江苏省自然科学基金(BK2006728)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：黄祖瑚张璐卢山王世霞李军更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 禽流感HA基因密码子优化的DNA疫苗构建及其免疫原性的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建H5N1亚型禽流感病毒株密码子优化的血凝素(HA)DNA疫苗并研究其免疫原性。方法应用MacVector软件分析H5N1亚型禽流感病毒A/VietNam1203/04株HA(H5-VNHA)基因序列,对这些序列进行密码子优化处理,人工合成优化后的H5-VNHA基因。将密码子优化H5-VNHA基因与pSW3891质粒连接,并以人组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)信号肽取代H5-VNHA信号肽,构建成表达H5-VNHA基因的重组质粒,命名为HA-VN.tPA(即密码子优化的H5-VNHA基因DNA疫苗)。以HA-VN.tPA转染293T细胞,应用蛋白质印迹法检测转染细胞中HA蛋白的表达。以HA-VN.tPA对2只新西兰兔进行DNA免疫,用ELISA方法检测分析免疫后兔血清中HA特异性抗体的产生。结果密码子优化的H5-VNHA基因中哺乳动物细胞偏爱的密码子频率高于野生型H5-VNHA基因。蛋白质印迹法分析结果表明,HA-VN.tPA转染293T细胞后,细胞裂解液中检测出HA蛋白的表达。ELISA分析结果表明,以HA-VN.tPA免疫3次后,实验兔体内产生了较高水平的HA特异性抗体(血清中平台期抗体滴度达1:13500)。结论成功构建了H5N1亚型禽流感病毒密码子优化的HA基因DNA疫苗,该疫苗可引导免疫后宿主体内产生高滴度特异性抗体。
- 张春华张璐王世霞李军黄祖瑚卢山
- 关键词：密码子
- H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的研发一种具有良好免疫原性的H3N8型马流感血凝素(hemagglutinin,HA)核酸疫苗。方法根据马A型流感病毒A/Equine/Xinjiang/3/08(H3N8)的HA蛋白序列,经密码子优化后化学合成能够表达相应蛋白的基因片段,并将该片段克隆到核酸疫苗载体pJW4303中,构建带有天然信号肽的H3HA核酸疫苗,命名为H3HA/XJ3-08-wt;进一步对HA基因进行修饰,以人组织纤维蛋白酶原激活剂(human tissue plasminogen activator,tPA)取代H3HA天然信号肽,命名为H3HA/XJ3-08-tPA,或切除部分HA的基因片段使之只表达HA蛋白的胞外域,命名为H3HA/XJ3-08-dTM。用这3种重组质粒分别转染293T细胞,蛋白表达经蛋白质印迹检测得到确认。采用电转录法免疫新西兰白兔。ELISA方法检测免疫后兔血清中抗H3HA抗体滴度,血凝抑制实验(hemagglutination inhibition,HI)检测保护性抗体水平。结果 3种H3HA核酸疫苗均可在293T细胞中高效表达,并能够在新西兰白兔体内诱导产生特异性抗H3HA抗体,HI检测到不同水平的保护性抗体。其中以H3HA/XJ3-08-tPA的免疫原性最强。结论新构建的H3N8型马流感血凝素核酸疫苗具有良好的免疫原性,为此类疫苗的进一步研发奠定了基础。
- 许莹郭巍王世霞黄文强张璐卢山周建华相文华黄祖瑚
- 关键词：血凝素类
