国家科技攻关计划(2005BA711A10)
- 作品数：5 被引量：45H指数：4
- 相关作者：蔡雪辉李曦符芳步志高宋淑萍更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 五种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其应用被引量：19
- 2010年
- 将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上,以这5种细胞毒的核酸作为模板,进行不对称PCR扩增,制备靶物,经绿色荧光染料Cy3标记后,分别与cDNA微阵列的芯片探针进行杂交,杂交信号经Genepix 4000A扫描仪扫描。结果显示,该芯片探针可以特异地与Cy3标记的这5种靶物结合。用该基因芯片对100份现地采集的猪全血样品进行检测,检出PRRSV阳性样品26份,PCV-2阳性样品47份,PRRSV和PCV-2混合感染阳性样品17份,PPV阳性样品5份,PRV阳性样品2份,CSFV阳性样品20份。表明,本试验研制的cDNA芯片探针可以特异地检测这5种猪病病毒,具有良好的诊断应用前景。
- 符芳杨玉菊陈微晶张永欣蔡雪辉李曦宋淑萍
- 关键词：基因芯片猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒猪伪狂犬病病毒猪瘟病毒
- 新城疫病毒F蛋白碱裂解位点修饰及外源基因的插入对新城疫LaSota疫苗株致病力的影响被引量：7
- 2008年
- 新城疫是危害养禽业发展的重要传染病。新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素。本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗株反向遗传操作平台,将LaSota病毒F蛋白的碱裂解位点由GGRQGR↓L分别突变为GRRQRR↓F和GRRQRR↓L,在未加入TPCK胰酶的情况下分别成功拯救出突变修饰LaSota疫苗病毒株rL-FmF和rL-FmL,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)等指标对其毒力进行评估,结果rL-FmF和rL-FmL的ICPI值由LaSota的0.36分别上升为1.18和1.05,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0,表明碱裂解位点的突变可显著增强致病力。为了检测外源基因插入对病毒致病力的影响,进一步以rL-FmF为载体,分别构建并拯救出表达H5亚型禽流感病毒血凝素HA和增强绿色荧光蛋白EGFP基因的重组病毒rL-FmF-HA和rL-FmF-EGFP,经测定ICPI分别为0.67和1.10,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0。结果表明,对rLaSota病毒F蛋白裂解位点2个非碱性氨基酸突变为碱性氨基酸,无论F2蛋白氨基端为F或L,均可显著增强其脑内接种致病力,接近中发型毒株标准,但对静脉内接种致病能力均无显著影响,而对鸡胚致死能力均保持rLaSota病毒缓发型特点(MDT≥90);外源基因的重组、表达可不同程度致弱病毒,其致弱程度与外源基因及其表达产物性质有关。结果提示,影响NDV致病力不仅仅局限于F蛋白裂解位点氨基酸序列;通过F裂解位点修饰及HA基因插入可以获得致病力较高但基本接近缓发型标准的重组病毒。
- 王永葛金英解希帝丁玉林步志高
- 关键词：新城疫病毒裂解位点致病力
- 伪狂犬病病毒gE基因的表达及gE蛋白单克隆抗体的制备被引量：5
- 2007年
- 以猪伪狂犬病病毒(PRV)Min-A株pMD-gE质粒为模板,利用所合成的特异性引物进行PCR扩增,获得了1 000 bp的DNA片段,并将其克隆至表达载体pET-30a中,转化到大肠杆菌中进行了原核表达,对表达产物进行了抗原性分析;在此基础上,用纯化的gE蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选和鉴定了分泌抗gE蛋白单抗的杂交瘤细胞株。结果显示,原核表达的gE蛋白具有良好的抗原性,其分子质量为46 ku。筛选获得3株分泌抗gE蛋白单抗的杂交瘤细胞株,Western-blot和间接免疫荧光试验证实,所获得的3株单抗具有良好的特异免疫反应原性。3株单抗均为IgG1亚类,且轻链均为κ链。
- 王淑杰蔡雪辉刘永刚吴国军刘狄萩张琦马平李成君石文达
- 关键词：伪狂犬病病毒原核表达单克隆抗体
- 猪呼吸道疾病综合征被引量：2
- 2006年
- 流行病学及现地调查表明,猪呼吸道病综合征(PRDC)是一种多因子性疾病,它是由病毒、细菌、不良的饲养管理条件及易感猪群等综合因素相互作用而引起的疾病综合征;实验研究从另一方面表明PRDC与猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体有紧密的相关性,这四种病毒是原发原因。因此,建立迅速的、多重的、高通量的检测方法是防止该病发展而造成严重危害的首要前提,完善诊断手段将成为它的有效防治措施。
- 李曦符芳童光志
- 关键词：猪呼吸道病综合征
