国家自然科学基金(30471101)
- 作品数：7 被引量：57H指数：3
- 相关作者：张金文王蒂陈国梁郭志鸿杨波波更多>>
- 相关机构：甘肃农业大学延安大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省教育厅省级重点实验室科研与建设计划项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 马铃薯淀粉合成酶融合基因植物表达载体构建被引量：2
- 2007年
- 通过反义抑制马铃薯（Solanum tuberosumL．）块茎淀粉合成酶GBSS、SSⅡ和ssⅢ基因的表达，可降低淀粉中直链淀粉含量和改变分支链的长度，从而降低马铃薯淀粉糊化温度、改善其抗凝沉性。依据GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因的cDNA序列分析，从各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约500～600bp的片段；通过PCR技术实现了3个片段的融合，得到了1671bp的融合基因GS：S3；将GS：S3反向连接在GBSS5′侧翼序列之后，构建了由GBSS5′侧翼序列驱动的GS2S3反义基因的植物表达载体pBI-GS2S3，并进行了初步转化。
- 王颖张金文王蒂李洲
- 关键词：淀粉合成酶基因植物表达载体构建CDNA序列分析GBSS直链淀粉含量植物表达载体
- 马铃薯gbss、ssⅡ和ssⅢ基因片段的融合及其RNAi载体的构建被引量：8
- 2008年
- 颗粒结合淀粉合成酶（GBSS）与可溶性淀粉合成酶（SSS）是淀粉合成的关键酶，其活性大小直接影响着淀粉的直链淀粉／支链淀粉比例、淀粉链长及结构等，进而影响淀粉品质。利用blast及分子生物学软件DNAStar对gbss、ssⅡ和ssⅢ基因的cDNA序列同源性进行分析比较，选用加船的261bp（1～261），ssⅢ的244bp（2164～2407），ssⅡ的281bp（161～441）的cDNA片段，并应用重叠PCR法将其拼接成一融合基因gbs3s2，构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有“正向gbs3s2融合片段-pdk内含子-反向gbs3s2融合片段”ihRNAi的植物表达载体，为培育糊化温度低的马铃薯品系奠定基础。
- 陈国梁张金文王蒂
- 关键词：RNAI马铃薯融合基因重叠PCR
- 用RNA干扰技术创造高直链淀粉马铃薯材料被引量：45
- 2008年
- 【目的】创造块茎高直链淀粉含量的转基因马铃薯材料。【方法】采用RT-PCR技术分别克隆了马铃薯Sbe1基因CDS内300bp的片段SⅠ和Sbe2基因CDS内410bp的片段SⅡ,并将SⅠ和SⅡ顺序连接得到融合片段SⅢ;以载体pHANNIBAL和pART27为基础,构建具有SⅢ反向重复结构的植物表达载体pRNAiⅢ;采用农杆菌介导法转化马铃薯优良品种陇薯3号、甘农薯2号和大西洋。【结果】获得了融合片段SⅢ,构建了以Sbe1基因和Sbe2基因为靶标的RNA干扰载体pRNAiⅢ,通过农杆菌介导法获得了24个转基因株系,其中21个转基因株系试管薯的淀粉粒形态发生明显变化,表观直链淀粉含量介于59.31%～87.14%,比受体材料平均高出3.2倍。RT-PCR分析表明,在8个直链淀粉含量超过80%的转基因株系中检测不到Sbe1和Sbe2基因mRNA的积累。【结论】采用RNAi技术通过沉默内源Sbe1和Sbe2,可获得高直链淀粉含量的马铃薯材料。
- 郭志鸿张金文王蒂陈正华
- 关键词：马铃薯高直链淀粉RNA干扰技术
- 马铃薯块茎启动子驱动的淀粉合成酶基因RNAi载体构建及遗传转化
- 2015年
- 以马铃薯gbss、ssⅢ与ssⅡ基因的部分c DNA片段拼接成的融合基因gbs_3s_2为靶标,构建以马铃薯块茎组织特异性启动子GBSS驱动的RNAi表达载体p ART-GF。采用农杆菌介导法对NHD3、NF和NC三个马铃薯品种进行了遗传转化,用PCR技术检测转基因植株,采用双波长法测定其微型薯中直链淀粉与支链淀粉的比值。经抗性筛选及PCR检测初步获得10株阳性植株,其中NC、NF和NHD3分别为2株、3株和5株,其微型薯中直链淀粉/支链淀粉比值明显下降。作者成功构建了马铃薯块茎启动子GBSS驱动的淀粉合成酶基因RNAi三价表达载体,初步获得了转基因马铃薯育种材料。
- 陈国梁张金文徐露严海霞张向前
- 关键词：马铃薯淀粉合成酶
- 一步PCR法进行基因片段高效融合被引量：2
- 2008年
- 采用一种不需要限制核酸酶和连接酶的方法:一步重叠PCR法将马铃薯块茎2种淀粉合成关键酶gbss和ssⅢ的基因片段融合,该方法在一个PCR反应体系中通过4个引物2个模板一次扩增得到一个含有马铃薯块茎2种淀粉合成关键酶gbss和ssⅢ片段的融合基因gs3。结果表明:一步重叠PCR法是一种简便、经济、有效的融合基因构建方法。
- 陈国梁苗娜张金文王蒂
- 关键词：重叠PCRRNAI基因融合
- 重叠PCR一步法对三种淀粉合成酶融合基因的构建被引量：3
- 2010年
- 采用重叠PCR一步法对马铃薯块茎3种淀粉合成关键酶gbss、ssⅢ和ssⅡ的基因片段进行融合.结果表明:该方法在PCR反应体系中通过6个引物3个模板扩增得到1个含有马铃薯块茎3种淀粉合成关键酶gbss、ssⅢ和ssⅡ基因片段的融合基因gs3s2;与经典的重叠PCR方法相比,该方法不需对PCR产物进行回收,而只需一个PCR反应就可以构建得到融合基因,是一种快速、方便有效的构建融合基因的方法.
- 陈国梁张金文王蒂陈宗礼杨波波
- 关键词：重叠PCR淀粉合成酶融合基因马铃薯
- 一个新的马铃薯GBSS基因5'侧翼序列克隆及调控活性研究被引量：3
- 2005年
- 采用PCR技术,从马铃薯叶片基因组DNA中扩增到了约0.6kb的马铃薯GBSS基因的5'侧翼序列,经序列同源性分析所克隆的序列与已知序列同源性为97.41%,含有启动基因表达所需的主要调控元件CAAT盒和TATA盒。构建该序列与GFP的融合基因植物表达载体pBIGGFP,并用基因枪转化法将pBIGGFP导入马铃薯无菌苗茎段、叶片和微型薯薯片,用荧光显微镜观察转化组织中GFP的瞬时表达,结果表明GFP在上述器官中都得到了表达,说明所克隆的约0.6kbGBSS基因的5'侧翼序列是具有启动基因表达的功能。
- 李淑洁张金文王煜郭志鸿陈正华
- 关键词：马铃薯克隆GFP
