国家高技术研究发展计划(2001AA213071-4)
- 作品数：4 被引量：34H指数：3
- 相关作者：金宁一秦晓冰尹革芬鲁会军郑敏更多>>
- 相关机构：军事医学科学院通辽市畜牧兽医科学研究所山西省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪2型圆环病毒核酸疫苗的构建、鉴定和表达被引量：9
- 2006年
- 以pVAX1为真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙古株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了pVAX1-ORF2、pVAX1-IL18-ORF2、pVAX1-ORF2-ORF1和pVAX1-IL18-ORF2-ORF1等4个重组质粒作为核酸疫苗。将这4个重组核酸质粒分别酶切鉴定后,转染BHK-21和PK-15细胞进行RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting检测。结果表明,重组核酸质粒构建正确,并能进行表达。
- 秦晓冰金宁一付明山马鸣潇尹革芬金扩世李昌
- 关键词：猪2型圆环病毒核酸疫苗RT-PCR间接免疫荧光
- 猪2型圆环病毒核酸疫苗的接种Balb/c小鼠实验免疫研究被引量：22
- 2005年
- 为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。用它们免疫6-8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾。用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量。统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAx1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P<0.05),并以pVAX-1-IL18ORF2ORF1数值较高。结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究。
- 金宁一秦晓冰郑敏鲁会军张洪勇尹革芬葛淑敏
- 关键词：BALB/C小鼠猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫研究血清抗体效价接种
- 猪2型圆环病毒与O型口蹄疫病毒二联重组鸡痘病毒的构建和筛选被引量：3
- 2009年
- 以pUTA2LacZ为真核表达载体,以中国流行株O型口蹄疫病毒(FMDV)NY00株结构蛋白前体P1基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了2个重组质粒作为中间转移质粒,标记为pUTALP1-ORF2和pUTALP1-ORF2ORF1。将这2个重组转移质粒分别酶切鉴定后,与鸡痘病毒野毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞。结果显示,重组核酸质粒构建正确,并能进行表达。经5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)加压筛选,挑取单个蚀斑,3次纯化,获得2株重组毒vpUTALP1-ORF2ORF1和vpUTALP1-ORF2。结果表明,这2株重组鸡痘毒在电镜下可形成完整的病毒粒子。
- 秦晓冰金宁一牛晋国
- 猪2型圆环病毒核酸疫苗的构建、鉴定和表达
- 本研究以pVAX1为真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒作为核酸疫苗,它们是:pVAX1-ORF2、pVAX1-IL180RF2、pVAX1-ORF...
- 秦晓冰金宁一付明山马鸣潇尹革芬金扩世李昌
- 关键词：核酸疫苗RT-PCR间接免疫荧光WESTERNBLOT
- 文献传递
- 口蹄疫病毒3AB基因的克隆与原核表达
- 2006年
- 根据口蹄疫流行毒株设计一对包含3AB部分基因编码区的特异性引物,扩增出3AB基因550 bp的特异带,并将纯化的扩增产物克隆到pM D 18-T载体上。再用设计的酶切位点将3AB基因分别连接到两种原核表达载体上,构建了重组质粒pETCK S-3AB及pET 28a-3AB,转入BL 21菌中进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,3AB基因在两种表达系统中均高效表达。对表达的蛋白通过包涵体及切胶纯化的方法进行纯化,获得了高纯度的3AB蛋白。
- 鲁会军郑敏韩松李昌金宁一
- 关键词：口蹄疫病毒3AB基因克隆
