国家自然科学基金(30170046)
- 作品数：10 被引量：210H指数：9
- 相关作者：梁国栋付士红王环宇宋宏李晓宇更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国预防医学科学院福建省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多重聚合酶链式反应技术及其应用被引量：11
- 2003年
- 标准的聚合酶链式反应是使用一对引物扩增一个特定的核酸序列,即单一引物对的PCR.但是在具体工作中有时需要同时对多个核酸序列进行扩增分析.显然,单引物对PCR要完成这类工作,需要耗费较多的时间和金钱.1988年,Chamberlain等[1]描述了一种多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction, M-PCR).
- 宋宏梁国栋
- 关键词：核酸序列
- 我国虫媒病毒研究10年回顾被引量：47
- 2003年
- 王环宇梁国栋
- 关键词：虫媒病毒生物学特性
- Coltivirus病毒属研究进展被引量：15
- 2002年
- 徐丽宏梁国栋
- 关键词：生物学特征基因组
- 中国流行性乙型脑炎病毒分子生物学特性研究被引量：44
- 2004年
- 为了从分子水平了解中国流行性乙型脑炎(乙脑)病毒与国外分离株的差异,对1949年以来在中国乙脑主要流行地区分离的19株乙脑病毒的PrM C区及E蛋白基因区的核苷酸序列进行了对比研究,以期了解不同时间不同地区在中国流行的乙脑病毒的分子差异。结果显示:病毒生物学初步鉴定显示,病毒感染BHK细胞后56h所有细胞均发生病变,约50%以上细胞脱落(CPE );3日龄乳鼠接种病毒72h之内死亡;所有病毒均与乙脑病毒(A2株)抗血清发生阳性反应,但反应强度不同,提示所有病毒均为乙脑病毒。病毒PrM C(456～695)区核苷酸序列与各个国家及地区、各个基因型以及各个年代的73株乙脑病毒相应序列,用Woan RuChen建立的方法进行基因分型分析,结果显示,所有19株中国分离的病毒均属于基因型Ⅲ型,与国外相关文献所报道的乙型脑炎病毒中国分离株的基因型相符。以乙型脑炎病毒疫苗株P3株为标准,对各病毒E蛋白500个氨基酸序列进行分析。各毒株核苷酸差异在0和4 2%之间,氨基酸差异在0和4 0%之间。所有核苷酸差异均为碱基的替换,无论核苷酸或氨基酸均无插入或丢失。大多数核苷酸变异在氨基酸编码的第三位,属于沉默突变,不引起氨基酸变化。18株病毒E蛋白活性结构域与疫苗株P3株相比共有247个氨基酸的差异,平均每株病毒有12 35个氨基酸的差异,?
- 李晓宇宋宏付士红王环宇俞永新董关木陶三菊陈端Ichiro Kurane梁国栋
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒分子生物学核苷酸
- 我国分离的XJ-90260病毒鉴定为西方马脑炎病毒被引量：22
- 2001年
- XJ 90 2 6 0病毒是从新疆乌苏县境内采集的赫坎按蚊中分离到的一株病毒 ,病毒的鉴定结果显示 :XJ 90 2 6 0病毒可引起BHK 2 1细胞病变 ,表现为圆缩 ,脱落 ;可引起Vero细胞病变 ,表现为圆缩 ,破碎 ,脱落 ;可以在C6 / 36细胞中增殖 ,但不引起细胞病变。对 3日龄小白鼠 2～ 3天致死 ,对 3周龄小白鼠 3～ 4天致死。该病毒株对酸、乙醚敏感 ,抵抗 5 -氟脱氧尿苷。病毒与甲病毒组特异性免疫腹水起反应 ,与乙型脑炎病毒及布尼亚病毒组特异性免疫腹水不反应。进一步的分子生物学鉴定表明 ,该毒株基因组 3′非编码区 (ntranslatedregion ,UTR)核苷酸序列具有典型的西方马脑炎病毒特征 ,与标准西方马脑炎病毒 (California株 )的同源性为 99%。结果证明 :我国新疆分离的XJ- 90 2 6 0病毒为西方马脑炎病毒。这是我国有关西方马脑炎病毒的首次报导 ,有重要的流行病学意义。我国 9省区 ,886份血清的流行病学调查显示 ,该病毒抗体阳性血清 2 4份 ,阳性率为 2 71%。其中新疆 (8/ 15 7)、河南 (6 /76 )、甘肃 (5 / 94)三省区抗体阳性数较多 ,占总阳性数的 79 2 %(19/ 2 4)。
- 吕新军付士红杨益良何海怀张桂筠陈相伟梁国栋
- 关键词：血清流行病学虫媒病毒
- 虫媒病毒性脑炎M-RT-PCR诊断方法的建立及应用被引量：12
- 2004年
- 目的 建立常见嗜神经性虫媒病毒 (arboviruses)分子生物学诊断方法及分子流行病学调查模型。方法 通过生物信息学方法筛选 3对常见嗜神经性虫媒病毒特异基因扩增引物 ,建立多重逆转录聚合酶链式反应 (multiplexreversetranscription PCR ,M RT PCR)体系。考察了体系的特异性、敏感性和广谱性并使用建立的M RT PCR体系对我国新分离的 3株病毒进行鉴定。结果 M RT PCR体系针对黄病毒及甲病毒敏感性达到 10 0PFU ,针对加利福尼亚脑炎病毒组达到 10 0 0PFU。利用M RT PCR体系证实 3株新分离嗜神经性虫媒病毒株中 2株为蜱传脑炎病毒远东型 ,另 1株为日本脑炎病毒Ⅰ型。结论 建立了针对嗜神经性虫媒病毒的分子生物学鉴定方法 ,该方法能够准确分析黄病毒属嗜神经性虫媒病毒 (日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒和西尼罗病毒 )的基因型、地理来源、进化及亲缘关系等 ,能够鉴定并区分甲病毒属不同病毒 (东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒和委内瑞拉马脑炎病毒 ) 。
- 宋宏王环宇王鹏富刘卫滨付士红宋宗明赵洪丽梁国栋
- 关键词：分子生物学诊断分子流行病学生物信息学基因扩增
- 我国首次分离到基因Ⅰ型乙型脑炎病毒被引量：84
- 2004年
- 目的 对新分离乙型脑炎病毒鉴定 ,了解病毒E基因区段的氨基酸序列特征及基因分型。方法 2 0 0 1年在上海市采集蚊虫标本 ,用组织培养的方法分离到 7株病毒。进行病毒一般生物学鉴定 ,对病毒PrM和E基因区段约 2 0 0 0nt进行了扩增、克隆、测序。应用ClustalX软件做碱基配对和比较分析 ,种系发生采用PHYLIP软件包分析。结果 7株病毒可以引起BHK 2 1细胞规律病变 ,病变时间为 6 0h。乳鼠脑内接种病毒后 72h死亡。所有新分离病毒与标准乙型脑炎病毒抗体阳性反应。用病毒PrM区段 (4 5 6～ 6 95位核苷酸 )进行的基因分型分析 ,新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒。以减毒活疫苗株SA14 14 2为标准 ,对 7株病毒的E基因区段进行分析 ,7株病毒之间核苷酸同源性在 97.7%以上 ,氨基酸同源性在 99.2 %以上 ;7株病毒与疫苗株SA14 14 2核苷酸差异在 12 .2 %左右 ,氨基酸差异在 2 .8%～ 3.2 %之间 ,共有 14个共同的氨基酸位点差异。结论 2 0 0 1年在上海采集的蚊虫中新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒 。
- 王环宇付士红李晓宇宋宏闵继光邓娟杨益良Ichiro Kurane梁国栋
- 关键词：乙型脑炎病毒E基因SA14-14-2基因分型种系发生碱基配对
- 登革病毒基因组核苷酸序列与血清学分型的相关性研究被引量：4
- 2002年
- 为证明登革病毒基因组核苷酸序列与病毒血清学分型的相关性 ,本文以病毒全基因组和病毒 5′末端非编码区 ,E蛋白 ,NS1蛋白和 3′末端非编码区四个基因区段分别进行病毒型间比较。比较结果表明病毒全基因组和病毒的各个基因区段均明显分为相互独立的 4个分支 ,与病毒血清型分型完全吻合 ,不存在型间重组的现象。
- 宋宏付士红王寰宇梁国栋
- 关键词：登革病毒基因组核苷酸序列血清学分型
- 乙型脑炎病毒毒力基因定位的研究进展被引量：12
- 2003年
- 李晓宇梁国栋
- 关键词：乙型脑炎病毒毒力基因定位细胞受体
- 福建省新分离3株乙型脑炎病毒的分子特征鉴定被引量：17
- 2005年
- 目的 确定福建省新分离乙型脑炎病毒 (JEV)的基因分型及其E区段氨基酸序列特征。方法 用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增并克隆新分离JEV(0 2 4 1、0 2 4 3、0 2 10 2 )的PrM、E区段核苷酸序列 ,测序后应用ClustalX软件做碱基配对和比较分析 ,种系发生采用PHYLIP软件包分析。结果 新分离的 3株JEV属于基因Ⅲ型 ,E区段核苷酸和氨基酸与减毒活疫苗株SA 14 14 2株的同源性均在 96 %以上 ,在关键结构域有部分氨基酸差异。结论 福建省新分离的 3株病毒属于基因Ⅲ型JEV 。
- 陈端王环宇付士红宋宏邓娟杨益良梁国栋
- 关键词：乙型脑炎病毒JEVE蛋白分子特征减毒活疫苗同源性
