公共文化服务平台

福建省自然科学基金(2009J06013): 作品数：16 被引量：31H指数：3; 相关作者：舒正玉黄建忠刘艳如李欣邱黎清更多>>; 相关机构：福建师范大学宁德师范学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金福建省科技计划重点项目更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程环境科学与工程理学更多>>

耐有机溶剂极端微生物的耐受机制及应用被引量：5: 2009年; 耐有机溶剂微生物是一类新颖的极端微生物,直到20世纪80年代才被系统地研究。它们通过各种耐受机制,有效抵御或降低有机溶剂对其细胞产生的毒害作用。因此,在全细胞催化、环境污染治理等领域,耐有机溶剂极端微生物具有广阔的工业应用前景。此外,深入透彻地了解耐有机溶剂极端微生物的各种耐受机制,有助于利用基因工程技术改造和优化现有耐有机溶剂极端微生物的各种性能,进一步拓展其工业应用领域。本文将从囊泡外排、改变细胞膜磷脂结构和组成等4个方面概述近年来耐有机溶剂极端微生物的耐受机制研究新进展,并介绍它们在全细胞催化等领域的应用。; 江欢舒正玉吴继光黄平黄建忠; 关键词：极端微生物

黑曲霉脂肪酶盖子结构域突变对其活性的影响被引量：2: 2010年; 比较黑曲霉脂肪酶与黑曲霉酯酶的3-D结构发现二者在盖子结构域存在显著差异。根据已解析的酯酶的3-D结构信息,运用重叠延伸PCR技术,对黑曲霉脂肪酶的4个位点进行突变,以期获得开盖型黑曲霉脂肪酶。4个突变位点分别为形成黑曲霉脂肪酶盖子结构的α-螺旋与酯酶对应区域的α-螺旋相互置换;Ser84突变为Gly;Asp99突变为Pro;Lys108突变为Glu。4个重组质粒导入毕赤酵母GS115菌株进行异源表达后,仅pPCI9K-anl-D99P和pPCI9K-anl-K108E实现了活性表达。; 薛龙吟林瑞凤舒正玉黄建忠; 关键词：黑曲霉脂肪酶突变活性

理性设计盐桥构建伯克霍尔德菌脂肪酶热稳定突变体被引量：1: 2017年; 【目的】借助蛋白质工程技术提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA的热稳定性,以期更好地将其应用于工业生产中。【方法】利用YASARA、Fold X、Rosetta、Gromacs等生物信息学软件,构建1个脂肪酶Lip A的热稳定性提高的微型突变体电子文库;通过对突变体的结构信息和自由能变化进行评估,筛选出潜在的有价值的突变体。继而利用基因定点突变技术,构建上述候选突变体的突变基因文库,通过实验筛选出热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。【结果】利用上述方法,从构建的20个脂肪酶LipA突变体中,筛选到热稳定性有显著提高的3个突变体LipA-Asn^(125)Asp、LipA-Asn^(125)Glu和LipA-Gln^(262)Glu。经55°C处理12 min后,上述3个突变体的T1250值较野生型分别提高4.0°C、5.5°C和4.4°C;在55°C下的半衰期较野生型分别提高了2.2倍、3.8倍和2.6倍。【结论】利用生物信息学软件,构建脂肪酶LipA突变体电子文库,结合蛋白质的结构信息,可以快速筛选到热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。; 刘艳如赵丙春董盼盼邱黎清黄建忠朱晓兰王作镇舒正玉

耐受有机溶剂洋葱伯克霍尔德菌ZYB002全细胞脂肪酶酶学性质被引量：3: 2010年; 一株对多种有机溶剂具有良好耐受能力的产脂肪酶菌株ZYB002经分子鉴定为洋葱伯克霍尔德菌。其产生的细胞结合脂肪酶最适温度为65°C,最适pH为8.0,在低于70°C和pH3-8.5的范围内,全细胞脂肪酶保持稳定。Ca2+、K+、Na+和NO3-等离子对脂肪酶活性有激活作用,而Zn2+有抑制效应。全细胞脂肪酶对正丁醇有较强的耐受能力,但曲拉通X-100对脂肪酶活性有强烈的抑制效应。洋葱伯克霍尔德菌ZYB002全细胞脂肪酶良好的碱稳定性、热稳定性和有机溶剂耐受性,表明该全细胞脂肪酶具有重要的工业应用潜力。; 吴继光舒正玉程蓝骍江欢祝昌飞黄建忠; 关键词：洋葱伯克霍尔德菌有机溶剂耐受性酶学性质

伯克霍尔德氏菌ZYB002脂肪酶lipC24基因的克隆、表达及其酶学性质被引量：2: 2015年; 【目的】克隆伯克霍尔德菌ZYB002菌株中的新型脂肪酶lip C24基因,测定其基本酶学性质,为后续深入研究该基因在菌株中的生理功能奠定基础。【方法】根据洋葱伯克霍尔德菌JK321菌株的全基因组DNA信息,直接设计引物从伯克霍尔德菌ZYB002菌株基因组中扩增出lip C24基因,并对之进行原核表达、重组蛋白的纯化及酶学性质分析。【结果】lip C24基因全长1317 bp,编码438个氨基酸残基;多肽链中具有保守五肽-G-X1-S-X2-G-序列;重组蛋白Lip C24的分子量为45 k Da;能有效水解各种对硝基苯酯,对中链脂肪酸的对硝基苯酯表现出偏爱性;其催化水解反应的最适温度为40℃,最适p H7.5;40℃下的半衰期为15.72 min,在p H 7.0-8.0的条件下,具有较好的稳定性。【结论】lip C24的编码产物为一个45 k Da蛋白,具有明显的脂肪酶活性,为中温中性脂肪酶。; 林红黄建忠舒正玉刘艳如武海龙李欣江贤章叶菲郑贞芬林跃鑫; 关键词：酶学性质

微生物脂肪酶蛋白质工程被引量：3: 2009年; 微生物脂肪酶催化的化学反应具有严格的立体选择性、位点选择性等专一性,催化活性高而副反应少,催化反应不需要辅助因子等特点,因此广泛应用于工农业生产中的诸多领域。利用蛋白质工程技术,提高微生物脂肪酶的特异性、活性和稳定性,对提高微生物脂肪酶制剂产品的市场竞争能力,扩大微生物脂肪酶的应用领域,具有重要的意义。综述了蛋白质工程技术在微生物脂肪酶改性方面的应用现状、存在问题及前景。; 林瑞凤舒正玉薛龙吟江欢黄建忠; 关键词：脂肪酶蛋白质工程

脂肪酶的特异性折叠酶: 2011年; 以Pseudomonas aeruginosa为代表的I.1亚家族脂肪酶和以Burkholderia cepacia为代表的I.2亚家族脂肪酶具有优良的手性化合物拆分性能,在绿色化工领域具有良好的开发潜力及其应用前景。I.1亚家族脂肪酶和I.2亚家族脂肪酶均采用II型分泌机制进行分泌,其分泌依赖于一种分子伴侣——脂肪酶的特异性折叠酶(lipase specific foldase,Lif)的协助。从Lif蛋白的分类、结构特点、介导对应脂肪酶折叠的特异性及机制、lif基因表达调控机制及尚待探讨的问题等方面系统介绍Lif蛋白的研究进展。; 程蓝骍舒正玉吴继光陈的蒋咏梅李欣黄建忠; 关键词：脂肪酶

细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示被引量：1: 2014年; 细胞表面展示技术已广泛应用于突变文库的高通量筛选,有力地促进了蛋白质工程的发展。以来自于铜绿假单胞菌的自转运蛋白Est A的羧基端结构域作为锚定区,构建脂肪酶LipA与EstA羧基端结构域的融合基因,并将融合基因插入到改造后的pACYC-Duet表达载体中,获得表面展示载体pBCCB-X1。将载体pBCCB-X1分别导入到大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600菌株中,以IPTG诱导融合基因的表达。分别用三丁酸甘油酯定性检测和pNPO定量检测诱导表达后的全细胞脂肪酶的水解活性。试验结果表明,脂肪酶LipA在大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600细胞表面均得到功能性展示,水解活性分别为(2.8±0.1)U/OD和(2.6±0.06)U/OD。脂肪酶LipA在大肠杆菌细胞表面的功能性展示,为后续高通量筛选LipA突变基因文库,奠定了坚实的基础。; 徐丽香王作镇舒正玉武海龙刘艳如李欣黄建忠; 关键词：大肠杆菌细胞表面展示枯草芽胞杆菌

不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶突变体的构建被引量：1: 2011年; 为获得不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶(ANL)突变体,在生物信息学分析基础上,对黑曲霉脂肪酶盖子结构域两侧铰链区的氨基酸残基进行了置换突变,获得两个黑曲霉脂肪酶突变体(ANL-Ser84Gly和ANL-Asp99Pro)。对不同浓度对硝基苯丁酸酯的水解活性检测结果表明:ANL-Ser84Gly的催化活性仍依赖油水界面,而ANL-Asp99Pro的催化活性不再依赖油水界面。底物特异性检测结果表明:较ANL而言,ANL-Ser84Gly的比活力显著降低,其水解对硝基苯棕榈酸酯、对硝基苯豆蔻酸酯、对硝基苯月桂酸酯和对硝基苯癸酸酯的比活力分别降低了29.8%,53.1%,60.1%和77.1%;而ANL-Asp99Pro水解对硝基苯棕榈酸酯的比活力提高了2.2倍。铰链区的突变破坏了突变体蛋白质分子ANL-S84G与ANL-D99P的二级结构作用力,使突变体分子的二级结构域更趋不稳定,从而导致了突变体分子的热稳定性显著降低。不依赖油水界面激活的脂肪酶突变体的构建,将有利于深入了解脂肪酶界面激活的分子机制。; 陈的陈的舒正玉林瑞凤薛龙吟蒋咏梅林瑞凤林跃鑫吴继光; 关键词：黑曲霉脂肪酶界面活性

热稳定性伯克霍尔德菌脂肪酶A突变体的筛选被引量：3: 2015年; 【目的】为更好地提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA在TMP纸浆造纸工艺中的应用,有必要利用蛋白质工程技术,提高其热稳定性。【方法】基于B-factor值筛选LipA多肽链中潜在的突变位点,利用迭代饱和诱变技术,构建突变文库,筛选热稳定性提高的突变体。【结果】利用上述方法,从4个突变文库中分别筛选到在55℃下,半衰期较野生型脂肪酶LipA分别提高了1.8倍、3倍、2.2倍和1.7倍的脂肪酶突变体。【结论】基于B-factor值选择突变位点,利用迭代饱和突变技术,快速筛选到热稳定性有显著提高的突变体。; 刘艳如邱黎清黄建忠赵丙春王作镇朱晓兰高媛媛舒正玉; 关键词：热稳定性 B值

福建省自然科学基金(2009J06013)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

福建省自然科学基金(2009J06013)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈