国家自然科学基金(81101229)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 烟曲霉β-1,3-葡聚糖合成酶调节亚基Rho1基因敲除及功能初步分析
- β-1,3-葡聚糖是真菌细胞壁的主要成份,其合成酶的调节亚基Rho1对维持细胞壁完整性及真菌形态具有重要意义,而Rho1对烟曲霉形态及生理功能的影响及可能调控机制仍不清楚。通过构建打靶载体,利用根癌农杆菌介导的烟曲霉转化...
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- 关键词：烟曲霉基因敲除
- 长片段融合PCR在构建烟曲霉rho1基因回补株中的应用被引量：1
- 2013年
- 目的融合PCR是一种常用的构建重组片段或重组质粒的手段,但长片段融合PCR的难度较大。文中将探讨长片段融合PCR过程中引物设计及扩增条件对产物的影响。方法以构建烟曲霉rho 1基因回补株为例,采用融合PCR的方法扩增重组片段(长达6.5 kb),在引物设计时引入不同大小的同源区,并设置不同的扩增体系。结果当设计引物的同源区为35 bp,选用具有高扩增效率、高保真性的DNA聚合酶,以及各片段在融合PCR反应体系中的浓度为15 ng/μL时,实现了长达6.5 kb的片段扩增并完成了烟曲霉rho 1回补株的构建。结论在合适的PCR引物设计、片段浓度配比及聚合酶条件下,长片段融合PCR在丝状真菌的基因敲除及回补株的构建中是一种非常有效的工具。
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- 关键词：融合PCR烟曲霉
