“十一五”国家科技支撑计划(2006BAI23B02)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：康赟安云庆孔庆利吕喆侯宁更多>>
- 相关机构：首都医科大学军事医学科学院上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础。方法采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3.1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSKⅡ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSKⅡ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体。
- 康赟林福玉滕艳侯宁程萱吕喆孔庆利安云庆
- 关键词：同源重组CRE/LOXP系统
- 胰岛B细胞特异性敲除基因APPL1小鼠模型的制备
- 2015年
- 目的制备胰岛B细胞特异性APPL1(adaptor protein containing PH domain,PTB domain and Leucine zipper motif 1)基因敲除小鼠模型(B-APPL1KO)。方法采用基因剔除打靶技术,胚胎干细胞(ES)基因打靶,囊胚显微注射法制备嵌合小鼠,嵌合小鼠与野生型C57BL/6J雌性小鼠繁殖APPL1-flox杂合子(APPL1flox/+)小鼠,APPL1-flox纯合子(APPL1flox/flox)小鼠由APPL1flox/+小鼠相互交配获得。利用Cre-LoxP系统繁育B-APPL1KO小鼠。繁育小鼠经尾端裂解提取DNA鉴定基因型,采用Western印迹法检测APPL1蛋白表达水平。结果 APPL1flox/flox和B-APPL1KO小鼠繁育成功。APPL1flox/flox小鼠胰岛组织有APPL1表达,而B-APPL1KO小鼠则无APPL1表达。APPL1flox/flox和B-APPL1KO小鼠的脂肪组织均有APPL1蛋白表达。与APPL1flox/flox小鼠相比,B-APPL1KO小鼠的体重有增加的趋势,但两者间各时间点的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。两者间8、10周龄的空腹血糖和10周龄的空腹胰岛素水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论胰岛B细胞特异性敲除基因APPL1小鼠模型制备成功,为探讨APPL1在胰岛中的功能提供研究工具。
- 李晓雯李羚林紫薇孙赟陈辰王琛贾伟平
- 关键词：胰岛B细胞
