天津市卫生局科技基金(2010KR08)
- 作品数：12 被引量：51H指数：4
- 相关作者：杨强徐宝山夏群许海委张春秋更多>>
- 相关机构：天津医院天津理工大学天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市卫生局科技基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TGF-β1，bFGF，IGF联合诱导兔脂肪基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究被引量：4
- 2012年
- [目的]分离培养兔脂肪基质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),观察在TGF-β1,bFGF,IGF联合诱导下其生物学特性及向软骨细胞定向分化的能力。[方法]取4个月龄新西兰大白兔颈背部脂肪组织,分离、培养ADSCs。选取第3代,分为两组,实验组用软骨诱导液(含TGF-β1、bFGF、IGF)对细胞进行培养,对照组用普通高糖培养液培养,倒置显微镜观察两组细胞形态,MTT测定其增殖情况;14 d后行组织学观察(包括甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化),并实时荧光定量PCR检测两组细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX 9基因的表达情况。[结果]实验组细胞逐渐变为软骨样细胞形态,增殖速度明显加快,14 d后实验组甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化阳性,对照组为阴性,荧光定量PCR结果显示实验组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX 9的基因转录水平明显高于对照组。[结论]在TGF-β1,bFGF,IGF联合诱导条件下ADSCs增殖迅速,可高表达Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX 9,向软骨细胞定向分化。
- 许海委徐宝山杨强李秀兰张杨马信龙夏群张春秋伍耀宏
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子胰岛素样生长因子脂肪基质干细胞软骨细胞
- 结核分枝杆菌生物被膜体外模型的建立被引量：1
- 2017年
- 目的本试验探讨如何建立结核菌生物被膜体外模型。方法选取生长良好的非耐药结核菌在罗氏固体培养基中复苏,在7H9OADC培养基中重新培养1周,使其活力相同,配置苏通培养基分别在烧瓶及孔板中培养结核菌观察生物膜的生长情况。结果 36株结核菌在孔板中培养时使用封口膜的全部培养出生物膜,而未使用封口膜的均培养失败。烧瓶中培养:在培养3周时需要松开瓶盖,否则生物膜生长不良。时间:培养2周时可看到有生物膜出现,5周时生物膜培养成熟。结论结核菌有生物被膜,通过体外培养可以成功获得。
- 侯志丽叶静梅早仙白大鹏吴琦
- 关键词：生物被膜结核分枝杆菌
- PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用被引量：1
- 2013年
- 目的体外评估PKH26标记对山羊髓核细胞生物学功能的影响,并结合活体荧光成像系统评价种子细胞在裸鼠体内的生物学行为。方法取1岁龄山羊椎间盘分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置相差显微镜下观察,传代获取第1代髓核细胞,行PKH26荧光标记,荧光显微镜下观察标记后的细胞荧光强度,并行甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色观察,锥虫蓝染色比较标记前后细胞活性,MTT法检测标记前后细胞增殖特性,实时荧光定量PCR检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因表达。将标记后的髓核细胞接种至一体化纤维化-髓核支架的髓核部分,纤维环部分作为阴性对照,体外培养3 d后植入5只6周龄雄性裸鼠体内,培养6周后活体成像技术检测髓核细胞-支架复合物在体内的荧光强度及范围。结果倒置相差显微镜观察示原代髓核细胞簇状生长,呈卵圆形,第1代髓核细胞呈类软骨样细胞形态;标记后的第1代髓核细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色均呈阳性;标记后荧光强度均匀,标记前后细胞活性均在95%以上;标记前后细胞生长曲线比较差异无统计学意义(P>0.05);实时荧光定量PCR检测示标记前后细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。活体成像技术显示体内髓核支架有强烈荧光,纤维环支架未见荧光。结论 PKH26标记对髓核细胞的活性、增殖及细胞表型的表达无明显影响,结合体内活体荧光成像系统可以追踪细胞在体内的生物学行为。
- 伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨马信龙夏群张春秋许海委曾超
- 关键词：山羊
- 脂肪干细胞在骨软骨组织工程中的研究进展被引量：1
- 2012年
- 近年来，随着医学相关学科的迅猛发展，组织工程技术已经取得了很大的成就，但种子细胞一直是困扰人们的焦点问题。脂肪干细胞（ADSCs）体外扩增迅速，稳定性好，无免疫排斥反应，具有多向分化潜能，可以向脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞、内皮细胞、肌细胞和神经细胞等不同胚层来源的细胞分化，并且脂肪组织具有取材方便、对人体创伤小、可大量获得等优点，因而ADSCs有望成为一种理想的组织工程种子细胞。旨在介绍ADSCs在骨软骨组织工程中的研究进展。
- 许海委徐宝山李秀兰杨强
- 关键词：脂肪干细胞骨软骨
- 腰椎间盘退变的分子病理学变化及发病机制被引量：17
- 2011年
- 背景:腰椎间盘退变是引起腰腿痛的常见原因,椎间盘退变的病理改变及发病机制至今仍未完全明确。目的:介绍腰椎间盘退变的分子病理改变及其发病机制的研究进展。方法:以"disc histology,disc degenerative disease,disc gene"等主题词检索PubMed数据库,检索时间为2005/2010年,筛选与腰椎间盘组织学变化和发病机制相关的文献,总结归纳腰椎间盘退变的研究进展和研究结果。结果与结论:共检索到与腰椎间盘退变有关的文章118篇,共纳入30篇。结果表明腰椎间盘退变受多种因素影响,包括基因遗传因素、自然老化和积累性损伤等,基因的多形性是诱发退变的重要前置因素。椎间盘退变可通过免疫反应、机械性压迫或不稳定、血循环障碍和炎性递质等因素导致椎间盘退变性疾病。老化和病理性退变在影像和病理上难以区别,应根据椎间盘退变性疾病的具体情况采取合理的治疗方法,生物学治疗提供了新的治疗思路,但目前仍处在实验研究阶段。
- 徐宝山杨强夏群
- 关键词：腰椎椎间盘退行性病变下腰痛骨组织工程
- 新型组织工程纤维环-髓核一体化双相支架的制备及检测
- 目的:用脱细胞脱钙骨基质和脱细胞髓核基质构建新型椎间盘一体化支架,并进行理化检测,探讨其作为椎间盘一体化支架的可行性。方法:取猪股骨近端松质骨,塑型成外径10mm,内径5mm的骨环,经过系列脱脂脱钙脱细胞处理,制备成纤维...
- 杨强许海委徐宝山马信龙夏群闫中胜李秀兰张杨伍耀宏孙晓雷张春秋
- 关键词：椎间盘
- 文献传递
- 软骨脱细胞基质多孔支架与山羊髓核细胞生物相容性研究
- 目的:制备软骨脱细胞基质多孔支架,并探讨其与山羊髓核细胞的生物相容性。方法:猪关节软骨经研磨、脱细胞、冷冻干燥技术等处理制成三维多孔支架;从山羊腰椎间盘中分离出髓核细胞,培养后获取P1代细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测...
- 伍耀宏徐宝山李秀兰杨强张杨夏群张春秋许海委
- 关键词：脱细胞软骨髓核细胞生物相容性
- 文献传递
- 软骨脱细胞细胞外基质多孔支架与山羊髓核细胞生物相容性研究被引量：1
- 2013年
- 目的制备软骨脱细胞细胞外基质多孔支架，并探讨其与山羊髓核细胞的生物相容性。方法猪关节软骨经研磨、脱细胞、冷冻干燥技术等处理制成三维多孔支架；从山羊腰椎间盘中分离出髓核细胞，培养后获取P1代细胞；四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测支架浸提液毒性；将髓核细胞以5x106／ml的密度接种在支架上体外培养48h，通过倒置显微镜、HE染色、死活细胞染色（LIVE／DEAD染色）、扫描电镜观察细胞在支架上的黏附及活性。结果软骨脱细胞基质多孔支架在敷水状态下光滑透明，分离的髓核细胞呈典型的软骨细胞样形态；MTT检测各组间增殖，其差异不具有统计学意义（P〉0．05）；倒置显微镜、电镜观察髓核细胞呈球状或短梭形均匀地贴附在支架内部，HE染色观察可见髓核细胞均匀分布在支架内部，LIVE／DEAD染色显示全部为绿色荧光（活细胞），未见红色荧光（死细胞）。结论软骨脱细胞基质多孔支架在组成上与髓核组织相似，与山羊髓核细胞具有良好的生物相容性，可以作为髓核组织工程的支架材料。
- 伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨夏群张春秋许海委
- 关键词：脱细胞软骨髓核细胞生物相容性
- 脂肪干细胞在骨软骨组织工程中的研究进展
- 近年来随着医学相关学科的迅猛发展,组织工程技术已经取得了很大的成就,但种子细胞一直是困扰人们的焦点问题。脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外扩增迅速、稳定性好、无免疫排斥反应...
- 许海委徐宝山杨强李秀兰马信龙
- 关键词：脂肪干细胞骨软骨
- 文献传递
- 软骨脱细胞基质多孔支架与骨髓基质干细胞体外构建组织工程软骨的研究被引量：15
- 2011年
- 目的探讨关节软骨脱细胞基质多孔支架（CEDPS）与骨髓基质干细胞（BMSCs）体外培养组织工程软骨的可行性。方法粉碎人关节软骨，脱细胞处理后差速离心法收集细胞外基质悬液，采用冷冻干燥技术制备三维多孔支架。扫描电镜观察其微观结构，并进行组织学观察，生化成分定量检测其胶原、氨基葡聚糖（GAG）、DNA含量，生物力学方法测量其干性及覆水状态下压缩弹性模量；分离培养犬骨髓基质干细胞，TGF－β1成软骨诱导，PKH26标记，接种到支架卜体外继续诱导培养，荧光显微镜及扫描电镜观察培养3d后细胞在支架内的黏附、分布情况。结果制备的CEDPS支架无细胞碎片残留，软骨细胞外基质特异性染色阳性，具有相互贯通的三维孔隙结构；支架生化成分定量检测：总胶原含量为（708．2±44．7）μ/mg，GAG含量为（254．7±25．9）μ/mg，DNA含量为（0．021±0．007）μ/mg；支架纵向压缩弹性模量E=（1．226±0．288）MPa，覆水后压缩弹性模量E＝（0．052±0．007）MPa。荧光显微镜、电镜检查结果表明细胞广泛均匀的分布在支架内部，呈圆形或椭圆形，在支架上增殖显著，细胞基质分泌明显。结论CEDPS支架在生化组成和结构上与软骨细胞外基质成分类似，去细胞彻底，具有良好生物力学特性，是一种较为理想的软骨组织工程支架载体；成软骨诱导的BMSCs与CEDPS支架在体外可初步构建类软骨样组织。
- 杨强彭江卢世璧夏群胡永成徐宝山郭全义汪爱媛赵斌张莉姚军许文静
- 关键词：生物医学工程软骨细胞支架
