国家自然科学基金(81060223)
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
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- 相关机构：海南省人民医院海南大学南方医科大学更多>>
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- 联合基因Survivin、CDK1的shRNAs靶向干扰对鼻咽癌CNE-2细胞增值的影响被引量：11
- 2014年
- 为了构建具有干扰效应的靶向Survivin和CDK1基因及两者串联的短发夹样RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,并研究其靶向干扰对鼻咽癌细胞CNE-2生物学行为的改变。本研究通过构建pU6-SurvivinshRNA、pU6-CDK1shRNA和pU6-SurvivinshRNA-CDK1shRNA重组载体,用脂质体Lipofectamine 2000法将其转染入CNE-2细胞株中,应用RT-PCR方法初步筛选具有干扰效应的重组载体,逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Survivin、CDK1 mRNA的基因表达水平,Western blot检测Survivin和CDK1蛋白表达以及噻唑蓝溴化四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测癌细胞增殖活性的变化。结果表明:成功构建具有干扰效应的shRNAs表达载体;联合或单基因Survivin、CDK1的shRNAs表达载体干扰CNE-2细胞后,其对应的mRNA和目的蛋白表达均降低,CNE-2癌细胞增殖活性降低,联合基因shRNAs表达载体具有一定程度的干扰增强作用。
- 陈淑萍周红桃蔡俊宏王福利许茂轩符生苗
- 关键词：鼻咽癌CNE-2
- Survivin调控信号通路PTEN/PI3K/AKT对CNE-2细胞增殖和凋亡机制研究被引量：4
- 2019年
- 目的检测鼻咽癌CNE-2细胞中Survivin表达变化与信号通路PTEN/PI3K/AKT的表达差异,探讨对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖和凋亡产生的影响。方法设计特异性siRNA转染CNE-2细胞,抑制细胞内Survivin表达;构建过表达质粒转染CNE-2细胞,促进细胞内Survivin表达;以CCK8法检测各组中不同时间CNE-2细胞活性; RT-PCR法检测CNE-2细胞中Survivin、PI3K、PTEN、AKT的mRNA表达。蛋白免疫印迹法检测CNE-2细胞中Survivin、PI3K、PTEN、AKT、p-AKT各相关蛋白表达情况。结果 (1)CCK8:利用CCK8检测细胞活性,与空白对照组相比,Survivin抑制组活性降低; Survivin过表达组活性增加。(2) RT-PCR结果显示:Survivin抑制组Survivin mRNA表达抑制率为(41. 9±6. 9)%(P <0. 01),PI3K mRNA表达抑制率为(43. 3±7. 2)%(P <0. 01),AKT mRNA表达抑制率为(38. 7±4. 1)%(P <0. 01),PTEN mRNA表达抑制率无统计学意义; Survivin过表达组Survivin mRNA过表达率为(203. 8±17. 1)%(P <0. 01),AKT mRNA过表达率为(239. 0±34. 2)%(P <0. 01),PTEN、PI3K mRNA表达率无统计学意义。(3) Western blot结果:Survivin抑制组与阴性对照组相比,PTEN、p-AKT蛋白表达量无明显差异,Survivin、PIK3、AKT蛋白表达量显著下调。Survivin过表达组与阴性对照组相比,PTEN、PIK3、p-AKT蛋白表达量无明显差异,Survivin、AKT蛋白表达量显著上调。结论在鼻咽癌CNE-2细胞中,Survivin调控AKT,与AKT呈正相关。Survivin抑制时,能有效抑制CNE-2细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡; Survivin过表达时,能有效促进CNE-2细胞增殖,抑制其发生凋亡。对细胞的增殖及凋亡起正协同作用。
- 朱娟陈鑫苹胡俊杰徐卫华李晓娟马志超张继业周红桃符生苗
- 关键词：SURVIVINCNE-2
- 靶向Survivin及CDK1的shRNAs载体对鼻咽癌细胞的干扰效应
- 目的构建靶向Survivin基因及CDK1基因的短发夹样RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体并研究其对鼻咽癌细胞CNE-2的干扰效应。方法根据Genbank报道的Survivin序列及CDK1...
- 陈淑萍周红桃蔡俊宏李成学王福利许茂轩符生苗
- 关键词：SURVIVIN基因鼻咽癌CNE-2
- 文献传递
- 鼻咽癌放射治疗敏感性相关基因的研究进展被引量：3
- 2012年
- 放射治疗是鼻咽癌治疗的主要手段之一,而鼻咽癌细胞的放射敏感性是放射治疗成败的关键。随着分子生物学的发展,发现鼻咽癌细胞内许多基因的异常表达与放射敏感性密切相关,甚至影响鼻咽癌患者的放疗疗效。鼻咽癌放射敏感性相关基因的研究被认为是可以揭开鼻咽癌放射敏感性奥秘的钥匙,放射治疗联合基因治疗有可能成为鼻咽癌治疗的有效方法之一。现就鼻咽癌放射敏感性的相关基因及其研究进展简要综述如下。
- 符生苗许茂轩林少民
- 关键词：鼻咽癌相关基因
- Association of cyclin D1 and survivin expression withsensitivity of radiotherapy in patients with nasopharyngeal carcinoma
- The association between cyclin D1 and survivin protein expressions with radiotherapy sensitivity in patients w...
- S.M.FuM.X.XuS.M.LinZ.LiangJ.H.Cai
- 关键词：SURVIVIN
- 文献传递
- Survivin基因及CDK1基因联合靶向shRNA真核表达载体的构建
- 目的 shRNA干扰技术可以使细胞出现靶基因沉默,具有高特异性、高效性、低毒性等特点现已广泛应用于生物医学研究的各个领域,为快速下调靶基因表达的有效手段之一.shRNA干扰技术有望成为治疗肿瘤治疗的新手段,但仍需解决诸多...
- 陈淑萍符生苗蔡俊宏李成学周红桃王福利许茂轩
- 关键词：SURVIVIN基因
- Constructing recombinant survivin and CDK1 tandem shRNAs pU6-M4 plasmid
- Objective:To construct recombinant survivin and CDK1 tandem shRNAs pU6-M4 plasmids.Methods:sequences carrying ...
- 陈淑萍周红桃蔡俊宏李成学王福利许茂轩符生苗
- 关键词：SURVIVIN
- 文献传递
- Survivin调控信号通路PTEN/PI3K/AKT对CNE-2细胞增殖和凋亡机制研究
- 目的:构建针对Survivin的小干扰RNA序列和过表达载体,分别转染人鼻咽癌CNE-2细胞后,体外检测鼻咽癌CNE-2细胞中Survivin表达变化与信号通路PTEN/PI3K/AKT的表达差异,探讨其对CNE-2细胞...
- 朱娟
- 关键词：SURVIVINCNE-2
- 文献传递
- Survivin基因及CDK1基因联合靶向shRNA真核表达载体的构建被引量：1
- 2014年
- 目的构建靶向Survivin基因及CDK1基因的短发夹样RNA(Short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体。方法根据Genbank报道的Survivin序列及CDK1序列,遵循shRNA设计原则设计并合成各自靶向的Survivin、CDK1基因的shRNA寡核苷酸序列,构建pU6-shRNA-Survivin重组质粒、pU6-shRNA-CDK1重组质粒及pU6-shRNA-Survivin-U6-shRNA-CDK1双基因序列串联重组质粒,并进行限制性内切酶酶切及基因测序鉴定。结果经酶切及测序结果分析,pU6-shRNA-Survivin重组质粒、pU6-shRNA-CDK1重组质粒及pU6-shRNA-Survivin-U6-shRNA-CDK1双基因系列串联重组质粒均成功构建。结论成功构建Survivin基因及CDK1基因联合靶向shRNA重组质粒,为进一步研究Survivin基因和CDK1基因联合干扰提供了新的方法。
- 陈淑萍符生苗周红桃蔡俊宏李成学王福利许茂轩
- 关键词：SURVIVIN基因
