国家教育部博士点基金(20050159019)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：于秉治赵鸿梅徐小燕张哲滕秋艳更多>>
- 相关机构：中国医科大学辽宁省人民医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 149位丝氨酸在CDC25B诱导小鼠卵母细胞减数分裂中的功能被引量：3
- 2008年
- 目的:研究小鼠卵母细胞减数分裂过程中,149位丝氨酸对CDC25B磷酸酶功能的影响。方法:将野生型CDC25B-WT和突变型CDC25B-S149A体外转录成mRNA,显微注射到小鼠GV期卵母细胞中,观察减数分裂恢复情况,同时检测了各组卵母细胞CDC2-Tyr15的磷酸化状态。结果:在小鼠卵母细胞减数分裂过程中,野生型CDC25B能促进减数分裂的重启动,活化有丝分裂促进因子,其突变体CDC25B-S149A对减数分裂的诱导作用丧失,不能活化有丝分裂促进因子。结论:149位丝氨酸的完整是CDC25B磷酸酶发挥调节功能所必需的。
- 赵鸿梅张阳徐晓燕于秉治
- 关键词：卵母细胞减数分裂GVBDCDC25B
- 小鼠Cdc25B核输出序列被引量：2
- 2007年
- 为探讨小鼠卵母细胞中Cdc25B(cell division cycle 25 homolog B)核输出序列在卵母细胞G2/M转换过程中的调控机制,应用显微注射方法将Cdc25B的野生型、N末端缺失1～51位氨基酸片段(Cdc25B-Δ51)、1～65位氨基酸片段(Cdc25B-Δ65)突变体的mRNA和pEGFP-Cdc25B-WT、pEGFP-Cdc25B-Δ51、pEGFP-Cdc25B-Δ65的融合质粒显微注射到含有完整生发泡的小鼠卵母细胞中,观察不同注射组小鼠卵母细胞发生生发泡破裂的情况及蛋白质亚细胞定位。结果显示Cdc25B-Δ51及Cdc25B-Δ65都丧失了诱导小鼠卵母细胞减数分裂的能力;同时亚细胞定位研究表明在G2期野生型Cdc25B主要分布在细胞浆中,Cdc25B-Δ51在核浆均有分布,Cdc25B-Δ65则主要分布于细胞核中。研究结果表明Cdc25B在52～65位氨基酸之间存在核输出序列(nuclear export sequence,NES),NES参与的核转运机制作为一种重要的调控机制控制着细胞的生理进程;N末端的氨基酸对减数分裂的重启动起促进作用。
- 赵鸿梅崔城徐小燕于秉治
- 关键词：CDC25B减数分裂
- 小鼠Cdc25B融合蛋白构建和表达被引量：3
- 2007年
- 目的研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达。方法应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5′及3′端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达载体PGEX4T-2,构建成PGEX4T-2-Cdc25B融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21后,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导进行目的蛋白表达。结果通过双酶切、电泳分析及测序证明成功构建了Cdc25B融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹(Westernblot)显示,相对分子量为53KD的蛋白谱带,与预期一致。结论成功构建并表达了Cdc25B-N末端缺失的基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为近一步研究Cdc25B的功能提供基础依据。
- 赵鸿梅滕秋艳张哲于秉治
- 关键词：CDC25B基因表达聚合酶链式反应
- 149位丝氨酸对cdc25b蛋白在小鼠卵母细胞中定位的影响
- 2008年
- 目的:探讨149位丝氨酸使cdc25b蛋白诱导减数分裂功能丧失的机制。方法:应用免疫荧光观察GV期、G2/M转换期卵母细胞中cdc25b蛋白的定位情况;应用显微注射将pEGFP-cdc25b-wt、pEGFP-cdc25 b-s149a的融合质粒及空载体质粒显微注射到含有完整生发泡的小鼠卵母细胞中,观察不同显微注射组小鼠卵母细胞中蛋白亚细胞定位。结果:免疫组化结果显示GV期卵母细胞中cdc25b蛋白主要分布在细胞浆中,这与显微注射野生型cdc25b结果一致,G2/M转换期卵母细胞中可以观察到蛋白的核聚集,cdc25b-s149a在细胞核与细胞浆中均有分布。结论:看似静止的卵母细胞中cdc25b蛋白处于核浆穿梭的动态平衡,149位丝氨酸的磷酸化影响蛋白的核输出速率,从而使蛋白的定位发生改变。
- 赵鸿梅徐小燕于秉治
- 关键词：CDC25B减数分裂点突变亚细胞定位
