上海市科学技术发展基金(98JC14023)
- 作品数：8 被引量：34H指数：4
- 相关作者：戚中田潘卫陈秋莉潘欣贺祥更多>>
- 相关机构：第二军医大学上海市传染病医院复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒NS5A区序列与干扰素疗效的关系被引量：4
- 2002年
- 目的 探讨上海地区丙型肝炎病毒 (HCV) 1b亚型慢性感染者的血清HCV非结构基因5A(NS5A)与干扰素 (IFN)疗效的关系。方法 收集上海地区 2 4例HCV1b慢性感染者在干扰素治疗前后及随访过程中的血清标本 ,定量检测治疗前血清HCVRNA ,用逆转录 聚合酶链反应方法扩增NS5A的干扰素敏感决定区 (ISDR)基因并进行测序和分析。另扩增干扰素应答类型不同的 3例患者治疗前后共 5株HCV病毒的NS5A全长序列 ,测序后作种系发生树分析及蛋白二级结构预测。结果 治疗前血清HCVRNA的定量结果显示 ,持续应答组的病毒滴度 (平均滴度 4 50× 1 0 4copies ml)明显低于复发组和无应答组 (平均滴度 1 82× 1 0 7copies ml)。 2 4例慢性丙型肝炎患者干扰素治疗前血清HCV的ISDR氨基酸序列与抗干扰素的HCV J株比较 ,1 3例为野生型 ,1 1例为中间型 ,无突变型。 6例完全应答者 3例感染的是野生型株 ,另 3例感染的是中间型病毒株。 5株HCV病毒的NS5A全长序列种系发生树显示 ,3种不同应答类型株在种系发生上分属 3个组别 ,无应答株与抗干扰素的HCV J株关系相近被归为 1组。蛋白质二级结构预测显示 ,上述病毒株NS5A蛋白在二级结构方面基本相似 ,仅在 2 2 55～ 2 2 89范围内有明显不同 ,这一区域与PKR结合域部分重叠。结论 HCVNS5A基因?
- 胡芸文吴瑛袁正宏闻玉梅唐美芳蒋伟伦
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒干扰素Α氨基酸序列
- hB1F与HNF1协同调控HBV增强子Ⅱ的功能被引量：3
- 2000年
- 人 Ｂ１结合因子（ｈｕｍａｎ Ｂ１ ｂｉｎｄｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ， ｈＢ１Ｆ）是本实验室克隆到的一个新的转录因子，它能够结合于ＨＢＶ增强子Ⅱ（ＥＮ Ⅱ）的Ｂ１区并反式激活其功能．对ｈＢ１Ｆ和其他反式激活ＥＮ Ⅱ的肝细胞核因子间在功能上的相互关系进行了研究．氯霉素乙酰转移酶（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ， ＣＡＴ）报告基因分析发现， ｈＢ１Ｆ与 ＨＮＦ３β， ＨＮＦ４间在激活 ＥＮ Ⅱ的功能上仅存在简单的加和性，而ｈＢ１Ｆ和ＨＮＦ１共同存在的情况下却能够产生很强的协同效应．进一步利用ＧＳＴｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ实验在体外证明了这两种因子间存在特异的直接相互作用．研究结果表明，ｈＢ１Ｆ与ＨＮＦ１协同地调控ＨＢＶ增强子Ⅱ的功能．
- 蔡彦宁李嵋周青孔玉英汪垣
- 关键词：乙型肝炎病毒HB1F
- 庚型肝炎病毒转基因小鼠的建立被引量：1
- 2000年
- 利用受精卵原核显微注射的方法 ,产生了含有HGV结构蛋白C、E1、E2及部分非结构蛋白NS2、NS3的转基因小鼠。得到 10只founder小鼠 ,其中有 3只founder小鼠与正常小鼠交配后得到了整合有外源基因的F1代阳性小鼠。RT PCR的结果显示 ,外源基因可在founder小鼠及F1代小鼠的血液有核细胞及肝细胞内转录 ;组织病理学检查显示 ,某些转基因小鼠的肝细胞出现了水样变、脂肪变性及轻微炎性反应等病理学改变 ,但与同一品系的正常小鼠相比 。
- 胡卫江戚中田胡以平朱分禄李建秀陈景山
- 关键词：庚型肝炎病毒转基因小鼠
- HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建与筛选被引量：10
- 2001年
- 目的 探讨噬菌体随机肽展示技术在筛选和鉴定病毒抗原序列研究中的应用前景。方法 用噬菌粒展示载体pCANTAB5X ,构建HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库。用抗 HCV核心单独阳性的血清对该库进行 4轮筛选 ,获得多个阳性克隆 ,测定和分析 8个杂交阳性克隆的DNA序列。结果 构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,噬菌体滴度为 2× 10 12 TU/ml(转化单位 /ml)。所测定的 7个阳性序列中的 6个为HCV核心蛋白序列 ,这些序列均含有与免疫筛选结果相似的HCV核心抗原序列。另一个为大肠杆菌nrfa基因。结论 所建的噬菌体文库有足够大的库容和较好的随机性 ,可以从该文库中筛选出正确的HCVC抗原序列。噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选 ,并具有简便、快速。
- 潘卫戚中田吴晓兰贺祥陈秋莉潘欣
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白病毒抗原
- HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建与筛选
- 2001年
- 潘卫戚中田吴晓兰贺祥陈秋莉潘欣
- 关键词：噬菌体核心蛋白HCV肽库
- 丙型肝炎病毒1b亚型E2区序列与干扰素治疗应答的关系
- 2004年
- 目的探讨上海地区丙型肝炎病毒(HCV)1b亚型感染者E2区的高变区1(HVR1)和高变区2(HVR2)、双链RNA激活的蛋白激酶真核翻译启动因子磷酸化同源区域(PePHD)及其邻近区域的基因序列与干扰素应答的相关性。方法收集上海地区24例HCV1b慢性感染者在α干扰素治疗前后及随访过程中的血清标本,用逆转录聚合酶链反应扩增E2区的HVR1、HVR2、PePHD及其邻近区域的基因并进行测序和氨基酸同源性分析。结果治疗前的HVR1区氨基酸序列高度变异,基于HVR1序列的种系发生树提示序列变化与干扰素应答类型无关。持续应答组(SR)、无应答组(NR)和复发组(TR)治疗前的HVR2区平均氨基酸变异数分别为2.0、1.0和1.5,统计学分析显示SR组与NR组差异有显著性(t=3.098,P<0.05)。治疗前的PePHD序列高度保守,无1例存在氨基酸变异。观察4例NR患者治疗过程中的PePHD序列,也未发现有任何氨基酸的突变。进一步比较PePHD邻近区域的氨基酸序列发现存在个别位点的变异(平均氨基酸变异SR组6.67,NR组5.75,TR组7.43),但变异的多少与疗效无关(SR组∶NR组t=1.413,P=0.195;SR组∶TR组t=1.706,P=1.107;TR组∶NR组t=0.682,P=0.504)。结论与HCVE2基因的HVR1区、PePHD区及其邻近区域序列与患者对干扰素的应答无相关性比较。
- 胡芸文唐美芳蒋伟伦袁正宏
- 关键词：丙型肝炎病毒干扰素应答
- 体内与转染细胞中乙型肝炎病毒株复制特性的相关性被引量：8
- 2001年
- 目的 比较不同乙型肝炎病毒 (HBV)株在体内及转染细胞中复制特性是否相符。方法 以核酸杂交定量和聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)测定 5例孕妇血清中HBVDNA含量 ,并测定乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)和乙型肝炎e抗原 (HBeAg)含量。分别克隆血清中的HBV基因组转染细胞 ,检测培养上清液中HBsAg和HBeAg表达水平 ,并以Southern印迹及核酸杂交检测转染细胞内、外HBVDNA复制水平。结果 转染细胞内、外HBVDNA复制水平与相应血清HBVDNA量呈正相关趋势。转染细胞表达的病毒抗原水平与相应血清中病毒抗原含量也呈正相关趋势。结论 感染者血清中HBVDNA和病毒抗原的含量与毒株在细胞中复制和抗原表达水平有相符趋势。HBV不同毒株在转染细胞中的复制可基本反映体内毒株的复制特性。
- 武力何丽芳蒋伟伦邱申熊闻玉梅
- 关键词：乙型肝炎E抗原病毒复制
- HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建被引量：11
- 2000年
- 目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。
- 潘卫戚中田贺祥陈秋莉潘欣
- 关键词：核心蛋白丙型肝炎HCV
