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国家重点基础研究发展计划(G2000016201): 作品数：26 被引量：236H指数：10; 相关作者：王金生陈功友彭友良于嘉林韩成贵更多>>; 相关机构：南京农业大学中国农业大学北京大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

稻瘟菌对水稻品种梅雨明的无毒性的遗传分析和分子标记被引量：37: 2001年; 将交配型为 a、并对水稻品种梅雨明不致病的稻瘟菌菌株 S152 2与对该品种致病的、交配型为A的稻瘟菌菌株 P131和 S159杂交 ,分别获得了 2 4和 56个单子囊孢子后代。致病性测定结果表明 :这些后代菌株在梅雨明上的致病个体与不致病个体的比例近等于 1∶ 1。由此推测 :稻瘟菌对水稻品种梅雨明的无毒性是由 1个基因控制的。进一步通过 RAPD比较了致病后代与不致病后代的 DNA多态型 ,获得了 1个与该无毒基因连锁的、长度为 10 0 0 bp的 RAPD标记 ,两者间的遗传距离为3.7c M。; 刘俊峰董宁侯占军范军彭友良; 关键词：稻瘟菌无毒基因分子标记抗病育种

转hpa1_(Xoo)基因棉花活性氧产生及防卫相关基因的表达被引量：10: 2011年; 采用H2O2和酶活性检测、DAB染色、定量实时PCR等方法研究转hpa1Xoo基因棉花T-34叶组织中的活性氧。结果显示:无病原菌侵染时,T-34和出发品种Z35均未产生活性氧。在接种黄萎病菌分生孢子悬浮液后,与Z35相比,在T-34叶组织中接菌0～8 h H2O2含量变化呈现2个峰值;接菌8 h时PAL和POD酶活性显著增强;DAB染色显示褐红色斑产生;2个防卫基因ghAOX1和hsr203J超表达。这些结果表明,转hpa1Xoo基因棉花为某些防卫基因超水平表达提供了分子基础,使受到病原菌侵染时才诱导产生的高水平活性氧及相关基因表达,并且组成型表达的HarpinXoo赋予转基因棉花对黄萎病菌的抗性。; 缪卫国宋从凤乔子辰王金生; 关键词：转基因棉花活性氧 PAL 防卫基因

水稻白叶枯病菌hrp调节基因hrpXoo的克隆与序列分析被引量：9: 2003年; 用化学方法诱变水稻白叶枯病菌PXO99A 菌株 ,获得 6株hrp-突变体 ,此突变体除丧失在非寄主烟草上激发过敏反应和在感病寄主水稻上的致病能力外 ,有些缺乏激发烟草产生HR的信号物质 ,有些在胞内存在此信号物质 ,而不能泌至胞外。来自Xanthomonasoryzaepv .oryzaeJXOIII粘粒基因文库的hrp基因克隆pUHRX2 4 5 ,所携hrp基因片段大小为 36 .8kb。系列亚克隆 36 .8kbhrp基因片段及各亚克隆对hrp-突变体功能互补作用的结果显示 ,3.3kbSacI片段为最小酶切功能片段。序列测定和分析结果表明 ,3.3kbhrp片段含hrpX oo基因和含与热激蛋白 90家族有关的 2个开放阅读框hspORF1和hspORF2。HspORF1在蛋白质数据库中未发现序列蛋白。HspORF2与Hsp90 Xo的同源性达 99%。hrpXoo与黄单胞菌中已报道的hrpX基因有很高的同源性(90 %以上 )。在黄单胞菌中高度保守的编码α 螺旋转 α 螺旋结构的 6 0 bp核苷酸序列 ,在交叉功能互补时是必需的。不含此结构的hrpXoo (1.1kb)片段 ,可使JXOIII的hrp-突变体在水稻上具致病性和在非寄主烟草上激发产生HR ,但不能使来自PXO99A 和RS10 5的hrp-突变体恢复在烟草上激发产生HR的功能。黄单胞菌中已知HrpX的同列比较显示 ,X .oryzae和X .campestris种间在 88、196和 2 4; 陈功友余晓江王金生; 关键词：水稻白叶枯病菌基因克隆

表达全长与截短Harpin_(Xoo)对转基因烟草抗病性的影响被引量：13: 2007年; 将水稻黄单胞细菌白叶枯致病变种(Xanthomonas oryzaepv.oryzae)编码HarpinXoo的hrfA基因及其N-末端缺失突变基因AB分别连接到双元载体pBI121上,构建成转基因载体,并经冻融法转化土壤杆菌EHA105。采用叶盘法转化烟草,用卡那霉素抗性筛选再生植株。通过PCR扩增检测了转化烟草中的靶基因序列及35S启动子序列,对T1代PCR阳性植株进行了PCR-Southern杂交和RT-PCR分析。结果显示,外源基因已经整合到转基因烟草基因组中,并在转录水平正常表达。用从转hrfA基因和AB片段的烟草中提取的可溶性蛋白注射烟草都能引起过敏反应,说明目的基因在转基因烟草中能表达出有活性的蛋白。抗病性鉴定结果表明,转N-末端AB片段的烟草和转hrfA全长基因的烟草一样表现出对烟草花叶病毒(TMV)的抗性。; 孟凡宏宋从凤纪兆林王金生; 关键词：转基因烟草烟草花叶病毒抗病性

稻瘟菌致病性变异突变体的筛选及共分离分析被引量：1: 2005年; 通过筛选稻瘟菌(Magnaporthegrisea)P131小种的REMI(RestrictionEnzymeMediated Integration)转化体库获得对水稻品种梅雨明致病性变异的突变体,命名为PX1。与野生型菌株P131相比,该突变体对水稻品种梅雨明致病性丧失,在洋葱表皮上侵染钉形成率显著降低,而孢子萌发率和附着胞形成率差异不显著。遗传分析表明,该突变体的突变表型和潮霉素抗性标记共分离,说明突变是由于外源质粒插入引起的,因此,可以此为标记克隆控制该表型的基因。; 黄俊丽王贵学彭友良; 关键词：致病性变异突变体稻瘟菌孢子萌发率附着胞共分离

新型水稻黄单胞菌Harpin蛋白的纯化及其特性研究被引量：7: 2006年; 报道水稻黄单胞(Xanthom onas oryzae)的两个致病变种(pv.oryzae和pv.oryzicola)所产生的Harp in蛋白.结果表明,表达菌株HRF1和HRF2分别携带两个致病变种编码Harp in的hrf1和hrf2基因.在IPTG诱导下,两个表达菌株的无细胞破碎液均具有激发烟草叶片过敏反应(HR)的活性.采用(NH4)2SO4沉淀、阴离子交换层析、Native-PAGE微量制备等方法,分别纯化出分子量为15 600和15 300,pI皆为4.5左右的单一条带;这两个单一组分符合典型Harp in蛋白的特征:可激发烟草HR,诱导烟草抗TMV,对蛋白酶K敏感、对热稳定;放线菌素D、环己酰亚胺和氯化镧等真核生物代谢抑制剂可消除它们的生物活性;琼脂双扩散试验(ODD)血清反应表明,两个Harp in蛋白有交叉反应.; 陆徐忠王金生; 关键词：HARPIN蛋白致病变种纯化生物特性

水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)化学诱变hrp基因突变体及相关性状的研究被引量：18: 2001年; 硫酸二乙酯 (diethyl sulfate,DES)化学诱变水稻白叶枯病菌 (Xanthomonas oryzae pv. oryzae,Xoo)日本系统号小种 (JXO ) ,获得 16株 hrp-突变体 ,其在感病寄主水稻 IR2 6、汕优 6 3上失去致病性和在非寄主烟草上失去过敏反应。所得的 hrp-突变体并无黄色素缺失现象。16株 hrp-突变体的淀粉酶、果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和脂酶等胞外酶活性基本与野生型一致。 JCM2 0 92、JCM2 2 11、JCM2 2 5 2和 JCM2 4 5 7这 4株 hrp-突变体为型泌出通道突变体 ,JCM0 0 6 6等另 12株 hrp-突变体的超声波破碎液、离心上清液中无激发 HR的信号物质存在。细胞组分分析表明 ,激发烟草 HR的信号物质不是 L PS而是蛋白类物质。来自 JXO 基因文库 hrp基因克隆 p UHRX2 4 5中的 1.1kb Sac I-Kpn I片段 ,能够互补 hrp-突变体 JCM0 0 6 6和 JCM2 4 82 ,使其恢复在烟草上激发 HR的能力 ,但不能恢复其致病性。; 陈功友潘小玫王金生; 关键词：水稻白叶枯病菌诱变

小麦黄花叶病毒人工侵染体系的研究被引量：3: 2002年; 通过大量的接种实验,分析了影响病毒接种效率的各种因素,经ELISA和RT PCR方法进行检测,确立了较为稳定有效的小麦黄花叶病毒机械传毒体系。采用新鲜病叶或用氯化钙干燥保存的病叶作为接种毒源,在0 2mol·L-1磷酸缓冲液中研磨后,对低温下(11～13℃)培养的小麦幼苗(1～2叶龄)进行叶面接种,并将接种后的小麦低温培养可获得较高的接种效率(12 57%～13 43%)。对毒源类型、小麦苗龄和接种部位等其他可能影响接种效率的因素进行了测定。; 尚巧霞韩成贵于嘉林杨莉莉刘仪; 关键词：小麦黄花叶病毒病毒检测

Preparation, Characterization, and Application of Antiharpin_(xoo) Antibody被引量：2: 2006年; Polyclonal antiharpinxoo rabbit antibody has been prepared successfully using purified harpinxoo protein as an immunogen.The ELISA titer of the antiserum against harpinxoo was about 1:2 000. Western blot analysis showed that the antiserumcould bind to the expression harpinxoo protein in particular. hrf1, encoding harpinxoo, is an expression in transgenic rice,detected by antiharpinxoo rabbit antibody. The rabbit antibody against harpinxoo can be used to study further about thebiological function, harpinxoo localization, and hrf1 gene expression in other plants.; SHAO Mini LI Ming PAN Xiao-mei WANG Jin-sheng; 关键词：植物保护生物控制

稻瘟菌品种特异性改变突变体筛选及其遗传分析: 2007年; 通过筛选稻瘟菌(Magnaporthe grisea)P131小种的REMI(Restriction enzyme mediated integration)转化体库,获得1株对水稻品种爱知旭品种特异性改变的突变体MS220。Southern及质粒拯救分析表明:外源质粒在基因组中的整合为单位点、双拷贝反向串联插入。以质粒拯救所获得的侧端序列为探针,通过对爱知旭的毒性菌株和无毒菌株在插入位点处的RFLP分析,结果表明:两者在SacI酶切的泳道内出现了明显的多态性,由此推测,控制野生型菌株P131的无毒相关基因,由于外源质粒插入而发生突变。因此,可以以此为标记,克隆控制该表型的基因。; 魏士平韦建福彭友良; 关键词：稻瘟菌插入突变

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