国家自然科学基金(31360597)
- 作品数：13 被引量：24H指数：4
- 相关作者：刘淑英杨惠孙晓林王宇李慧萍更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古自治区综合疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与验证被引量：2
- 2017年
- 根据Gen Bank上发表的外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)的基因序列,分别设计合成巢式RT-PCR引物及扩增exJSRV-env全基因的引物,建立exJSRV的检测方法。将病肺的巢式外套与内套RT-PCR扩增产物与载体连接,对重组质粒送检测序进行序列分析。结果显示,巢式外套与内套RT-PCR扩增产物的序列与JQ837489.1序列的同源性分别为99.7%和99.4%。通过对3份鼻液以及75份血样的临床检测,将检测阳性的1份鼻液和2份血样送检测序,序列比对结果显示,鼻液、血样的巢式外套和内套RT-PCR扩增产物与JQ837489.1的同源性分别为99.8%、99.7%、99.7%和98.9%、100%、99.4%,且扩增基因序列的氨基酸序列中具有exJSRV特有的致病性YXXM序列。敏感性试验表明,巢式RT-PCR诊断方法的敏感性是普通RT-PCR的10倍,最低能够检测出9.72 fg的标准模板RNA。说明本试验所建立的方法,具有良好的临床应用价值,灵敏性高、特异性好,对exJSRV的临床早期检测提供了一种方便、可靠、经济实用的诊断方法。
- 郭文庆孙晓琳冷冉刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病巢式PCR内源性绵羊肺腺瘤病毒
- 慢病毒介导exJSRV-env过表达对绵羊绒毛膜滋养层细胞自噬影响的初探
- 利用慢病毒载体过表达ex JSRV-env致癌基因,探究ex JSRV-env对绵羊绒毛膜滋养层细胞自噬水平的影响,帮助研究者更好的认识ex JSRV-env致癌基因介导肿瘤发生的分子机制。利用慢病毒p LVX-CMV-...
- 杨惠刘淑英
- 关键词：慢病毒自噬基因致瘤机制
- 文献传递
- 利用JSRV构建啮齿动物LPA模型研究进展被引量：1
- 2019年
- 针对绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)构建啮齿动物鳞屑样生长型肺腺癌(Lepidic predominant adenocarcinomas,LPA)模型的问题,采用文献检索的方式,以"JSRV"、"adenocarcinomas"、"mouse model"为检索词,对利用JSRV构建啮齿动物LPA模型的相关文献进行归纳整理。结果表明:该模型主要构建方法为干扰质粒介导体内细胞转化或培育转基因动物;该模型中被激活的信号通路为肿瘤经典信号通路PI3K/Akt及MAPK信号通路;该模型具备相对完善的生物信息学数据支撑,是深入探讨LPA分子水平致病机制的良好模型。在LPA的致病机制以及LPA不同发病阶段靶向药物筛选方面有待进一步研究。
- 杨惠刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒肿瘤模型致病机制
- 免疫组化检测绵羊肺腺瘤中醛缩酶A的表达被引量：1
- 2014年
- 本研究应用免疫组织化学方法检测了绵羊肺腺瘤和正常肺组织中醛缩酶A的表达情况。通过采用Image-Pro Plus图像分析软件对醛缩酶A表达的光密度和阳性单位(PU)进行定量测试。结果显示,醛缩酶A在正常肺组织的支气管上皮细胞、个别肺泡上皮细胞和肺腺瘤的肿瘤细胞的细胞质中均有明显表达,醛缩酶A在绵羊肺腺瘤组的平均光密度值明显高于正常绵羊肺组织组(P<0.05),醛缩酶A在OPA组的PU值(阳性单位)极显著高于正常绵羊肺组织组(P<0.01)。表明醛缩酶A在OPA中过表达。
- 管凯年徐斯日古楞张宇飞王专家刘淑英
- 关键词：过表达
- enJSRV囊膜蛋白激活绵羊绒毛膜滋养层细胞中MAPK信号通路的研究被引量：2
- 2017年
- 为初步探究内源性绵羊肺腺瘤病毒(en JSRV)囊膜蛋白(Env)在绵羊绒毛膜滋养层细胞中的作用机制,利用免疫组织化学染色法检测enJSRV-Env在绵羊胎盘中的主要表达区域,继而瞬时转染重组质粒pEGFP-C1/en JSRV-env到绵羊绒毛膜滋养层细胞,并加入Erk抑制因子PD 98059、p38抑制因子SB 203580及JN K抑制因子SP600125,同时转染重组质粒至293T细胞中作为对比。利用W estern-blot分别检测2种细胞中Erk1/2、p38和JNK蛋白激酶磷酸化水平的变化。免疫组织化学染色结果显示,enJSRV-Env主要表达于绵羊胎盘中绒毛膜滋养层细胞。Western-blot结果显示,绵羊绒毛膜滋养层细胞中,转染重组质粒pEGFP-C1/en JSRV-env组中p-Erk1/2、p-p38和p-JNK的表达量均显著高于对照组和加入抑制因子组(P<0.05);加入3种抑制因子后,3种蛋白激酶的磷酸化水平较转染组显著降低。293T细胞中,转染重组质粒pEGFP-C1/en JSRVenv组中p-p38的表达量显著高于对照组(P<0.05),p-JNK的表达量极显著高于对照组(P<0.01)。因此,enJSRV-Env激活了绵羊绒毛膜滋养层细胞中MAPK信号转导通路。再通过与293T细胞的结果对比可知,enJSRV-Env在这2种细胞中的作用机制有所不同。本研究为今后继续深入探究en JSRV-Env的作用机制提供了新的思路和依据。
- 冷冉刘淑英
- 关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白MAPK信号转导通路293T细胞
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立
- 为了制备抗绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）囊膜蛋白（ENV）胞质尾区（CT）的单克隆抗体,利用生物信息学分析绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多...
- 刘月张宇飞孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白B细胞表位单克隆抗体ELISA
- 绵羊肺腺瘤病毒Gag蛋白的生物信息学分析及抗原表位预测被引量：3
- 2021年
- 目的探讨绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)Gag蛋白的组成结构及生物学功能。方法从NCBI数据库中获取JSRV的gag基因序列及其编码蛋白的氨基酸序列,利用ExPASy,ProtScale,Signal 5.0,TMHMM Server,NetPhos Server,NetNGlyc,SOPMA,Prediction,Swiss-Model和DNAStar等生物信息学软件分析Gag的氨基酸序列组成、理化性质、亲疏水性、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、糖基化位点、蛋白功能区域、二、三级结构和B、T细胞抗原表位等。结果Gag蛋白是由611个氨基酸构成富含脯氨酸的亲水蛋白,分子式为C3024H4708N834O898S27,相对分子质量为67.981×103,理论等电点为7.14;二级结构以无规则卷曲居多,占48.77%;无信号肽且无跨膜区,存在33个磷酸化位点,1个糖基化位点,含有2个超级家族保守结构域和1个锌指结构。预测该蛋白含有17个B细胞优势抗原表位和25个优势CTL表位。结论生物信息学分析JSRV Gag蛋白属于亲水蛋白,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性,可作为潜在抗原用于诊断方法的建立与疫苗的研制。
- 王宇李建云武健刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊肺腺瘤病毒GAG蛋白抗原表位生物信息学
- JSRV-env慢病毒过表达载体构建及其对NIH3T3细胞增殖的影响被引量：4
- 2020年
- 为研究绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(Envelope,env)对NIH3T3细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)增殖的影响,构建pCMV-dR8.91-JSRV-env慢病毒过表达载体并感染NIH3T3细胞。将JSRV-env基因连接红色荧光慢病毒报告载体pCMV-dR8.91,基因测序正确后将载体命名为pCMV-dR8.91-JSRV-env。将pCMV-dR8.91-JSRV-env重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞包装产生JSRV-env重组慢病毒。将重组慢病毒悬液利用超速离心沉淀法浓缩,real-time PCR测定病毒滴度。浓缩病毒转导NIH3T3细胞72h后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况。结果显示:env同源重组入pCMV-dR8.91载体,测序结果与预期序列一致;pCMV-dR8.91-JSRV-env与包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞72h,real-time PCR验证JSRV-env过表达极显著(P<0.01),JSRV-env重组慢病毒平均滴度为2.99×10^8 IU/mL;MTT分析显示10μg JSR-env慢病毒感染NIH3T3细胞72h显著促进NIH3T3细胞增殖(P<0.05)。综上,成功构建了JSRV-env慢病毒过表达载体,证实JSRV-env能够促进NIH3T3细胞增殖。
- 杨惠刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因慢病毒细胞增殖致病机制
- 内源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒env基因克隆与生物信息学分析
- 2022年
- 本研究对内源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒(endogenous jaagsiekte sheep retrovirus,enJSRV)env基因进行克隆、测序并利用生物信息学方法分析enJSRV Env蛋白的相似性、遗传进化、理化性质、糖基化位点、磷酸化位点、B细胞抗原表位及其二级、三级结构。实验获得了完整的enJSRV env基因序列,其全长1836 bp,编码611个氨基酸。在env基因编码的TM区没有发现exJSRV所特有的“YXXM”基序,env基因属高度保守的基因。env基因序列与GenBank中已登录的enJSRV env基因序列相似性为98.7%~99.5%,推导氨基酸序列相似性为98.0%~99.5%。enJSRV env基因与GenBank中已登录的exJSRV env基因序列相似性88.3%~95.2%,推导氨基酸序列相似性为92.3%~93.8%。生物信息学分析结果显示,enJSRV Env蛋白表现为弱碱、亲水、不稳定蛋白;其二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲结构为主,三级结构同源建模成功,主要是螺旋和无规则卷曲;亚细胞定位Env蛋白主要分布在细胞内质网中,无信号肽,存在跨膜结构域;Env蛋白序列中存在25个丝氨酸磷酸化,21个潜在苏氨酸磷酸化位点和5个酪氨酸磷酸化位点以及4个糖基化位点;抗原表位预测显示,该蛋白含有多个B细胞优势抗原表位和多个优势CTL表位。本研究结果为进一步阐释enJSRV Env蛋白在绵羊(Ovis aries)体内的生物学作用的研究提供新的思路。
- 王宇李建云武健刘淑英
- 关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒ENV基因生物信息学
- 外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析
- 旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(ex JSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机理,通过组织病理学观察和免疫组织化学,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR和MAPK信号通路中p-Erk1/2、p-MEK、p-p38和p-J...
- 孙晓林杜方原刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白MAPK信号转导通路
- 文献传递
