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白念珠菌感染特异性Csa2蛋白双抗体夹心ELISA体系的建立与评价被引量：1: 2014年; 目的以白念珠菌Csa2蛋白为靶标,建立双抗体夹心ELISA检测体系,评价该方法的检测灵敏度和特异性。方法构建pPIC9K-Csa2重组表达载体,电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达、纯化重组蛋白rCsa2。rCsa2蛋白分别免疫新西兰大白兔和豚鼠制备免疫血清。以纯化兔多抗和豚鼠抗血清配对,利用棋盘滴定法,确定最佳实验条件,建立双抗体夹心ELISA检测系统。检测rCsa2和白念珠菌不同培养时间的上清,确定检测方法的灵敏度;检测其他3种念珠菌、5种曲霉、新型隐球菌和马尔尼菲青霉的培养上清,评价检测方法的特异性。结果成功构建表达载体并获得真核表达重组蛋白rCsa2,经SDS-PAGE鉴定相对分子质量(Mr)为13 300,符合预期值;Western blot法证实该蛋白可与特异性抗体结合。免疫动物获得高效价免疫血清,并以此成功建立双抗体夹心ELISA,可检测rCsa2蛋白的灵敏度约为240 pg/mL,并最早可检测到培养18 h的白念珠菌培养上清,与其他10种临床常见真菌的培养上清无交叉反应。结论建立了有较高的检测灵敏度和特异性的Csa2的双抗体夹心ELISA,为区别诊断白念珠菌感染提供新的方法。; 刘玲丽蔡建飘刘彩怡郭勇晖潘玉先王艳芳车小燕; 关键词：白念珠菌双抗体夹心ELISA

SASR-CoV核衣壳蛋白在杆状病毒-昆虫系统的克隆表达及抗原性分析被引量：1: 2014年; 目的:SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)在杆状病毒-昆虫系统的表达,研究其抗原性。方法:利用PCR方法扩增SARS-NP全长基因,使用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶定向插入Bac-to-Bac系统的pFastBac HTC载体,构建重组质粒转化DH10Bac细胞,获得重组杆粒DNA后转染Sf9细胞,在High Five细胞中表达SARS-NP;表达产物经NiNTA亲和层析纯化及免疫印迹和ELISA方法验证抗原性。结果:成功构建pFastBac HTC-SARS-NP重组质粒,并在High Five细胞高效表达,获得相对分子量约48 kD的重组蛋白质。经验证,重组蛋白能被SARS-CoV NP的特异性单抗(8E1A17)和兔免疫血清识别,能与SARS患者血清反应,与健康人血清、人冠状病毒229E型和OC43型的杂交瘤培养上清、相对应的兔免疫血清、患者血清均无交叉反应,具良好抗原反应性。结论:SARS-NP成功表达于杆状病毒-昆虫系统,具较强抗原反应性,初步认为其与229E型和OC43型感染血清无交叉反应性。; 黄莉余志武潘玉先丘立文郝卫丁细霞车小燕余楠; 关键词：核衣壳蛋白杆状病毒抗原反应性

肠道病毒71型疫苗研究的新进展被引量：6: 2014年; 手足口病是以发热和手、足、口腔等部位的皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的一种常见于小儿的急性传染病,绝大部分患者病情较轻,少数可发生严重的神经系统并发症甚至死亡。引起手足口病的病原体主要为肠道病毒,包括埃可病毒、柯萨奇病毒和肠道病毒71型（EV71）等,以EV71、CoxA16最常见。研究表明EV71主要与重症型手足口病相关,EV71引起的神经系统并发症以及全身性并发症是手足口病的主要致死原因。近几十年在亚太地区的马来西亚、中国台湾、越南、中国大陆等地频繁暴发高死亡率的EV71感染,严重威胁了公共健康安全。然而目前临床上尚缺乏治疗EV71感染的良好药物,开发EV71疫苗成为控制EV71疫情的最佳策略。近几年,EV71疫苗的发展迅速,; 唐培余楠车小燕吴玉章; 关键词：肠道病毒71型疫苗神经系统并发症疱疹性咽峡炎 COXA16 高死亡率

建立检测18种(型/亚型)呼吸道病毒的两种循环参数的实时荧光定量PCR被引量：8: 2014年; 目的建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR,检测包括流感病毒、冠状病毒等18种（型/亚型）呼吸道病毒。方法引用文献报道的18种（型/亚型）呼吸道病毒引物和探针,建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法,考核方法的敏感性、特异性和准确性,并用临床标本进行验证。结果成功建立了可检测18种（型/亚型）呼吸道病毒的两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法;该法特异性较好,最低检测限为10拷贝数/μL,变异系数（CV）为1.26%~3.43%,重复性良好;408份临床标本中,用该法检测鼻拭子标本阳性率为63.2%（225/356）,肺泡灌洗液标本阳性率为25.0%（13/52）。结论建立的实时荧光定量PCR法简便、特异、敏感、稳定,适用于临床常见呼吸道病毒感染的早期诊断。; 陈钰静丁细霞郭勇晖余楠潘玉先余志武陈满君王压娣杜晓棠车小燕; 关键词：呼吸道病毒实时荧光定量聚合酶链反应特异性敏感性

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广东省高等学校珠江学者岗位计划(2009GDUPS)