广州市科技计划项目(2007J1-C0201)
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
- 相关作者：胡玉山刘俊华庞杏林陈守义邓志爱更多>>
- 相关机构：广州市疾病预防控制中心南方医科大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沙门菌grOEL基因序列在系统发育分析和PCR-限制性片段多态性分析鉴定中的应用
- 2009年
- 目的探讨grOEL基因序列在沙门菌进化分析和分型鉴定中的应用。方法对8种血清群的沙门菌菌株进行PCR扩增、测序,然后用分子生物学软件Bioedit与DNAstar进行序列分析,同时用PCR-限制性片段多态性分析(RFLP)技术进行分型鉴定。结果8种沙门菌血清群grOEL基因保守序列与变异序列呈锯齿状排列,其grOEL氨基酸系统发育树与grOEL基因系统发育树结果不完全相同,但O8、O9、O10之间亲缘关系最近,PCR-RFLP分析有5种模式图。结论grOEL基因序列在沙门菌系统发育中可作为遗传标记,同时也可作为分型鉴定的靶序列。
- 胡玉山刘俊华庞杏林陈守义陈晓光
- 关键词：GROEL系统发育
- 猪链球菌2型多重PCR鉴定方法建立被引量：4
- 2009年
- 目的建立猪链球菌2型多重PCR鉴定方法。方法根据猪链球菌种特异基因16S rRNA序列和猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因cps2 J基因序列,设计和合成2对特异引物,通过条件和体系优化,建立多重PCR检测方法。结果猪链球菌2型参考株及18株分离株均扩增到清晰的目的条带,而6株非猪链球菌2型参考菌株不能扩增出目的条带。结论多重PCR可以用于猪链球菌2型检测,特异性和敏感性好,为该病的快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术方法。
- 胡玉山刘俊华庞杏林候水平邓志爱陈守义
- 关键词：猪链球菌2型多重PCR
- PCR-RFLP与特异引物PCR对副溶血性弧菌进行分型鉴定探讨被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨在流行病学溯源方面,运用PCR-RFLP与特异引物PCR对副溶血性弧菌进行分型鉴定的可行性。方法:选择副溶血性弧菌核糖体基因16SrRNA序列进行PCR-RFLP分析、保守核糖体基因间隔序列16-23SrRNA(RS)和肠道细菌重复内显子保守序列(ERIC)进行特异引物PCR分析。结果:16SrRNA PCR-RFLP分析有4种模式图,RS-PCR分析有3种模式图,ERIC-PCR分析有10种模式图。结论:PCR-RFLP与特异引物PCR可以对副溶血性弧菌进行快速分子分型鉴定,有利于流行病学溯源。
- 胡玉山郑桂丽胡肖娟刘俊华庞杏林邓志爱陈守义
- 关键词：副溶血性弧菌
- 沙门菌invA基因荧光定量PCR检测被引量：7
- 2009年
- 胡玉山胡肖娟刘俊华庞杏林邓志爱陈守义
- 关键词：沙门菌探针荧光定量PCR
- 人源与猪源猪链球菌2型gdh基因序列比较被引量：3
- 2010年
- 目的研究人源与猪源猪链球菌2型gdh基因序列同参考序列的差异,为猪链球菌2型的诊断方法研究提供基础依据。方法选取猪链球菌2型患者分离株和病猪分离株各1株,根据文献和基因库中的gdh基因序列设计PCR引物,进行PCR扩增;将扩增产物纯化回收,克隆至pMD 19-T载体后进行测序,获得gdh基因序列。结果2株猪链球菌2型菌株的PCR扩增产物经电泳后,均得到1 300 bp左右的目的条带,大小与预测一致;序列分析结果显示,人源猪链球菌2型gdh基因序列GC含量为45.73%,猪源猪链球菌2型gdh基因序列GC含量为45.88%,猪链球菌2型gdh参考序列GC含量为45.81%;人源与猪源猪链球菌2型gdh序列同参考序列相比,一致性均为99.9%;人源与猪源猪链球菌2型gdh序列仅相差2个碱基。结论人源与猪源的猪链球菌2型gdh基因序列高度保守。
- 胡玉山刘俊华庞杏林林云万邓志爱陈守义
- 关键词：猪链球菌2型基因克隆
- 猪链球菌2型感染胶体金诊断方法的研究被引量：6
- 2015年
- 目的建立猪链球菌2型感染胶体金快速诊断方法。方法选择猪链球菌在进化上极为保守的蛋白谷氨酸脱氢酶的编码基因gdh作为研究靶基因,对其进行克隆、表达和纯化,应用硝酸纤维膜包被纯化的目的蛋白,运用胶体金溶液与生物大分子金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)结合制备SPA金标探针建立猪链球菌2型感染的胶体金快速诊断方法。结果胶体金检测标本阳性结果试纸条上出现两条红色条带,阴性结果试纸条上只有一条靠近吸水端的质控线出现红色条带,对370份标本进行检测,其中320份阴性结果,50份阳性结果。结论运用胶体金免疫层析技术可以快速诊断猪链球菌2型感染。
- 胡玉山肖丽红刘巧谊候水平刘俊华周勇吴新伟杨智聪
- 关键词：胶体金
- 猪链球菌2型gdh基因的克隆与表达被引量：1
- 2013年
- 目的克隆表达猪链球菌2型诊断性抗原谷氨酸脱氢酶GDH。方法根据基因库中的gdh基因序列设计PCR引物,自病人分离株2007SF0165基因组扩增GDH的编码基因gdh,克隆至pMD19-T载体后进行测序分析,并且构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测。结果 PCR法自猪链球菌2型菌株2007SF0165基因组扩增出约1.3 kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;构建筛选的原核重组表达质粒pGEX4T-2-gdh经诱导表达,获得蛋白相对分子质量为45 kDa目的蛋白。结论克隆并表达出猪链球菌2型诊断性抗原GDH,可为进一步研究奠定坚实的基础。
- 胡玉山刘俊华庞杏林候水平夏丹
- 关键词：猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶克隆表达
