国家自然科学基金(81201163)
- 作品数：7 被引量：30H指数：3
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- 相关机构：广州医科大学南华大学广州市妇女儿童医疗中心更多>>
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- NDM-1阳性细菌实时荧光LAMP方法的建立及应用被引量：2
- 2016年
- 目的建立一种实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法快速检测新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)阳性细菌。方法根据NDM-1基因序列设计4套引物并进行优化,对LAMP反应中的荧光染料SYTO-9浓度进行优化,同时考察该方法的检出限和特异性。利用本方法检测72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌。结果本研究建立的实时荧光LAMP方法,其荧光染料SYTO-9的最佳浓度为4μmol/L;63℃恒温扩增35 min可检出101拷贝/μL的标准阳性模板;特异性较好;对72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌检出的阳性率为16.7%(12/72),12株NDM-1阳性细菌经测序验证,准确率为100%。结论本研究建立的检测NDM-1阳性细菌的实时荧光LAMP方法具有快速、操作简便、特异性好、敏感性高、准确、可靠等优点,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合临床NDM-1阳性细菌的快速检测。
- 陈斌杨银梅钟志敏雷秀霞刘大渔徐邦牢
- VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统检测亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星的准确性评估被引量：5
- 2016年
- 目的评价VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统（简称VITEK 2 Compact）检测亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星药物敏感性试验结果的准确性,并了解其16S r RNA甲基化酶基因的存在情况。方法分别采用VITEK 2 Compact、纸片扩散法、E-test法检测72株临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌和15株亚胺培南敏感的鲍曼不动杆菌对阿米卡星的敏感性,同时采用聚合酶链反应（PCR）检测其16S r RNA甲基化酶arm A基因。结果在72株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中,纸片扩散法和E-test法的结果均一致;有69株细菌VITEK 2 Compact检测最低抑菌浓度（MIC）为4~≥64μg/m L,而纸片扩散法和E-test法结果均为耐药;有3株细菌VITEK 2 Compact检测MIC为≤2μg/m L,纸片扩散法和E-test法有2株敏感;有59株细菌出现双圈耐药现象。在纸片扩散法及E-test法检测为阿米卡星耐药的70株鲍曼不动杆菌中,arm A基因阳性率为92.9%（65/70）。15株亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌中,VITEK 2 Compact对阿米卡星的MIC均≤2μg/m L,纸片扩散法和E-test法的阿米卡星药物敏感性试验结果与VITEK 2 Compact一致,均为敏感。结论 VITEK 2 Compact在检测耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对阿米卡星的敏感性时会出现不准确的结果,双圈耐药现象可能与携带16S r RNA甲基化酶基因arm A有关。
- 杨银梅陈斌彭颖仪叶惠芬陈惠玲黄小媛
- 关键词：鲍曼不动杆菌亚胺培南阿米卡星
- Carba NP试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌和鲍氏不动杆菌的应用价值研究被引量：2
- 2017年
- 目的评价Carba NP试验用于产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌和鲍氏不动杆菌的应用价值。方法将2014年-2015年临床分离的耐碳青霉烯类抗菌素肠杆菌科细菌39株和鲍氏不动杆菌37株,采用Carba NP试验检测碳青霉烯酶;并采用PCR方法检测碳青霉烯酶相关基因,评价该试验的灵敏度和特异性。结果 26株肠杆菌科细菌PCR检出碳青霉烯酶相关基因,Carba NP试验检测肠杆菌科的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为96.1%、94.8%、92.5%和97.3%;21株鲍氏不动杆菌PCR检出碳青霉烯酶相关基因,Carba NP试验检测鲍氏不动杆菌的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为4.7%、100.0%、100.0%和45.9%。结论Carba NP试验能快速检出携带KPC、NDM-1、IMP-1和VIM-2基因肠杆菌科细菌的碳青霉烯酶,未能检出携带OXA-23基因的鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶。
- 陈斌杨银梅刘清华徐邦牢
- 关键词：CARBA碳青霉烯酶碳青霉烯酶基因
- 微流控芯片上的肿瘤组织微阵列构建被引量：8
- 2015年
- 研发了一种多层复合微流控芯片,包含64细胞培养微孔阵列,该微阵列集成了细胞进样、水凝胶三维支架形成和持续灌流培养的过程。以MCF-7乳腺癌细胞为模型,连续培养中监测细胞存活率、细胞密度、增殖率和细胞内p H值,并同时进行冰冻切片后免疫组化染色。实验结果显示,乳腺癌细胞在水凝胶微球中增殖形成了类组织结构。E-cadherin及Vinculin在细胞内、细胞间隙均出现较强表达,提示水凝胶微球中细胞建立了细胞-细胞、细胞-间质连接。芯片上连续培养15天内细胞存活率保持在85%以上,细胞增殖率随时间延长而递减。细胞内p H值检测显示芯片3D培养细胞内部呈现明显的酸化,其程度随着细胞密度增大而增加。这种芯片肿瘤组织微阵列构建方法简单高效,有望发展成为肿瘤研究的有力工具。
- 王伟鑫刘未平吴斌梁广铁刘大渔
- 关键词：微流控芯片微环境三维细胞培养
- 应用直接重组酶聚合酶扩增技术快速检测烟曲霉菌被引量：1
- 2018年
- 目的通过建立重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)直接检测标准烟曲霉菌株的方法,探讨其无需样本前处理的可行性。方法针对标准烟曲霉核酸序列保守区域设计RPA扩增引物,使用100、10^(-1)、10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)麦氏浊度的标准烟曲霉菌液作为无样本前处理组进行直接RPA扩增;同时,分别采用柱式法、磁珠法、氯化苄法提取烟曲霉菌DNA作为样本前处理对照组并进行RPA扩增,最后,应用2%琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析。结果标准烟曲霉菌的100、10^(-1)、10^(-2)及10^(-3)麦氏浊度均可于39℃30min内扩增出目的条带;三种提取方法结果分别为:柱氏法(13.8±0.83)ng/μl,磁珠法(11.5±2.25)ng/μl,氯化苄法(64.9±1.31)ng/μl,三种方法均能扩增出目的条带,其中氯化苄法产出率较高(64.9±1.31)ng/μl。结论 RPA可以扩增出未经前处理(核酸提取)的样本,具有快速简便的优点,为检测烟曲霉菌提供了一个有效的工具。
- 王秋平黄恩奇杨银梅钟志敏陈斌
- 关键词：烟曲霉菌DNA提取
- 重组酶聚合酶等温扩增快速检测结核分枝杆菌被引量：12
- 2016年
- 目的建立一种基于重组酶聚合酶介导的等温扩增技术(RPA)快速检测结核分枝杆菌的方法。方法根据结核分支杆菌基因保守序列设计的2对引物和特异性寡核苷酸探针,以结核分枝杆菌阳性菌株和其他5种非结核分枝杆菌基因组DNA为模板,考察该方法的检测灵敏度和特异性。结果 RPA快速检测结核分枝杆菌方法仅需15 min,检测灵敏度为可检出0.043 ng/μl的基因组DNA;5种非结核分支杆菌均不能扩增,特异性较高。结论本研究建立了结核分枝杆菌的RPA快速检测方法,具有快速、简单、成本较低等优点,为结核分枝杆菌的快速检测提供一个新的工具。
- 陈斌杨银梅钟志敏徐邦牢
- 关键词：结核分支杆菌
- 高分辨率熔解曲线分析技术检测苯丙酮尿症患者的苯丙氨酸羟化酶基因突变
- 2013年
- 目的 应用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术检测苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变.方法 利用PCR扩增13例苯丙酮尿症（PKU）患者的苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因第6、7、11及12外显子,然后对PCR产物进行HRM分析,通过DNA测序对HRM结果进行验证.结果 在13例PKU患者的26个PAH等位基因中共检测出5种不同突变基因,总检出率为38.5％.常见的突变类型是R243Q和A434D.检测出两种多态性位点为Q232Q和V245V.HRM分析结果与测序结果完全一致.结论 HRM技术具有简单、快速、易操作、准确等优点,可用于PKU患者PAH基因突变筛查.
- 陈斌严伟张琼邹晓明凯华江剑辉周小棉
- 关键词：苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶点突变高分辨率熔解曲线
