广西壮族自治区卫生厅重点科研课题(200865)
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 相关作者：王琪李力张玮唐步坚唐兆前更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
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- XPG基因表达下调对卵巢上皮性癌耐药细胞增殖及顺铂耐药性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨XPG基因表达下调对卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药细胞增殖及顺铂耐药性的影响。方法针对XPGmRNA的不同区域设计不同的小分子干扰RNA（siRNA）片段（共3个，包括siRNA．XPG-733、1279和3227），瞬时转染卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3／DDP细胞，实时荧光定量PCR技术检测瞬时转染后SKOV3／DDP细胞中XPGmRNA的表达；选择对XPGmRNA表达抑制率最高的siRNA—XPG干扰片段，构建短发夹状RNA（shRNA）-XPG重组表达载体，转染SKOV3／DDP细胞；采用氨基糖甙类抗生素G418筛选、蛋白印迹法鉴定，确认获得XPG基因表达下调的shRNA—XPG．SKOV3／DDP细胞。采用四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）比色法检测shRNA—XPG。SKOV3／DDP细胞增殖情况和顺铂耐药性，采用流式细胞仪和高效液相色谱法分别检测其细胞周期比例和细胞内顺铂浓度，转染以内参照磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）siRNA构建的shRNA—GAPDH重组表达载体的SKOV3／DDP细胞为阳性对照，转染以XPG无关序列构建的shRNA—NC重组表达载体的SKOV3／DDP细胞为阴性对照。结果（1）实时荧光定量PCR技术检测显示，siRNA—XPG-733干扰片段转染后SKOV3／DDP细胞中XPGmRNA的表达水平最低，对XPGmRNA表达抑制率最高，达53．8％。构建shRNA—XPG-733重组表达载体，转染SKOV3／DDP细胞，获得shRNA．XPG-733-SKOV3／DDP细胞，该细胞中xPG蛋白表达明显下调。（2）MMT比色法检测显示，shRNA—XPG-733-SKOV3／DDP细胞的增殖速度明显低于阳性对照和阴性对照（P〈0．05）。流式细胞仪检测显示，shRNA—XPG-733-SKOV3／DDP细胞的s＋G，／M期细胞比例为34．0％，与阳性对照和阴性对照（分别为58．7％和51．3％）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。MMT比色法检测显示，shRNA—XPG-733-SKOV3／DDP细胞的顺铂半数抑制浓度（ICsc）为（13．79±0．06）g／ml，明显低于阳性对照和阴性对照[分别为（27．84�
- 张玮吴飞翔王琪李力
- 关键词：DNA结合蛋白质类核蛋白质类顺铂肿瘤肿瘤
- 改良2-^(△△CT)法分析RNASET2基因在卵巢癌卡铂耐药中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的:建立改良的相对定量2^(-△△CT)法并应用其分析RNASET2基因在卵巢癌卡铂耐药细胞系中的差异表达。方法:分别提取卵巢癌卡铂耐药SKOV3细胞系与其亲本SKOV3细胞系的总RNA,将等量的mRNA逆转录为cDNA,应用实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR)技术检测核糖核酸酶T2(RNASET2)基因在卵巢癌卡铂耐药中的差异表达,参照2^(-△△CT)公式的推导步骤,对其改良演化出一个新的公式即改良2^(-△△CT)公式。以绝对定量法为对照,应用该公式分析real-time RT-PCR技术检测结果并比较两种方法的差异。结果:改良2^(-△△CT)公式与绝对定量法分析实验结果差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌卡铂耐药SKOV3细胞系RNASET2基因的表达相对于卵巢癌非耐药SKOV3细胞系的表达降低。结论:改良2^(-△△CT)公式分析real-time RT-PCR反应数据是一种简便可行的相对定量方法,RNASET2表达下调与卵巢癌卡铂耐药相关。
- 唐兆前李力张伟王琪蒋胜唐步坚
- 关键词：卵巢癌耐药REAL-TIMEPCR
- 卵巢癌卡铂耐药相关肿瘤抑制基因差异表达的研究被引量：2
- 2010年
- 目的分析卵巢癌卡铂耐药基因芯片中卡铂耐药细胞系SKOV3-CB较其亲本SKOV3细胞系差异表达下调的肿瘤抑制基因,并验证其差异表达。方法应用分子生物信息学方法 ,分析基因芯片中卵巢癌SKOV3-CB细胞系较SKOV3细胞系差异表达下调两倍以上的基因1554条,筛选出肿瘤抑制基因17个,即:RNASET2,VHL,DLG1,COPS2,NOL7,GGNBP2,RBL1,S100A2,PARG1,PERP,TCF3,DNAJA3,PCGF2,ING1,CYLD,RARRES3,RBBP8,应用荧光定量PCR技术对差异表达进行验证。结果 RNASET2,VHL,DLG1,COPS2,NOL7,RBL1,S100A2,PARG1,PERP,TCF3,DNAJA3,ING1,CYLD,RARRES3,RBBP8基因差异表达下调,下调倍数分别为24.47、65.24、10.81、21.30、72.94、5.95、27.13、1.57、1.32、12.93、46.80、7.57、14.90、14.00、23.98。GGNBP2,PCGF2,DLG1基因差异表达上调,上调倍数分别为5.76、2.19和17.10,基因芯片差异表达结果与real-timePCR所验证表达下降趋势的结果符合率为82.35%,下调两倍以上的基因符合率为64.70%。结论利用基因芯片技术分析基因差异表达,结合real-timePCR对其检测结果验证是一种有效的方法 ,多肿瘤抑制基因参与卵巢癌卡铂耐药的机制。
- 唐兆前李力张玮王琪唐步坚
- 关键词：卵巢肿瘤芯片分析技术
- 黑色素瘤生长趋化因子1对卵巢癌细胞生物学功能的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨黑色素瘤生长趋化因子1（CXCL1）基因在卵巢癌细胞生物学功能中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）扩增CXCL1基因全长序列，并构建其表达的重组慢病毒表达载体。采用RT—PCR和酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测慢病毒介导的卵巢癌A2780细胞中CXCL1mRNA和蛋白表达情况；采用四甲基偶氮唑蓝（MrITI．）法、流式细胞术和显微镜下计数集落数法测定细胞生长曲线、细胞生长周期和细胞集落形成情况；采用Transwe11小室和Migration侵袭方法测定细胞体外的迁移和侵袭能力。结果测序结果显示，重组慢病毒质粒CXCL1-PWPI与CXCL1基因的同源性达100％。lit-PCR和ELISA法检测结果显示，A2780细胞经CXCL1-PWPI转染后，CXCL1mRNA和蛋白表达呈阳性。A2780组、PWPI组和CXCL1-PWPI组的细胞集落形成率分别为22．3％、26．5％和37．2％（P〈0．05），G1期细胞分别为62．7％、61．4％和44．0％（P〈0．001）。CXCL1-PWPI组与A2780组和PWPI组比较，其细胞迁移能力差异无统计学意义（P〉0．05），但侵袭能力差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CXCL1基因具有促进卵巢癌A2780细胞增殖和侵袭的能力。
- 张玮黄宁王琪阳志军李力
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤侵袭肿瘤转移
- 卵巢癌细胞卡铂耐药相关肿瘤抑制基因的表达变化及其启动子区甲基化观察被引量：2
- 2010年
- 目的观察卵巢癌卡铂耐药相关肿瘤抑制基因的表达变化及其启动子区甲基化状态。方法应用分子生物信息学方法,从卵巢癌卡铂耐药基因表达谱芯片中筛选13个肿瘤抑制基因(VHL、COPS2、NOL7、GGNBP2、RBL1、S100A2、PARG1、PERP、TCF3、DNAJA3、ING1、RARRES3、RBBP8),并采用RT-PCR法检测这些基因在卵巢癌卡铂耐药细胞系(SKOV3-CB)及其亲本细胞系(SKOV3)的表达;分析肿瘤抑制基因启动子区CPG岛并设计出8个基因(VHL、COPS2、NOL7、RBL1、PARG1、PERP、DNAJA3)的引物,采用甲基化特异性PCR法检测SKOV3-CB、SK-OV3细胞8个基因启动子区甲基化状态。结果与SKOV3相比,除GGNBP2基因外,其余12个基因均在SKOV3-CB中表达下调。SKOV3-CB、SKOV3的ING1、DNAJA3、VHL甲基化引物均能够扩增出产物,未甲基化引物均不能扩增出产物;COPS2、PERP甲基化引物均不能够扩增出产物,未甲基化引物均能够扩增出产物;PARG1、NOL7、RBL1甲基化引物与未甲基化引物均能够扩增出产物。结论卵巢癌卡铂耐药相关肿瘤抑制基因表达下调,其启动子区无甲基化;甲基化机制与卵巢癌卡铂耐药相关肿瘤抑制基因的表达下调无关。
- 唐兆前李力张玮王琪唐步坚
- 关键词：卡铂肿瘤耐药甲基化肿瘤抑制基因
- XPG遗传多态位点His46His和His1104Asp与卵巢癌患者铂类药物敏感性关系探讨被引量：2
- 2012年
- 目的探讨核苷酸切除修复基因XPG单核苷酸多态性与卵巢癌患者对铂类药物敏感性的关系。方法 2002年6月至2009年6月在广西医科大学附属肿瘤医院以聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和DNA序列测定方法检测接受含铂类药物化疗的102例卵巢上皮细胞癌患者的XPGHis46His及XPGHis1104Asp的多态基因型,并比较不同基因型与化疗敏感性的关系。结果 His1104Asp多态性在卵巢癌铂类药物化疗敏感组中分布与耐药组差异无统计学意义(P>0.05)。而XPGHis46His在化疗敏感组T/T,T/C,C/C的基因型频率明显高于耐药组(P=0.016),与携带XPG46T/T基因型比较,携带至少一个46C等位基因(即T/C和C/C基因型)的卵巢癌患者对铂类药物化疗敏感性增加3.096倍(95%CI1.330～7.208)。COX风险比例回归模型结果显示XPG遗传多态位点His46His和His1104Asp不是卵巢上皮癌患者的独立预后因素(P<0.05)。结论核苷酸切除修复系统中XPGHis46His遗传多态可能与卵巢癌患者对铂类药物敏感性相关。
- 张玮吴飞翔王琪黎丹戒李力
- 关键词：卵巢肿瘤XPG多态位点药物敏感
