国家自然科学基金(30872033)
- 作品数：11 被引量：36H指数：4
- 相关作者：王敦吕婷婷高秋荣刘强项林平更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学教育部青海省湟中县林业技术推广中心更多>>
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- OrerSNPV与Bt毒素联用防治灰斑古毒蛾研究
- 2011年
- 利用构建的BL21-28a-BtCry1Ab基因工程表达菌,优化表达BtCry1Ab毒素蛋白,表达菌裂解后的粗产物与OrerSNPV以一定的浓度混合饲喂3龄灰斑古毒蛾,测定出不同比例复配后的杀虫效果。生测结果表明:BtCry1Ab与Orer-SNPV不同复配比例均能够取得很好的毒效。当OrerSNPV浓度为5.0×106PIBs/mL、BtCry1Ab蛋白浓度为20μg/mL时,对3龄灰斑古毒蛾幼虫的致死中时间(LT50)比单用Orer-SNPV缩短3.2 d,90%死亡时间(LT90)缩短3.8 d。
- 刘小云高秋荣吕婷婷王敦
- 关键词：灰斑古毒蛾
- 棉铃虫核型多角体病毒orf80多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 从HearNPV G4株基因组中克隆得到orf80基因的全序列,将该基因构建于pMAL-c4E载体并在TB1中融合表达,orf80融合表达蛋白分子质量为73.3ku,与预测的蛋白一致,Western blot验证正确。纯化融合蛋白后制备抗原并注射新西兰大白兔从而得到orf80的多克隆抗体,经ELISA检测其效价达到2.56×105,表明该抗体具有较高的免疫原性,可用于orf80编码蛋白的检测及蛋白互作等相关研究。
- 徐利吕婷婷甘恩宇高秋荣王敦
- 关键词：棉铃虫核型多角体病毒多克隆抗体ELISA
- 棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶的原核表达及其协同增效作用被引量：7
- 2011年
- 【目的】在大肠杆菌中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒(HearNPV)几丁质酶(Chi A),利用表达产物进行病毒增效作用研究,以明确杆状病毒Chi A对HearNPV的协同增效作用。【方法】用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的Chi A基因片段,分别克隆至原核表达载体pMAL-p2x和pET-32a中,构建重组表达载体,并分别在大肠杆菌TB1和BL21(DE3)中进行融合表达,测定融合蛋白对HearNPV的增效作用。【结果】克隆的基因片段经过测序后连接表达载体,成功构建了重组表达载体pMAL-p2x-Chi A和pET-32a-Chi A。重组载体转化相应菌株并进行诱导表达,发现pMAL-p2x-Chi A在大肠杆菌TB1中的表达量占细菌总蛋白的15.8%,其中20.0%为可溶性表达;pET-32a-Chi A在BL21(DE3)中的表达量占细菌总蛋白的26.8%,其中30.2%为可溶性表达。选用pET-32a-Chi A在BL21(DE3)中的表达产物作为增效蛋白,当表达的可溶性HearNPV Chi A的添加水平为1.0μg/mL时,其能够显著提高病毒毒力,棉铃虫的死亡率较对照提高36.6%。【结论】利用大肠杆菌表达的可溶性HearNPV Chi A,对HearNPV具有明显的增效作用。
- 项林平刘小芸田强强刘强吕婷婷王敦
- 关键词：棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶原核表达
- 棉铃虫核型多角体病毒orf86基因的原核表达、抗体制备与免疫印迹检测被引量：5
- 2010年
- 棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV)orf86是一个功能未知的基因。从HearNPV基因组中通过PCR得到orf86基因编码序列,将其构建于原核表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21获得融合表达产物。融合表达蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体。用ELISA测定结果表明,ORF86多克隆抗体效价为1:5.12×105。利用该抗体Western印迹检测HearNPV感染的HZAM1细胞,检测到一个36kD的目的蛋白条带,与ORF86预期大小一致。结果表明该多抗可用于对orf86编码蛋白的检测和相关功能研究。
- 李坚刘强王玉芹项林平王敦
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 小菜蛾性信息素结合蛋白Ⅰ基因的表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2011年
- 提取羽化3 d的小菜蛾成虫触角总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出小菜蛾性信息素结合蛋白基因(PxPBPⅠ),大小为495 bp,Blast结果显示与多种昆虫的PBPⅠ具有较高同源性。将该基因克隆到表达载体pMAL-c4E中,转化宿主菌TB1(DE3),获得单克隆重组质粒pMAL-c4E-PxPBPⅠ。IPTG成功诱导pMAL-c4E-PxPBPⅠ表达出约60 ku的融合蛋白。优化诱导条件为3 mmol/L IPTG、诱导表达6 h,可获得大量可溶性蛋白。表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达1∶512 000。
- 陈东旭于欢徐红星张雅林王敦
- 关键词：小菜蛾原核表达多克隆抗体
- 苹果蠹蛾颗粒体病毒中国本土株的发现与利用
- 苹果蠹蛾Cydia pomonella是由欧洲传入我国的入侵生物,目前已经由新疆传入甘肃,正在由西向东扩散,而陕西、山东等苹果主产地均为其高度适生区,如果不立即采取有效的防范措施,苹果蠹蛾将会进入我国苹果的主产区陕西、山...
- 王敦徐兵强阿不都克尤木·卡德尔吕婷婷刘强李晓峰
- 关键词：生物防治
- 文献传递
- 蝉蜕活性成分的提取及其抑菌活性的研究被引量：15
- 2010年
- 本文报道了对传统中药蝉蜕抑菌活性成分提取与抑菌活性研究结果。对4种提取方法和7种提取溶剂的提取效果进行了平行比较研究,研究结果显示,以体积分数95%乙醇作为提取溶剂,4种提取方法中,以超声波法提取时的浸膏得率最高。采用超声波提取法时,在7种提取溶剂中,以95%乙醇提取浸膏的得率最高。抑菌试验结果表明,不同方法获得提取物与对照组相比对Escheridia coli均有明显的抑菌作用(P≤0.05),但不同提取方法得到的提取物之间,并无显著的抑菌活性差异。其中采用超声波提取法,以95%乙醇为提取溶剂时,所得提取物的抑菌活性最高,对E.coli的最小抑菌浓度为0.078 mg/mL。该研究结果是蝉蜕抑菌成分的首次报道。
- 王珏田强强陶刚高秋荣吕婷婷王敦
- 关键词：蝉蜕活性成分抑菌活性
- 斑蝥素对灰斑古毒蛾核型多角体病毒的增效作用被引量：1
- 2015年
- 利用斑蝥素作为灰斑古毒蛾(Orgyia ericae)核型多角体病毒(OrerNPV)的生物增效剂,研究探讨斑蝥素对OrerNPV室内毒力和林间防治效果的作用。通过室内对病毒制剂添加不同浓度的微量斑蝥素,测定分析其对OrerNPV毒力的增效作用,对增效作用进行了林间测试。研究发现,室内条件下斑蝥素对OrerNPV毒力具有显著的增效作用,能够显著缩短病毒对害虫的致死时间、并提高致死率;同时,斑蝥素作为增效剂显著提高了OrerNPV对灰斑古毒蛾的林间防治效果。
- 彭炳兰梁召俊易命王敦
- 关键词：灰斑古毒蛾斑蝥素生物防治
- 灰斑古毒蛾核型多角病毒EcoR I-O片段的克隆与生物信息学分析
- 2010年
- 分析了灰斑古毒蛾核型多角体病毒（Orgyia ericae nucleopolyhedrovirus,OrerNPV）EcoR I-O片段分子生物学特征,为研究egt基因分子特性和杆状病毒遗传改良提供科学依据。克隆和分析了OrerNPVEcoR I-O片段所包含的2个基因,并应用生物软件对OrerNPV蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶（egt）基因及其启动子进行了比对分析。结果表明OrerNPVEcoR I-O片段包含egt基因和Ol-129同源基因,在该区域中编码egt基因的开放阅读框（ORF）由1 539个核苷酸组成,可以编码512个氨基酸,预计蛋白质分子质量为57.9 kDa。OrerNPV和NPVs之间的同源性为46%-89%,与白斑天幕毛虫核型多角体病毒（Orgyia leucostigmaNPV,OlNPV）egt基因同源性最高,达89%,与棉褐带卷叶蛾核型多角体病毒（Adoxophyes oranaNPV,AoNPV）同源性最低为46%;而OrerNPV和GVs之间的同源性为44%-55%,小于与NPVs之间的同源性;与昆虫UGT间同源性最低,与家蚕UGT间同源性为41%。EcoR I-O片段＋M13端含有编码OlNPV ORF129（Ol-129）Ol-129同源基因ORF,由597 bp个核苷酸组成,在其起始密码子ATG上游-64,-24 nt处各有1个TATA box,其推测的氨基酸序列与Ol-129同源性最高达81%,与LdNPV ORF127同源性最低,为40%。明确了OrerNPVEcoR I-O片段的序列特征,以及OrerNPVegt基因特性。
- 杨丽荣闫海霞全鑫薛保国达楞巴雅尔
- 关键词：EGT基因
- 小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备被引量：1
- 2010年
- 本实验提取羽化3d的小菜蛾Plutella xylostella成虫触角总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因,大小为492bp,Blast结果显示与多种昆虫的GOBP2具有较高的同源性。将该基因克隆到表达载体pMAL-c4E中,转化宿主菌TB1(DE3),获得单克隆重组质粒pMAL-c4E-GOBP2。IPTG成功诱导pMAL-c4E-GOBP2表达出约60kDa的融合蛋白。优化诱导条件为3mmol/L终浓度IPTG、6h,可获得大量可溶性蛋白。表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达1:1.28×105。
- 徐红星陈东旭张雅林王敦
- 关键词：小菜蛾原核表达多克隆抗体
