广东省自然科学基金(5000424)
- 作品数：15 被引量：56H指数：6
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- 转化生长因子-β1诱导下肾小球系膜细胞Smad2的表达与Ⅳ型胶原分泌的相关性研究及来氟米特的干预作用
- 2013年
- 目的探讨转化生长因子(TGF)-β1诱导肾小球系膜细胞(GMC)中Smad2的表达与Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的相关性及来氟米特(LEF)的干预作用。方法建立体外培养大鼠GMC模型,经鉴定后第7代用于实验。按照对大鼠GMC模型处理方式将其分为:TGF-β1组(培养液+TGF-β1 5ng/mL),LEF-1组(培养液+LEF 5μg/mL+TGF-β1 5ng/mL),LEF-2组(培养液+LEF 50μg/mL+TGF-β1 5ng/mL)与对照组(仅加入培养液)。分别于15min,30min,1h,2h和6h收集标本,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定细胞培养上清液ColⅣ表达。采用间接免疫荧光法检测各组磷酸化(P)-Smad2蛋白表达;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2mRNA表达。结果在各时点,①ColⅣ表达量比较:TGF-β1组显著高于对照组(P<0.05),LEF-1与LEF-2组均显著低于TGF-β1组(P<0.05)。②P-Smad2表达量比较:在对照组仅少量表达,TGF-β1组表达明显升高,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.05);LEF-1与LEF-2组的P-Smad2表达较TGF-β1组显著下降,差异有显著意义(P<0.05)。③Smad2mRNA表达量比较:在TGF-β1组表达显著高于对照组(P<0.05),而在LEF-1组与LEF-2组显著低于TGF-β1组(P<0.01);但LEF-1组与LEF-2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。④GMC上清液中,ColⅣ与Smad2mRNA表达量呈正相关(r=0.707,P<0.05)。结论经TGF-β1刺激后,体外培养大鼠GMC中P-Smad2表达及ColⅣ表达量均增加,因此LEF可降低Smad2表达与ColⅣ表达水平,减轻细胞外基质(ECM)沉积。本研究结果为LEF的肾保护作用提供了实验依据。
- 胡雯辉于力温跃强张瑶郝志宏陈蓉燕
- 关键词：系膜细胞转化生长因子-Β1SMAD2来氟米特
- 盐酸二甲双胍对非酒精性脂肪肝大鼠脂肪组织肿瘤坏死因子α基因表达的影响被引量：5
- 2006年
- 【目的】以逆转录(RT)和实时定量聚合酶链式反应(real-timeqPCR)方法检测和分析非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型的药物干预效果。【方法】以高脂饲料饲喂雄性Wistar大鼠12周诱发NAFLD,然后转以基础饲料饲养,并分别进行盐酸二甲双胍干预与蒸馏水灌喂对照,每组8只,为期4周。从大鼠脂肪组织提取总RNA并逆转录成为cDNA,通过real-timeqPCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的相对水平,以t检验分析两组间数据的差异。【结果】干预组大鼠脂肪组织的TNF–αmRNA相对水平平均值(0.063±0.006)比对照组(0.126±0.015)下降,其差异显著(t=4.662,P=0.001)。【结论】盐酸二甲双胍可以显著地降低NAFLD大鼠脂肪组织TNF-α基因的表达水平,能够调节肝脏脂肪代谢和改善肝细胞脂肪变性。
- 江庆澜李瑜元曾峥周永健杜洪黄健何淼
- 关键词：非酒精性脂肪肝病肿瘤坏死因子Α干预基因表达盐酸二甲双胍
- 来氟米特对转化生长因子β_1诱导的体培养的大鼠肾小球系膜细胞中Smad2表达的影响
- 2010年
- 目的观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β_1刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)表达Smad2过程中发挥的作用。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定造模成功后第7代用于实验。按照对模型大鼠体外培养的肾小球系膜细胞的处理方式不同,将其分为TGF-β_1组(TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-1组(LEF 5μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-2组(LEF 50μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL)和对照组(无血清RPMI 1640培养液+20%胎牛血清)。分别于15 min,30 min,1 h,2 h和6 h收集标本,用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(phosphorylation-Smad2,p-Smad2)蛋白表达变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2mRNA表达变化。结果对照组磷酸化Smad2蛋白少量表达,阳性细胞率为(21.40±1.51)%。TGF-β_1组阳性细胞率为(70.00±3.23)%,30 min时表达开始升高,1 h及2 h时表达明显增高,6 h表达开始下降。各时间点LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,阳性细胞率分别为(23.60±2.80)%和(25.81±1.29)%,细胞荧光强度呈减弱趋势。与TGF-β_1组相比,LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,差异有显著意义(P<0.05)。但LEF-1组和LEF-2组与对照组比较,差异无显著意义(P>0.05)。肾小球系膜细胞中Smad2mRNA相对表达量,TGF-β_1组显著高于对照组,2 h时达高峰。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA显著低于TGF-β_1组,差异有显著意义(P<0.01);但LEF-1组和LEF-2组间比较,差异无显著意义(P>0.05)。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA相对表达量1h时较低,之后逐渐升高,说明随时间延长,来氟米特对体外培养的肾小球系膜细胞干预作用逐渐减弱。结论经转化生长因子-β_1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化Smad2蛋白和Smad2mRNA相对表达量分别增加,来氟米特可降低Smad2蛋白和Smad2mRNA表达水平,为来氟米特的肾脏保护作用提供理论依据。
- 胡雯辉于力郝志宏温跃强张瑶陈蓉燕张又祥
- 关键词：肾小球系膜细胞转化生长因子-Β1SMAD2来氟米特
- 激素耐药型与激素敏感型肾病综合征差异表达基因分析被引量：3
- 2009年
- 目的从基因水平探讨激素耐药型（steroid—resistant nephrotic syndrome，SRNS）和激素敏感型（steroid-sensitive nephrotic syndrome，SSNS）原发性肾病综合征分子遗传学机制。方法对原发性肾病综合征（SRNS患儿3例，SSNS患儿3例）和正常对照3名提取外周血单个核细胞总RNA；纯化mRNA，逆转录合成生物素标记的cRNA探针与基因芯片杂交；GCOS软件分析各组基因差异表达情况；层次聚类和Gene Ontology数据库进行生物信息学分析；定量PCR验证芯片的基因差异表达结果。结果与正常对照组相比较，与SRNS组和SSNS组相关的差异基因共157条；聚类分析显示SSNS组与对照组基因表达差异较小，SRNS组与前两者差异明显；功能分析发现与SRNS组相关的差异表达基因主要参与细胞核内生物学活动和细胞信号转导。结论不同临床和病理类型原发性肾病综合征涉及多个不同的差异基因和生物学途径，其中HLADRB4和CLNS1A基因可能在不同类型原发性肾病综合征发病机制中发挥重要作用。
- 陈蓉燕于力郝志宏王丽娜温跃强
- 关键词：肾病综合征激素耐药基因芯片
- 自噬与儿童肾脏疾病的研究进展被引量：7
- 2010年
- 1962年Ashford和Posen在用胰高血糖素处理小鼠肝细胞时观察到细胞中存在“self-eating（自食）”，并将这一现象命名为“autophagy（自噬）”，1963年DeDuve首次提出细胞自噬的生物学概念，但之后一段很长的时间里，并没有引起科学界的重视，直到近10年来，随着分子生物学技术、基因技术和自噬检测技术的飞速发展，以及在分子水平对自噬及相关分子调节机制的深入研究，自噬在儿童肾脏病的进程中所起的具体作用也在显现，选择性的激活或抑制自噬来阻止儿童肾脏疾病的进展可成为一种新的治疗手段。
- 于生友于力
- 关键词：细胞自噬肾脏疾病儿童分子生物学技术小鼠肝细胞胰高血糖素
- 福辛普利对大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响被引量：9
- 2007年
- 目的观察福辛普利(FOS)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及分泌细胞外基质(ECM)的影响。方法建立体外培养的大鼠 GMC,鉴定后3～10代用于实验。实验分为五组:对照组、LPS 刺激组(LPS 组)、福辛普利(FOS)高、中、低剂量组(分别为 FOS1组、FOS2组、FOS3组)。甲基噻唑基四唑(MTY)比色法测定24 h 和48 h 两个时间点各组细胞增殖,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定6 h、12 h 和24 h 细胞培养上清液中 ECM 蛋白含量;荧光半定量 RT-PCR 法检测 ECM 纤维连接蛋白(LN)β_2:mRNA 表达的变化。结果 (1)LPS 可诱导 GMC 增殖,FOS 可抑制LPS 诱导的 GMC 增殖;(2)正常培养的大鼠 GMC 可分泌一定量的 ECM,LPS 组在各时间点分泌 ECM均高于对照组(P<0.01),而 FOS 各组分泌 ECM 均低于 LPS 组(P<0.01);(3)正常培养的大鼠 GMC可表达一定量 LNβ_2:mRNA,LPS 组在各时间点 LNβ_2mRNA 表达量均高于对照组,FOS 各组表达量均低于 LPS 组。结论 LPS 可诱导 GMC 增殖且分泌 ECM 增加,FOS 可抑制 LPS 诱导的 GMC 增殖,从蛋白和 mRNA 两个水平抑制 LPS 诱导的 GMC 分泌 ECM 增加,为 FOS 对肾脏的保护作用提供了理论依据。
- 郝志宏于力王丽娜翁志媛张蕾赵丹张又祥
- 关键词：肾小球膜细胞分裂细胞外基质福辛普利
- 福辛普利对肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad信号通路的干预作用被引量：3
- 2010年
- 目的观察新型血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)--福辛普利(fosinopril,FOS)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白分泌和Smad2、Smad7mRNA表达量的影响。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3～10代用于实验。实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组(加5ng/L TGF-β1和5%的胎牛血清)和FOS组(加5ng/L TGF-β1、10μmol/L FOS和5%的胎牛血清)3组,分别于6、24和48h后ELISA法测定细胞培养上清液中ColⅠ蛋白表达量,荧光定量PCR法检测Smad2、Smad7 mRNA表达量的变化。结果①正常培养的大鼠GMC均有一定量的ColⅠ蛋白表达;TGF-β1刺激组在各时间点ColⅠ蛋白分泌均高于对照组(P<0.01),FOS各组ColⅠ蛋白分泌均低于TGF-β1刺激组(P<0.05)。②正常培养的大鼠GMC可表达一定量Smad2、Smad7 mRNA,TGF-β1刺激组在各时间点Smad2、Smad7 mRNA表达量均高于对照组,FOS治疗组Smad2 mRNA表达量均低于TGF-β1刺激组;Smad7 mRNA表达量在TGF-β1刺激组和FOS治疗组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论FOS可抑制TGF-β1诱导的GMC分泌ColⅠ增加,且能够从mRNA水平抑制TGF-β1诱导的大鼠Smad2 mRNA的表达量;FOS可能部分通过抑制TGF-β1/Smad信号通路中的Smad2的表达而发挥延缓肾小球硬化的作用。
- 张瑶于力郝志宏邓颖王丽娜张建青
- 关键词：肾小球系膜细胞TGF-Β1/SMAD信号通路福辛普利
- 嘌呤霉素损伤小鼠肾小球足细胞系中podocin表达与分布的影响及其意义被引量：4
- 2008年
- 目的Podocin是构成肾小球足细胞裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)完整性的重要分子,其表达异常与大量蛋白尿的形成有关。本研究采用体外培养肾小球足细胞系,探讨足细胞损伤过程中,podocin mRNA表达和分布变化与足细胞损伤的关系。方法将体外培养的足细胞采用随机数字表法设立为实验组与对照组。实验组采用嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激(剂量为50μg/mL),分别于8 h,24 h和48 h观察细胞形态、提取总RNA和细胞免疫组化观察podocin的分布。对照组用含10%FBS的RPMI 1640培养液培养。细胞图像应用Image J图像处理软件,计算实验组与对照组在上述各时间点200倍镜下随机选择的30个细胞的相对面积,半定量RT-PCR和间接免疫荧光法检测podocin mRNA表达和分布变化。结果对照组呈星形伸出树枝状突起,相邻细胞间形成相互连接。实验组细胞体缩小,足突回缩、消失,细胞间失去相互连接。上述各时间点两组间podocin mRNA表达比较,差异无显著意义(P>0.05)。Podocin在对照组呈细丝状均匀分布于细胞核膜、细胞质及细胞膜;在实验组主要沿细胞核膜呈点线样分布,刺激后8 h和24 h细胞质有少许分布,刺激48 h后出现细胞膜、细胞质分布缺失。结论Podocin分布异常与足细胞损伤密切相关,损伤早期即有变化;podocin分布异常是足细胞损伤过程中的重要分子效应。
- 温跃强于力温捷郝志宏陈蓉燕王丽娜
- 关键词：PODOCIN嘌呤霉素
- 地塞米松通过稳定podocin的表达和分布抑制嘌呤霉素对小鼠肾小球足细胞的损伤被引量：7
- 2009年
- 目的观察嘌呤霉素（PAN）和地塞米松（DEX）对足细胞分子podocin表达和分布的影响，探讨DEX改善蛋白尿的机制。方法体外培养小鼠足细胞（MPC5），分为对照组、PAN组和DEX组。对照组用含0．02％DMSO的RPMI-1640培养液培养；PAN组加入PAN；DEX组同时加入PAN和DEX。处理后8h、24h和48h，观察细胞形态并摄像，用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差异。用RT—PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色检测各时间点podocin mRNA和蛋白的表达及分布。结果正常足细胞呈星形，胞体大并有树样突起，细胞相互连接。PAN刺激8h，足细胞胞体面积缩小，为对照组的43％；24h为10％；48h为5．7％（P〈0．01）；部分足细胞足突及细胞连接消失。DEX组在8h、24h和48h，足细胞胞体面积显著大于PAN组，分别为对照组的43．9％、26．2％及29．6％（P〈0．05），足突形态正常。PAN组podoein mRNA表达量呈下降趋势，蛋白表达量显著降低（P〈0．01），分布异常。DEX组podocin mRNA和蛋白的表达量及分布与对照组相似，48h时mRNA和蛋白的表达量均显著高于PAN组（P〈0．05）。结论DEX直接作用于足细胞，稳定podocin mRNA和蛋白的表达量及分布，该作用可能与其能保护足细胞及改善蛋白尿有关。
- 温跃强于力温捷郝志宏陈蓉燕王丽娜
- 关键词：足细胞地塞米松嘌呤霉素PODOCIN
- 脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究被引量：6
- 2007年
- 目的观察脂多糖(LPS)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及分泌细胞外基质(ECM)的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组:对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑(MTT)比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR(RT-PCR)法检测ECM中层黏连蛋白(LN)β2 mRNA表达的变化。结果(1)LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义(P<0.05);(2)正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义(P<0.01);(3)正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义(P<0.01)。结论从蛋白和 mRNA两个水平同时观察到ECM成分(如FN、LN和ColⅣ)的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。
- 于力郝志宏王丽娜翁志媛赵丹张又祥
- 关键词：细胞外基质系膜细胞脂多糖
