国家自然科学基金(30972233) 作品数:9 被引量:28 H指数:3 相关作者: 李守军 贾坤 张桂红 远立国 李华涛 更多>> 相关机构: 华南农业大学 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 青岛农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
广东1株H3N2亚型犬流感病毒全基因组遗传进化分析 2016年 本试验对1株犬源H3N2亚型流感病毒(A/Canine/Guangdong/10/2014)进行了遗传进化分析。结果显示,本毒株8个基因片段与在中国和泰国分离的H3N2亚型犬流感的关系最近,与当前亚洲分离的毒株高度相似(>99%)。基因亚型分析显示8个基因片段和目前流行的H3N2CIVs有相同的基因型(K,G,E,3B,F,2D,F,1E)。本毒株为低致病性的禽源H3N2亚型犬流感,从而证实了禽源犬流感亚型在中国的存在,对流感病毒实施广泛的血清学和流行病学检测,以及对该病的防控具有重要意义。 赵苗苗 王丽芳 黄三 付橙 罗永峰 孙彦阔 陈智华 李守军关键词:H3N2亚型 分子特性 H3N2亚型犬流感灭活疫苗的免疫效果评价 被引量:1 2013年 为研制H3N2亚型犬流感病毒灭活疫苗,本实验通过鸡胚传代的方法培育出一株高繁殖能力的鸡胚适应株CGD1株。分别应用白油和氢氧化铝胶佐剂制备两种灭活疫苗,通过监测疫苗免疫后BALB/c小鼠和比格犬的抗体水平以及比格犬的攻毒保护试验,评价两种疫苗的免疫效果。结果表明,两种佐剂疫苗均能够诱导小鼠和犬产生较强的免疫应答反应,二免后14 d,免疫犬抗体水平均高于1∶40;攻毒试验中,疫苗免疫可以显著减轻病毒感染犬临床症状,明显缩短病毒的排毒期,特异性抗体水平显著提高。本研究研制了两种佐剂H3N2亚型犬流感灭活疫苗,为犬流感的防制提供保障。 赵明喜 赖芳芳 贾坤 李华涛 远立国 李守军关键词:H3N2亚型 灭活疫苗 佐剂 H3N2亚型犬流感病毒血凝及血凝抑制试验的研究 被引量:3 2013年 为优化H3N2亚型犬流感病毒(CIV)的血凝抑制(HI)试验方法,本研究应用不同种类红细胞进行CIV的血凝(HA)试验,应用不同种类红细胞和不同血清处理方法进行CIV的HI试验,评价其对HA和HI试验的影响。结果表明,H3N2亚型CIV对鸡和犬红细胞的凝集性最好,对小鼠、猪和牛红细胞的凝集性较差。HI试验应用鸡红细胞悬液效果最好,受体破坏酶(RDE)和高碘酸钾处理可以有效去除犬血清中非特异血凝抑制素,但高碘酸钾对血清特异性抗体有损耗。本研究筛选出H3N2亚型CIV HI试验的最佳方法,为犬流感的血清学诊断提供技术支持。 赵明喜 赖芳芳 贾坤 李华涛 李守军关键词:H3N2亚型 血凝试验 血凝抑制试验 一株H3N2犬源猫流感病毒NP基因的遗传变异性分析 2013年 从被感染猫体内分离出流感病毒,利用RT-PCR扩增NP基因,分析其遗传变异性。与NCBI上的14株流感病毒的NP全基因序列进行比对分析,发现其与参考毒株的NP基因序列的相似性为79.3%~99.7%,其中与感染株A/canine/Guangdong/1/2007(H3N2)的NP基因序列的相似性最高,为99.7%。基因序列比对发现,编码区存在5处突变:A33G、A81G、C235T、G345A、A567G;氨基酸仅存在1处变异:I189M。研究结果表明,犬流感病毒在犬和猫之间存在跨中间传播,虽然变异系数不高,但是567位碱基突变所造成的氨基酸突变为NP基因的遗传性和种间特异性的研究提供了参考。 涂黎晴 袁子国 李陆涛 贾坤 李华涛 赵明喜 邹雨妃 李守军关键词:H3N2亚型 NP基因 H3N2亚型犬流感病毒NS1基因的原核表达 为原核表达犬流感病毒(CIV)NS1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIVH3分离株的NS1基因,将其连接到pMD18-T载体后进行序列测定。再将NS1基因克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-NS... 师志海 张敦伟 李守军关键词:NS1基因 原核表达 文献传递 犬流感(H3N2亚型)血清学调查 被引量:6 2013年 为了解广东地区犬流感(CI)流行情况,以期为犬流感的预防提供参考依据,本研究采用ELSIA方法及血凝抑制试验(HI),对广东省内6地市的1440份犬血清样品进行抗体检测。结果显示,1440份犬血清中犬流感抗体平均阳性率为7.92%(ELISA)和6.25%(HI)。其中广州、深圳和惠州地区的犬流感抗体阳性率较高。1~3岁犬的犬流感抗体阳性率高于其他年龄段犬,雄性犬犬流感抗体阳性率高于雌性。结果表明,H3N2亚型犬流感病毒在广东局部地区流行。鉴于当前在部分地区CIV阳性率较高,结合CIV在犬群中迅速传播的流行特点,要避免CIV暴发流行及对人类的健康造成威胁,对于CIV的防制应结合当地实际情况,制定切实有效的防制措施。 粟硕 李华涛 陈济铛 黄震 赵付荣 张桂红 李守军关键词:血清学 H3N2亚型犬流感病毒重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量:3 2012年 为建立一种H3N2亚型犬流感病毒(CIV)血清学检测方法,本研究利用CIV重组HA1蛋白作为检测抗原,建立H3N2亚型CIV抗体的间接ELISA检测方法,并优化反应条件。通过检测阴性血清样本30份确定其临界值为0.228。该方法与抗猪流感病毒H1N1、H1N2、H6N6、H9N2的阳性血清和犬瘟热病、犬细小病、犬副流感的阳性血清均无交叉反应。变异系数在1.01%~7.52%之间,具有较好的重复性。通过对150份临床样品进行检测并与血凝抑制试验检测结果比较,总符合率为98.6%。本研究为CIV流行病学调查提供了一种快速、方便、敏感的抗体检测方法。 黄柏槐 张敦伟 远立国 张桂红 李守军关键词:H3N2亚型 间接ELISA 犬流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:9 2010年 为了建立一种便捷、灵敏的犬流感病毒(CIV)检测技术,本研究根据CIV相对保守的M片段设计3对特异性引物,建立CIV的RT-LAMP检测方法,对反应体系中的MgSO4、Betaine、Bst DNA PoLymerase、dNTP、引物浓度等分别进行了优化,并进行敏感性和特异性试验。结果表明:所建立的反应体系在恒温水浴锅中作用45min即可得到其特有的阶梯状条带,而且对犬细小病毒、犬瘟病毒和犬副流感病毒的扩增结果均为阴性。该方法对CIV RNA的最小检测限为0.1pg,灵敏性高于一步RT-PCR方法。RT-LAMP和普通RT-PCR方法检测临床样品的符合率为93.02%。该方法为犬流感病毒的临床检测提供了一种简便、实用的方法,为基层检疫提供了方便。 高晓宇 曹荣峰 张桂红 李守军H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的原核表达及抗原性分析 被引量:3 2011年 为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的HA1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明,表达的重组HA1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。 张敦伟 熊永忠 远立国 贾坤 张桂红 李守军关键词:HA1基因 原核表达 抗原性 H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定 被引量:8 2011年 为了解广州地区犬流感的流行情况,本研究采集107份犬鼻咽拭子样品和58份血清样品,SPF鸡胚分离病毒并进行抗体检测。结果显示:分离获得3株H3N2亚型犬流感病毒。分离株的EID50为10-2.42/0.1 mL~10-3.5/0.1 mL;MDT为177.6 h~192 h;对乙醚、氯仿、酸和温度均敏感;对血凝素为热不稳定型;能够凝集公鸡、豚鼠、猪和牛的红细胞。 佘利旋 熊永忠 远立国 袁天梅 贾坤 李守军关键词:H3N2亚型 生物学特性