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国家杰出青年科学基金(39825119): 作品数：31 被引量：87H指数：6; 相关作者：金宁一江文正张应玖李子健张立树更多>>; 相关机构：解放军军需大学吉林大学吉林大学第一医院更多>>; 发文基金：国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

HIV-2DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察被引量：1: 2002年; 目的　用构建的HIV 2外膜蛋白gp1 0 5和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠 ,评价其免疫效果。方法　将HIV 2型gp1 0 5和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中 ,构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明 ,构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp1 0 5或 /和gag。构建的疫苗免疫小鼠后 ,用流式细胞仪测定CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞亚类数 ,并用HIV 2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV 2抗体水平。结果　构建了 3种HIV 2DNA疫苗pIRES1gag、pIRES1gp1 0 5和pIRES1gag gp1 0 5 ,转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白 ,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV 2特异性抗体 ,其中pIRES1gag gp1 0 5免疫鼠中 ,淋巴细胞增殖最显著 ,而pIRES1gp1 0 5免疫鼠中HIV 2特异性抗体水平最高。结论　构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应 ,其中pIRES1gp1 0 5诱导的体液免疫应答最显著 ,而pIRES1gag gp1 0 5诱导的细胞免疫响应最显著。; 张应玖金宁一郭焱江文正李子健沈家骢; 关键词：免疫应答艾滋病 HIV-2 DNA疫苗

HIV-1重组核酸疫苗质粒诱导小鼠免疫应答的研究被引量：2: 2002年; 目的　研究白细胞介素 6(IL 6)对人类免疫缺陷病毒 (HIV)gp1 2 0基因免疫小鼠的调节作用。方法　构建表达中国流行株HIV 1B亚型gp1 2 0基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV 1B亚型gp1 2 0基因与IL 6基因的核酸疫苗质粒pGPIL 6 ,检测其在哺乳动物细胞中的表达并将上述两种质粒注射Balb/c鼠 ,检测小鼠产生的CD4+ 和CD8+ T细胞数情况及诱导CTL反应能力。结果　以间接免疫荧光法 (IFA)检测到gp1 2 0在哺乳动物细胞中得到表达。pGPIL 6免疫鼠 ,小鼠产生的CD4+ 和CD8+ T细胞数及诱导产生CTL反应的能力明显高于单独注射gp1 2 0的小鼠。结论　协同应用IL 6基因可明显加强HIV 1gp1 2 0基因免疫效果 ,为中国流行株HIV; 郭焱金宁一张应玖郭志儒夏志平; 关键词：人类免疫缺陷病毒白细胞介素6 艾滋病毒 AIDS疫苗

HIV-1 Gag p^(17-)p^(24)在痘苗病毒中的表达及性质研究: 2000年; 研究了重组痘苗病毒表达的HIV1核心蛋白(Gag)p17p24蛋白的一些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、DotELISA及Westernblot结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了HIV1Gagp24及p17p24融合蛋白。电镜观察证实,Gagp24及p1724重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV1Gagp24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后,可见由于细胞凋亡而致的染色体DNA断裂“梯子”电泳图。; 李体远金宁一王宏伟郭志儒方厚华安汝国殷震; 关键词：HIV-1 痘苗病毒核心蛋白疫苗

在重组痘苗病毒中共表达HIV-1env与hIL-6基因: 2000年; 本实验以 HIV- 1env与 h IL - 6基因在重组痘苗病毒中的共表达研究为目的 ,将痘苗病毒复制非必需区血凝素(HA )基因作为侧翼 ,把编码人白细胞介素 6 (h IL - 6 )的基因片段克隆到真核表达质粒 p J38env的下游 ,构建成含有 HIV- 1env与 h IL - 6两种外源基因的重组表达质粒 PJ38E- IL 6 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选 ,获得了重组痘苗病毒 v J38E- IL 6。经间接免疫荧光试验、Dot- EL ISA和 Western bolt等检测证明 ,重组病毒能同时表达 env蛋白和 IL - 6蛋白 ,表达产物的分子量分别为 98k Da、2 6 k; 王玉红金宁一李体远王宏伟刘素寰王弘郡李萍安汝国殷震; 关键词：重组痘苗病毒艾滋病

HIV-1_(CN)gp120与IL-6基因共表达质粒的构建及其免疫调节作用被引量：8: 2001年; 目的　研究白细胞介素 6对人类免疫缺陷病毒 (HIV)gp1 2 0基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法　构建表达中国流行株HIV 1gp1 2 0基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV 1gp1 2 0基因与IL 6基因的核酸疫苗质粒pGPIL 6 ,并检测其在哺乳动物细胞中的表达。将上述两种质粒经胫前肌注射BALB/c鼠 ,检测gp1 2 0抗体的产生情况及ConA和LPS诱导的T细胞增殖能力。结果　以间接免疫荧光法 (IFA)检测到gp1 2 0在哺乳动物细胞中得到表达。pGPIL 6与pGP均可刺激小鼠产生抗gp1 2 0抗体 ,协同注射gp1 2 0和IL 6基因的小鼠产生的抗体滴度明显高于单独注射gp1 2 0的小鼠。pGPIL 6免疫鼠对ConA和LPS诱导的T细胞增殖能力明显高于单独注射gp1 2 0的小鼠。结论　协同应用IL 6基因可明显加强HIV 1gp1 2 0基因的免疫反应 ,为中国流行株HIV 1核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。; 郭焱金宁一张应玖夏志平王宏伟郭志儒殷震; 关键词：人类免疫缺陷病毒

HIV-1 env基因在重组鸡痘病毒中的表达被引量：8: 1999年; 在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HIV 1gp12 0基因 ,通过与野生型鸡痘病毒的同源重组 ,X gal显色挑斑 ,获得 2株重组病毒vUTA - 2f- 16LE和vUTA - 2f- 16LG。经Dot-ELISA、免疫荧光试验、SDS -PAGE和Westernblot检测表明 ,2株重组病毒均能表达gp16 0和gp12 0 ,相对分子质量分别为 16 0 0 0 0和 12 0 0 0 0。经小鼠免疫试验其血清中抗gp12 0抗体A值和脾脏CD4+ /CD8+ T淋巴细胞比值均高于对照组 (P <0 .0 1) ,说明由重组病毒表达的Env蛋白和Gp12 0蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。; 金宁一方厚华郭志儒罗坤古长庆殷震邵一鸣王虹; 关键词：HIV-1 ENV基因基因表达 FPV

Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定被引量：4: 2003年; 目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV; 江文正金宁一韩文瑜; 关键词：嵌合基因核酸疫苗

HIV-1 gag-gp120嵌合基因重组杆状病毒载体的构建被引量：1: 2001年; 目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基因重组正确 ,电镜显示重组杆状病毒大量扩增。结论 :含有B亚型 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体构建成功 ,为进一步研究Gag- gp12 0嵌合蛋白的表达及其生物学活性奠定了基础。; 张东威金宁一王宏伟张应玖王莉馨罗坤李萍于洪臣殷震; 关键词：嵌合基因基因重组杆状病毒

表达HIV-1结构蛋白靶细胞的制备及鉴定被引量：8: 2003年; 江文正金宁一; 关键词：HIV-1 结构蛋白靶细胞

共表达中国株HIV-1gp120与hIL-6的重组鸡痘病毒研究被引量：2: 2003年; 目的　构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利用脂质体法将重组质粒和鸡痘病毒2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞。经BUdR加压筛选 3次后 ,重组病毒分别用PCR、间接免疫荧光试验和Westernblot进行鉴定 ,并进行小鼠免疫研究。结果　重组病毒基因组中可扩增出 1.4kb大小片段 ,重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质 ,表达产物的Westernblot分析表明重组病毒可表达gp12 0和hIL 6蛋白。重组病毒可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答。结论　成功构建了共表达中国株HIV 1gp12 0与hIL 6的重组鸡痘病毒 ,为研制HIV 1基因工程活载体疫苗提供有益的资料。; 江文正金宁一李子健张立树王宏金洪涛; 关键词：重组鸡痘病毒

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