国家自然科学基金(81101291)
- 作品数：8 被引量：22H指数：2
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- 相关机构：浙江省人民医院复旦大学宁波市医疗中心李惠利医院更多>>
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- 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌整合子检测与耐药性分析被引量：9
- 2016年
- 目的了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中整合子的分布及可变区中基因盒的类型与细菌耐药性的关系,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法对宁波市医疗中心李惠利医院2012-2014年临床分离的336株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌第1、2类整合子进行筛查,并对整合子阳性菌株的可变区序列进行测序分析;采用WHONET5.6和SPSS18.0软件对数据进行统计分析。结果 336株临床菌株中第1类整合子阳性菌株共有42株,阳性率为12.5%;没有筛选到第2类整合子阳性菌株;42株整合子阳性菌株中,23株可变区基因盒为aadA6△-orfd,10株可变区基因盒为aadA6△-ISPa21-aadA6△-orfd,为氨基糖苷类抗菌药物的耐药基因,其余9株可变区未整合基因盒;整合基因盒aadA6△-orfd菌株组阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率均明显高于未整合基因盒菌株组(P<0.05);而整合基因盒aadA6△-ISPa21-aadA6△-orfd菌株组阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率介于上述两组之间;42株整合子阳性菌株对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、头孢吡肟、头孢他啶、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率分别为57.1%、73.8%、85.7%、80.9%、95.2%、83.3%和88.1%,均显著高于整合子阴性菌株(P<0.01)。结论耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌整合子的携带率相对较低,可变区所携带的耐药基因主要为氨基糖苷类抗菌药物的耐药基因,基因盒与菌株的耐药性呈高度相关,整合子可能还存在着其他机制参与耐药表型的产生。
- 李情操卢雯君吴巧萍魏取好
- 关键词：铜绿假单胞菌整合子可变区耐药性
- 第1类整合子中aadA2基因翻译起始位点的确定
- 2011年
- 目的 确定第1类整合子中aadA2基因能否从上游无核糖体结合位点的密码子ATG起始翻译并合成有功能的蛋白.方法 定点突变含有不同翻译起始密码子的aadA2基因盒,并连同上游的可变区启动子分别克隆入质粒pACYC184中,转化大肠埃希菌JM109,免疫印迹检测含有不同翻译起始密码子的aadA2基因的翻译产物,用微量肉汤稀释法检测链霉素对含有不同翻译起始密码子aadA2基因的大肠埃希菌JM109的最小抑菌浓度.结果 aadA2基因可从上游无核糖体结合位点的密码子ATG及上游具有核糖体结合位点的密码子GTG起始翻译,同时在GTG密码子下游还存在着起始翻译密码子,其翻译产物在免疫印迹中均可与抗氨基糖苷-3″-腺苷酰基转移酶多克隆抗体产生特异性杂交条带,并赋予宿主细菌对链霉素不同水平的耐药.结论 当位于第1类整合子第1位基因盒中,aadA2基因可从上游无核糖体结合位点的密码子ATG起始翻译并合成有功能的蛋白,这一结构特点使得整合入第1类整合子的基因盒,不需带有核糖体结合位点即可起始基因盒中相应读码框的翻译,从而有利于第1类整合子表达从外界环境中捕获的基因.
- 魏取好蒋晓飞李敏胡庆丰吕火祥周永列吕元
- 关键词：整合子基因盒耐药性
- 整合子的临床分布及其与细菌耐药表型相关性分析被引量：2
- 2020年
- 目的了解整合子阳性菌株在临床分离的常见病原菌中的分布情况,及其与细菌耐药表型的相关性,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,对宁波市李惠利医院2018年临床分离的400株常见病原菌进行第1、2和3类整合子筛查,并对整合子阳性和阴性菌株的耐药表型进行对比分析。结果 400株临床菌株中整合子阳性菌株为112例,阳性率为28%。其中第1、2类及同时阳性菌株分别为17.50%、4.75%和5.75%,没有筛选到第3类整合子;112株阳性菌株主要分布于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌;可变区测序结果显示,大肠埃希菌携带耐药基因主要为aadA5和aacA4,肺炎克雷伯菌携带耐药基因主要为aadA2、blaOXA-30和dfrA17,铜绿假单胞菌携带基因主要为aadA5和aacA8;鲍氏不动杆菌主要携带基因为afrA12;37株整合子阳性肺炎克雷伯菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、庆大霉素、左氧氟沙星、妥布霉素的耐药性均高于整合子阴性菌株(P<0.05),16株整合子阳性的铜绿假单胞菌对妥布霉素的耐药性高于整合子阴性菌株(P<0.05),10株整合子阳性的鲍氏不动杆菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药性高于整合子阴性菌株(P<0.05)。结论本地区临床菌株中整合子分离率较高,其中以第1和2类为主,主要分布于革兰阴性菌中,来源于呼吸和重症监护室(ICU)等院感易发科室,整合子的携带与宿主菌的耐药表型有着密切联系。
- 李情操吴巧萍屠艳烨卢雯君袁舒颖
- 关键词：整合子耐药表型
- 基于“乳头状试验”检测整合酶介导基因盒剪切频率方法的建立被引量：1
- 2012年
- 整合子可通过位点特异性重组捕获外源基因盒并使之表达，同时整合子可位于质粒上，或自身作为转座子的一个组成部分而参与转移，使耐药基因发生播散。整合子因其在细菌耐药性基因水平传播中的重要作用而受到研究者的关注，然而到目前为止，整合酶催化的基因盒剪切与整合的具体机制仍有待阐明。
- 魏取好蒋晓飞李敏胡庆丰吕火祥陈国强周永列吕元
- 关键词：基因盒剪切整合酶乳头状介导
- 非标记探针结合高分辨熔解曲线分析快速区分第1类整合子可变区启动子被引量：2
- 2017年
- 目的：建立一种基于非标记探针结合高分辨率熔解曲线分析快速区分第1类整合子可变区启动子种类的方法。方法 PCR扩增质粒pACW （PcW）、pACWP2（PcW－P2）含可变区启动子区域的DNA片段，再分别以纯化的PCR产物为模板，用扩增子高分辨率熔解曲线分析对P2启动子进行区分。以质粒 pACS （ PcS ）、pACH2（ PcH2）、pACH1（ PcH1）、pACW （ PcW ）及肺炎克雷伯菌HS07－68（PcWTGN－10）、HS05－1792（PcH2TGN－10）基因组DNA为模板，结合定点突变，PCR扩增获得分别含8种不同Pc启动子序列的DNA片段，再分别以纯化的PCR产物为模板，联合运用扩增子和非标记探针高分辨率熔解曲线分析对8种不同Pc启动子进行区分。运用上述方法对2004—2007年95株非重复分离自华山医院住院患者尿液标本的第1类整合酶阳性大肠埃希菌中可变区启动子进行分析，并与测序结果进行比对。结果 P2启动子扩增子熔解曲线的熔链温度（ Tm）值明显高于无活性的P2启动子，通过扩增子高分辨率熔解曲线分析可将两者区分开，95株大肠埃希菌109个第1类整合子中，有2个整合子中检测出P2启动子，与测序结果完全一致。8种不同的Pc启动子通过扩增子高分辨率熔解曲线分析分为3组：PcS、PcSTGN－10；PcW、PcWTGN－10；PcH1、PcH1TGN－10、PcH2、PcH2TGN－10。非标记探针高分辨率熔解曲线分析将8种不同的 Pc 启动子分为4组 PcS， PcH1；PcH2， PcW；PcSTGN－10， PcH1TGN－10；PcH2TGN－10，PcWTGN－10。联合运用扩增子和非标记探针高分辨率熔解曲线分析可将8种不同的Pc启动子相互区分开，95株大肠埃希菌109个第1类整合子中，共检测出5种不同的Pc启动子PcS，PcW，PcH1，PcH2TGN－10，PcWTGN－10，与测序结果完全一致。结论本研究成功建立了一种基于非标记探针结合高分辨率熔解曲线分析的方法，用于快速区分第1类整合子可变区启动�
- 魏取好李刚蒋晓飞胡庆丰吕火烊周永列关明吕元
- 关键词：整合子类聚合酶链反应高分辨率熔解曲线
- 肿瘤坏死因子α-308基因多态性与中心静脉导管相关脓毒症易感性与感染程度的关系被引量：5
- 2018年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α基因启动子308位点（TNF-α-308）多态性与中心静脉导管相关脓毒症（CRS）的易感性和严重程度的关系。方法选取自2015年1月至2017年5月开化县人民医院收治的105例CRS患者（CRS组），根据是否并发多器官功能障碍综合征（MODS）分为CRS并发MODS组（34例）和CRS非MODS组（71例）。同时选取同期210例导管无相关感染患者（病例对照组）和105例健康体检者（健康对照组）为研究对象，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）对TNF-α-308进行基因分型，分析TNF-α-308基因多态性与CRS易感性和严重程度的关系。采用SPSS 16.0软件对数据进行分析。结果CRS组、病例对照组和健康对照组三组间的TNF-α-308位点GG、GA、AA基因型频率和G、A等位基因频率比较，差异均无统计学意义（χ^2=2.262和0.907，P值均〉0.05）。CRS并发MODS组TNF-α-308位点基因型频率与CRS非MODS组、病例对照组、健康对照组相比，GG基因型频率明显降低，GA、AA基因型频率明显升高（χ^2=8.809、7.700和9.220，P值均〈0.05）。CRS并发MODS组TNF-α-308位点等位基因频率与CRS非MODS组、病例对照组、健康对照组相比，G等位基因频率明显降低，A等位基因频率明显升高（χ2=9.823、8.624和7.654，P值均〈0.05）。CRS非MODS组的TNF-α-308位点基因型频率（χ^2=0.852和0.975，P值均〉0.05）和等位基因频率（χ^2=1.022和0.535，P值均〉0.05）与病例对照组、健康对照组相比，差异均无统计学意义。CRS并发MODS组TNF-α-308的GA＋AA基因型比值比为2.664（95%CI 1.259～5.639）；A等位基因比值比为2.440（95%CI 1.326～4.490）。结论TNF-α-308位点基因多态性不是CRS的易感因素，但与CRS并发MODS相关。
- 苏良生沈国森方恺徐婉婧陈国强
- 关键词：肿瘤坏死因子Α基因多态性
- 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌第1类整合子可变区启动子检测及同源性分析被引量：2
- 2017年
- 目的了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CR-PA)中第1类整合子可变区启动子的种类和排列方式,分析其与介导的耐药基因表达之间的关系;并明确整合子阳性菌株的同源性情况。方法运用聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳以及测序的方法,以2012-2014年医院临床分离42株第1类整合子阳性CR-PA为对象,检测其可变区启动子和同源性。结果 42株实验菌株中强启动子PcS为2株、弱启动子PcW为2株,剩余38例皆为杂合1型启动子PcH1;位于Pc下游的P2启动子42例皆为-35到-10区间隔有14个碱基序列的无活性型的启动子;42株CR-PA经肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)基因分型,主要分为A、B、C、D、E 5型,其中A1型32株,A2型6株,B、C、D和E型各为1株,A型菌株主要是来源于ICU及神经外科。结论本地区临床分离CR-PA中第1类整合子可变区的启动子主要以杂合1型启动子PcH1为主,P2启动子全为无活性型;整合子阳性菌株的基因分型间呈现高度的同源性,可能存在着医院的克隆传播。
- 李情操吴巧萍屠艳烨赵玉杰魏取好
- 关键词：铜绿假单胞菌整合子同源性
- 应用高分辨熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子被引量：1
- 2014年
- 目的：应用高分辨率熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子。方法收集99株2011年8月—2012年8月非重复分离自临床标本的第2类整合酶阳性变形杆菌，以基因组DNA为模板，PCR扩增包含第2类整合酶基因突变位点一段60 bp的片段，高分辨率熔解曲线分析后测序验证。结果功能性第2类整合子与普通第2类整合子高分辨熔解曲线具有显著差别，测序结果与高分辨率熔解曲线法鉴定结果一致。结论应用高分辨率熔解曲线法可快速准确进行功能性第2类整合子的筛查鉴定。
- 李万翔魏取好胡庆丰陈素峰林晓伟吕火烊
- 关键词：整合子高分辨率熔解曲线整合酶
