国家自然科学基金(30370929)
- 作品数：14 被引量：48H指数：4
- 相关作者：李华平阮小蕾刘福秀何云蔚刘丽芳更多>>
- 相关机构：华南农业大学湖南省农业科学院广东省农业科学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- RGDV S11基因沉默抑制子的功能鉴定
- 转录后基因沉默(PTGS)是植物体中存在的一种天然抗病毒、抑制外源基因入侵的防卫机制。植物病毒与寄主植物在长期协同进化过程中,形成了一种能抑制植物体内 PTGS 的机制,当植物病毒侵入寄主细胞后,利用其编码的抑制因子(s...
- 赵芹阮小蕾陈秀李华平
- 文献传递
- 水稻橙叶病植原体16S rDNA基因的序列分析被引量：2
- 2009年
- 利用植原体16S rDNA通用引物对水稻橙叶病发病植株的DNA进行了PCR扩增和基因克隆.序列测定表明,PCR扩增的片段全长为1 853 bp,包括1 527 bp的水稻橙叶病植原体(RYL)的16S rDNA基因全序列、234 bp的邻近间隔区的序列及部分(92 bp)23S rDNA基因序列.序列比较结果表明,RYL的16S rDNA全序列与其他植原体的相似性在88%～95%,其中与America aster yellows(AAY,GenBank登录号X68373)最高相似性为95%.利用最大简约法构建的16S rDNA系统演化树结果表明:RYL与AAY亲缘关系最近,同被聚类为翠菊黄化组(16Sr I).
- 张松柏张德咏罗香文张曙光李华平
- 关键词：植原体RDNA
- VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性被引量：6
- 2009年
- 将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生。这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系。这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的。
- 阮小蕾王加峰李华平
- 关键词：番木瓜环斑病毒抗病机制
- 水稻瘤矮病毒基因组第6片段(S6)序列测定与分析被引量：4
- 2007年
- 【目的】了解水稻瘤矮病毒(RGDV)基因组结构与功能。【方法】根据已报道的RGDV基因组各片段末端序列及其反向重复特性,采用4轮RT-PCR的方法扩增RGDV基因组第6片段(S6),用生物学软件进行序列分析。【结果】得到了该病毒S6的全序列。S6全长1651bp,G+C含量39.13%,包含一个长的ORF,起始于第25位,终止于第1497位,编码490个氨基酸,分子量为53.3kD。【结论】该蛋白与伤瘤病毒(WTV)的P7的相似性为30.0%,与水稻矮缩病毒(RDV)的P7的相似性为31.7%。这是RGDVS6全序列的首次报道。
- 刘福秀阮小蕾何云蔚李华平
- 转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价被引量：6
- 2010年
- 应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白不是已知的致敏源。将复制酶基因进行原核表达,并纯化复性表达蛋白,再通过模拟胃肠液消化试验,结果发现纯化的变性蛋白与复性蛋白均能在15 s内降解,表明复制酶蛋白能在人的消化系统内降解,使人体发生过敏的可能性不大。通过液相萃取法,提取转基因与非转基因番木瓜中的一种内源毒物苄基异硫氰酯(benzyl isothiocyanate,BITC),将浓缩后的样品进行气相色谱分析,结果表明BITC的含量在转基因与非转基因番木瓜中差异不显著。
- 阮小蕾侯燕李华平
- 关键词：番木瓜番木瓜环斑病毒复制酶基因食品安全
- 望江南中核糖体失活蛋白新基因CassinⅠ的克隆及特征分析被引量：5
- 2008年
- 【目的】克隆在植物抗病虫过程中具有重要作用的核糖体失活蛋白新基因,为该类蛋白基因功能研究和有效利用创造条件。【方法】通过分析多种不同来源的植物核糖体失活蛋白的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1和P2,对药用植物望江南基因组进行PCR扩增,获得一种新的RIP基因片段。通过RACE法,获得了其全长cDNA序列-CassinⅠ。【结果】CassinⅠ基因全长为882bp,其推导的氨基酸序列与葫芦科两个代表核糖体失活蛋白β-luffin和Trichosanthin(TCS)的相似性分别为58.2%和34.7%,与GenBank中其它核糖体失活蛋白的序列无显著相似性。多重序列比对发现:CassinⅠ有9个氨基酸残基与TCS的N-糖苷酶活性位点的残基完全相同,另外两个残基发生了变化。所有的活性位点都在P1/P2扩增区段内。【结论】首次在望江南中克隆和报道一种新的核糖体失活蛋白基因,为进一步研究该基因的功能、并应用于作物转基因抗病虫害育种研究奠定了基础。
- 阮小蕾刘丽芳何云蔚刘福秀李华平
- 关键词：望江南核糖体失活蛋白基因克隆
- 经修饰的烟草几丁质酶基因的克隆及多基因香蕉转化载体构建被引量：3
- 2008年
- 从烟草中克隆得到1个经修饰的几丁质酶基因chi,将它与1个已经克隆的核糖体失活蛋白基因Cassin以及1个抗病毒的融合基因FBC(CMV香蕉株系的CP基因和BBTV的Rep基因)共同构建在1个表达载体上,得到多基因植物表达载体pYLTAC747NH-c-C-FBC.
- 阮小蕾李华平
- 关键词：几丁质酶基因植物表达载体
- 水稻橙叶病PCR检测体系的建立被引量：4
- 2008年
- 利用植原体通用引物sP1和sP2,采用PCR法从发病的水稻植株中扩增植原体一段保守的16S rRNA基因的核苷酸序列.结果表明,从发病的水稻植株中都能够稳定扩增得到1条558 bp的特异性条带.对该条带进行克隆和序列分析表明,该片段和Genbank中公布的众多植原体的相应区域的核苷酸序列相似性都高达95%以上,表明利用植原体通用引物能有效扩增得到水稻橙叶病原的序列.利用此引物并优化PCR反应条件,建立了水稻橙叶病的PCR检测方法.该方法对检测水稻橙叶病具有特异、灵敏和有效性.应用该检测体系检测从广东信宜、高州和从化采集的多份疑似标样,结果表明,在这几个地区均有水稻橙叶病的发生和危害.
- 张松柏罗香文李华平
- 关键词：水稻橙叶病PCR检测
- 植原体检测与分类研究进展被引量：1
- 2010年
- 从20世纪60年代末发现植原体以来,目前已发现的植原体已有300多种,其中有多种植原体危害经济作物。综述了国内外植原体检测方法与分类研究。
- 张松柏罗香文刘勇张德咏李华平
- 关键词：植原体
- 水稻瘤矮病毒广东分离物基因组第10组分的序列分析及原核表达被引量：2
- 2008年
- 应用RT-PCR技术克隆了水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)广东分离物基因组的第10片段,并测定了全序列。结果表明,RGDV广东分离物S10(登录号EF532325)全长1 198 bp,含有一个ORF,编码一条由320氨基酸组成、推测分子量约36 kDa的多肽。与泰国分离物相应组分相比,基因结构基本一致,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.2%和98.8%;S10编码多肽与水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)S9编码蛋白及伤瘤病毒(Wound tumor virus,WTV)S11编码蛋白也分别具有29%和33%的相似性。本研究还将S10 cDNA克隆至原核表达载体pET28b(+)上,通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达,并利用His. Bind树脂纯化得到电泳纯级制品。本工作为进一步研究S10编码蛋白的结构与功能奠定了一定的基础。
- 赵芹阮小蕾陈秀刘福秀李华平
- 关键词：水稻瘤矮病毒原核表达蛋白纯化
