佛波脂诱导肺上皮细胞株表达黏蛋白5AC中的作用
- 2008年
- 目的研究肝素对肺上皮细胞株(A549细胞)表达黏蛋白5AC(MUC5AC)的影响。方法用佛波脂建立体外A549细胞黏液高分泌模型,用ELISA和RT-PCR观察A549细胞MUC5AC的表达。结果佛波脂刺激MUC5AC的表达,肝素可干预佛波脂诱导的MUC5AC基因的转录和表达水平的上调,且呈剂量依赖性。结论黏液高分泌是慢性气道炎症的重要的病理特征。肝素,尤其对肝素抗凝活性的部分修饰后,可能作为1种抗黏液高分泌的药物。
- 文秀芳周向东
- 关键词：肝素黏蛋白5AC气道黏液高分泌
- 慢性机械压力诱导气道上皮黏蛋白5AC的表达被引量：2
- 2010年
- 目的探讨慢性机械压力能否诱导气道上皮黏蛋白(mucin,MUC)5AC表达及通过的相关信号通路。方法培养大鼠气道上皮细胞建立气液相界面(air liquid interface,ALI),通过对Transwell培养板上的气道上皮细胞每天施加10、20、30 cmH2O水平的气体压力1 h并持续7 d来模拟慢性机械压力作用,并以表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)特异性抑制剂AG1478、细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)激酶抑制剂PD98059分别作为干预因素处理细胞。将细胞分为空白对照组、单纯压力组、AG1478+30 cmH2O压力组、PD98059+30 cmH2O压力组,单纯压力组分为10、20、30 cmH2O3个压力水平。RT-PCR检测MUC5AC mRNA表达水平,ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminalkinase,p-JNK)和磷酸化P38(p-P38)水平。结果与空白对照组比较,单纯压力组MUC5AC蛋白及mRNA表达水平随压力水平的升高而升高(P<0.05),呈压力依赖性,同时伴随p-ERK蛋白含量增加(P<0.05),但p-JNK和p-P38含量没有明显变化(P>0.05)。30 cmH2O压力水平MUC5AC蛋白及mRNA表达水平[(0.65±0.09)、(0.62±0.04)]明显高于空白对照组[(0.28±0.04)、(0.20±0.05),P<0.01],p-ERK蛋白含量(0.68±0.05)较空白对照组(0.27±0.07)显著增加(P<0.01)。应用AG1478和PD98059分别预处理后,MUC5AC蛋白、mRNA表达水平及p-ERK蛋白水平在AG1478+30 cmH2O压力组分别为(0.39±0.08)、(0.40±0.06)、(0.25±0.04),PD98059+30 cmH2O压力组分别为(0.36±0.09)、(0.38±0.13)、(0.26±0.11),与单纯压力组30 cmH2O水平比较均显著降低(P<0.05)。结论慢性机械压力能诱导气道上皮MUC5AC表达增加,这一作用可能通过机械压力压缩侧面胞间隙来实现,而EGFR及ERK信号通路参与其中。
- 吴砚樵周向东
- 关键词：黏蛋白类表皮生长因子受体细胞外信号调节MAP激酶类上皮细胞
- 人中性粒细胞弹性蛋白酶诱导气道黏液高分泌细胞模型的建立及其机制的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的:以人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)为诱导因素,研究建立黏蛋白(MUC)5AC和5B高表达的细胞模型,同时对黏蛋白高表达机制进行初步研究。方法:培养人肺腺癌细胞A549,以HNE为刺激因素,EGFR中和抗体、表皮细胞生长因子受体(EGFR)磷酸化阻断剂AG1478为干预因素,分组培养。采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)检测HNE对细胞活性的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量分析MUC5AC和MUC5B蛋白含量的差异;细胞免疫化学以及激光共聚焦技术进一步直观观察MUC5AC,MUC5B,p-EGFR蛋白表达的变化。结果:HNE对A549细胞活力的影响呈剂量依赖性;HNE刺激组的MUC5AC,MUC5B基因转录和蛋白表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.01);HNE刺激组p-EGFR蛋白表达显著增多,EGFR中和抗体、AG1478能显著降低HNE诱导的MUC5AC高表达,但对MUC5B高表达无干预作用。结论:人肺腺癌细胞A549同时表达MUC5AC和MUC5B,HNE能有效刺激A549细胞高表达MUC5AC和MUC5B,黏蛋白高表达细胞模型的建立为研究气道粘液高分泌疾病提供了实验基础。HNE通过激活EGFR信号转导通路诱导MUC5AC的高表达,但MUC5B高表达机制与之不同,有待进一步研究。
- 兰箭孙航刘杞周向东
- 关键词：黏蛋白5AC表皮细胞生长因子受体细胞模型
- TNF-α与香烟烟雾在诱导气道上皮细胞株黏蛋白表达的相互作用被引量：16
- 2009年
- 目的探讨肿瘤坏死因子TNF-α与香烟提取物共同诱导气道黏液高分泌的相互关系及作用特点。方法培养的人气道上皮细胞BEAS-2B,转染核转录因子(NF)-κB"decoy"寡核苷酸(ODNs),并以乱序NF-κBODNs为对照转染组,各组均分别予以TNF-α、10%香烟提取物(CSE)单独刺激及共同刺激,以Western blot、ELISA及RT-PCR法检测各组刺激前后磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、黏蛋白(MUC5AC)蛋白及mRNA水平。结果转染乱序NF-κBODNs的细胞予以TNF-α、10%CSE刺激后,各组细胞中p-EGFR蛋白水平较对照组升高,伴随MUC5AC蛋白含量及基因转录水平的提高(P<0.05);共孵育组中较单独刺激组升高更为显著(P<0.05)。转染NF-κB"de-coy"ODNs组再予以TNF-α刺激,细胞中MUC5AC蛋白含量及mRNA水平与未转染组相比升高不明显,而单用CSE刺激组中的MUC5AC、p-EGFR水平仍有明显升高(P<0.05);共孵育组显示出与CSE单独刺激组相似的结果。结论TNF-α、CSE能协同促进气道上皮细胞中黏蛋白合成,转录因子NF-κB主要参与TNF-α所致的MUC5AC表达,而在CSE诱导的效应过程中作用不明显。
- 李琪周向东
- 关键词：黏蛋白类肿瘤坏死因子Α核转录因子-ΚB
