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弓形虫感染对子一代雄性小鼠脑部多巴胺水平的影响: 2015年; 目的探讨弓形虫感染对子一代雄性小鼠发育期脑部多巴胺水平的影响。方法 36只雌性ICR小鼠随机分为健康对照组和弓形虫感染组,每组18只。感染组每鼠分别经口感染弓形虫PRU弱毒株10个包囊。感染后90 d,与健康雄性ICR小鼠按1∶1交配。每组各取2只交配成功的母鼠于孕20 d时剖腹取胎鼠。其他交配成功的母鼠自然分娩。应用高效液相色谱-电化学法对孕20 d的雄性胎鼠及出生后14 d和63 d的雄性仔鼠(各6只)进行脑皮层、小脑、海马和纹状体多巴胺含量的测定。结果感染组小鼠感染后死亡3只,余15只感染鼠中,仅6只交配成功。2只于孕20 d剖腹取胎鼠12只,其中雄性7只;4只自然分娩,仔鼠存活21只,其中雄性15只。18只对照组小鼠均交配成功,2只于孕20 d时剖腹取胎鼠23只,其中雄性12只;16只自然分娩,仔鼠存活179只,其中雄性92只。感染组和对照组雄性胎鼠小脑区多巴胺含量分别为(413.25±21.78)ng/g和(346.30±51.83)ng/g,感染组显著高于对照组(P<0.01),两者皮层区多巴胺含量差异无统计学意义(P>0.05)。感染组出生后14 d和63 d,雄性仔鼠皮层区[(462.50±24.80)ng/g和(1 215.77±113.64)ng/g]、小脑区[(271.55±26.19)ng/g和(1 328.82±39.62)ng/g]、海马区[(225.78±24.17)ng/g和(1 322.70±58.34)ng/g]和纹状体区[(455.23±61.53)ng/g和(991.32±54.31)ng/g]的多巴胺含量均显著高于相应对照组(P<0.05或P<0.01)。结论弓形虫感染能引起子一代雄性小鼠发育期脑部多巴胺水平显著升高。; 周永华朱虎平许金俊张英毛爱民杨静范峰许永良赵中兴陶建平; 关键词：刚地弓形虫多巴胺子一代

犬瘟热病毒疫苗变异株的分离及其P1蛋白的表达、鉴定被引量：2: 2012年; 从河北某宠物医院病犬的脾脏中分离到1株犬瘟热病毒,H基因测序结果表明,该分离株与疫苗株的同源性为99.5%,有3个氨基酸突变,但不影响其糖基化位点。将该株病毒P1基因克隆到pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下获得大小为50ku,可溶性表达的P1重组蛋白。Western blotting、间接ELISA试验结果显示表达产物能被犬瘟热高免血清所识别,表明其具有良好的反应原性,有望用于犬瘟热的检测。; 于萍萍贾红侯绍华袁维峰郭晓宇崔治中朱鸿飞; 关键词：犬瘟热病毒变异株抗原性

重配H9N1亚型流感病毒感染性克隆的构建及鉴定: 2012年; 为了研究禽流感病毒的反向遗传,试验采用霍夫曼发明的8质粒拯救系统,将分离得到的AIV Isolate3(H9N2)基因组,通过RT-PCR得到HA基因,并克隆到以pcDNA3质粒为骨架自行构建的双向转录/表达载体pHW2008上,得到HA转录/表达质粒,再将HA表达质粒与构建好的包含A/Puerto Rico/8/34(H1N1)7个内部基因双向转录/表达质粒共转染人肾上皮细胞(293T)与犬肾细胞(MDCK)混养细胞。结果表明:试验成功构建了重配H9N1亚型流感病毒减毒株。; 龙川赵权田明尧杨晓琳李洋任静强吕亚楠王成颜雯金宁一; 关键词：禽流感病毒病毒拯救

反向遗传学技术在狂犬病病毒研究中的应用被引量：2: 2010年; 狂犬病是一种重要的人兽共患病,病死率几乎达100%,是全球性的重要公共卫生问题。近年来,尽管对狂犬病的防控取得了很大进展,但狂犬病病毒致病机理的研究仍有待深化。反向遗传学是一门新兴学科,近年来已广泛应用于狂犬病病毒研究中的各个领域。本文着重介绍反向遗传学技术在狂犬病病毒基因结构、致病机理、新型载体和疫苗研发中的应用,并对其未来发展方向进行了展望。; 齐瑛琳杨松涛金宏丽赵丽丽冯娜夏咸柱; 关键词：狂犬病病毒

扬州及周边地区动物弓形虫病流行病学调查及虫株遗传多样性分析: 本文采用PCR方法对就诊于扬州大学动物医院81例门诊病死猪及51例流浪猫进行弓形虫检测,检测为阳性的病料,采用PCR-RFLP方法对弓形虫SAG1,5'+3'SAG2、GRA6、PK1、alt.SAG2、...; 候照峰臧传佼朱鸿飞贾红周永华陶建平; 关键词：刚地弓形虫流浪猫基因分型

江苏省先天性畸胎弓形虫分离株和HIV-弓形虫共感染患者弓形虫基因型分析被引量：2: 2017年; 目的鉴定分离自江苏省先天性畸胎的弓形虫虫株(KS株)和HIV-弓形虫共感染患者刚地弓形虫的基因型。方法抽提江苏省先天性畸胎弓形虫分离株(KS株)速殖子和1例HIV-弓形虫共感染患者的全血DNA,选择11个基因位点,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)进行基因型鉴定。结果自江苏省先天性畸胎分离的弓形虫虫株和1例HIV-弓形虫共感染患者的全血DNA样本中均获得完整分型条带,经鉴定均为弓形虫基因型Ⅰ型。结论Ⅰ型刚地弓形虫可能是江苏地区引起妊娠异常结局妇女和HIV-弓形虫共感染患者的优势基因型虫株。; 周永华侯照峰马以武王学东许永良陶建平; 关键词：刚地弓形虫 HIV

非洲猪瘟P72基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性鉴定被引量：2: 2012年; 本研究旨在通过在Bac to Bac系统中表达非洲猪瘟病毒(ASFV)的P72基因,为进一步研究P72基因的结构、功能和免疫学特性奠定基础。本研究从含P72全长基因的菌株pGEX-6p-1-P72中扩增出P72基因全序列1941bp,将扩增的基因连接于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建重组质粒pFastBac HTa-P72,转化至感受态DH10Bac中,获得重组杆粒rBac-mid-P72,再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。经Western blotting和夹心ELISA分析,结果表明,P72在昆虫细胞Sf9中获得正确表达,重组P72蛋白可被特异性兔抗ASFV P72血清、P72单抗识别。结果提示,Bac to Bac系统表达的P72重组蛋白特异性强、活性稳定,具有良好的抗原性,为快速诊断ASF提供良好的候选抗原。; 柏丽华侯绍华贾红袁维峰郭晓宇梁欠欠朱鸿飞; 关键词：非洲猪瘟 BAC BAC 抗原性

弓形虫荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用被引量：11: 2015年; 根据Gen Bank中龚地弓形虫529 bp重复序列设计引物,以弓形虫RH株基因组DNA为模板,常规PCR扩增出长度212 bp的特异性保守序列,将其克隆到p GEM-T Easy载体中构建重组质粒标准品;以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立弓形虫荧光定量PCR检测方法。将该方法用于临床病死猪的弓形虫检测。结果表明:用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,溶解曲线特异相关系数0.997,平均试验间变异系数2.30%,能检出约0.05个速殖子;检测弓形虫YZ-1株与YZ-2株均为阳性,而检测水牛梭形肉孢子虫、犬等孢球虫、柔嫩艾美耳球虫基因组DNA均为阴性;检测24头病死猪,弓形虫阳性率为70.8%,略高于常规PCR方法的检出率(66.7%),但检测的69个组织样品中,荧光定量PCR方法的检出率(50.7%)明显高于常规PCR方法的检出率(34.8%)。; 候照峰王尚尚贾红臧传佼朱鸿飞周永华陶建平; 关键词：弓形虫

悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定被引量：2: 2012年; 本试验旨在研究重组牛γ-干扰素(rBovIFN-γ)在Sf21细胞中高效表达及其特性鉴定。利用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出不含信号肽的BovIFN-γ基因片段。将其克隆到pFast-BacTMHTA中构建重组质粒pFastBacTMHTA-BovIFN-γ。然后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-BovIFN-γ。转染Sf21昆虫细胞后获得重组杆状病毒rBac-BovIFN-γ,应用Sf21细胞悬浮培养技术大量表达rBov-IFN-γ。利用Western blotting、质谱分析(MS)、抗病毒试验等对rBovIFN-γ进行鉴定。Western blotting分析显示,rBovIFN-γ具有良好的反应原性;MS分析表明,rBovIFN-γ的6个肽段序列与牛IFN-γ的氨基酸序列完全匹配,在蛋白质质谱数据库中搜索结果为牛IFN-γ;MDBK/VSV抗病毒试验显示,rBovIFN-γ具有很高的抗病毒活性,为1.05×105 IU/mg。; 王海春贾红袁维峰侯绍华郭晓宇鑫婷朱鸿飞; 关键词：杆状病毒质谱分析抗病毒活性

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“十一五”国家科技支撑计划(2010BAD04B02)

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