国家自然科学基金(31201936)
- 作品数：15 被引量：56H指数：5
- 相关作者：程龙飞万春和陈红梅施少华傅光华更多>>
- 相关机构：福建省农业科学院福建农林大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金福建省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭RLRs和IFN基因SYBRGREENⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2015年
- 首次建立以 GAPDH 为内参，同时检测鸭 RIG-I 、MDA5、IFN-α和 IFN-γ等4种 mRNA 相对表达量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 方法（RT-FQ-PCR）。以目的基因的克隆质粒为标准品，建立标准曲线，并进行熔解曲线、重复性及稳定性分析。该方法 Ct 值线性范围为12．0～32．0；目的基因（RIG-I 、MDA5、IFN-α、IFN-γ）和内参基因（GAPDH）的扩增效率均在95％～105％，其相关系数均在0．99以上；扩增产物的熔解曲线都只出现1个特异性单峰，无引物二聚体或其他非特异性产物生成，RIG-I 、MDA5、IFN-α、IFN-γ和 GAPDH 的 Tm 值依次为（81．9±0．33）、（81．9±0．32）、（93．6±0．23）、（81．8±0．28）、（87．8±0．24）℃，其敏感度均达到100 copies·μL－1，重复性和稳定性好，为从 mRNA 水平上深入研究 RIG-I 样受体、干扰素与鸭机体免疫功能相关性奠定了基础。
- 陈翠腾傅光华黄瑜傅秋玲万春和程龙飞陈红梅施少华
- 关键词：RIG-I干扰素实时荧光定量PCR
- 鸭坦布苏病毒在雏麻鸭体内的分布及排毒被引量：6
- 2013年
- 为了解鸭坦布苏病毒感(Duck Tembusu virus,DTMUV)染麻鸭的组织嗜性和排毒情况,应用RT-PCR方法检测鸭坦布苏病毒在麻鸭体内各组织的动态分布及和泄殖腔棉拭子的排毒情况。结果显示最早在感染第1 d于心脏、脾脏、肺脏、气管、胰腺、直肠可检测到鸭坦布苏病毒核酸的存在;至第7、9 d时,在各组织脏器中均仍能检测到该病毒核酸;至第21 d时,仅能在脑、胰腺和直肠中可检测到病毒核酸。病毒在脑和直肠中时间最长(25 dpi),胰腺(21 dpi)和肝脏(21 dpi)次之。对不同时间采集的泄殖腔棉拭子检测结果显示,于感染第1 d即能检测到该病毒核酸,25 d后即检测不到该病毒的存在。以上检测结果表明鸭坦布苏病毒感染雏麻鸭后能迅速入侵麻鸭各组织脏器,主要侵染肝、肺、肾、胰腺和直肠,并可通过粪便等途径向外界排毒。
- 陈雷傅光华黄瑜祁保民傅秋玲施少华程龙飞万春和陈红梅陈翠腾林芳林建生
- 入孵种鸭胚病毒性感染的检测及禽坦布苏病毒的分离鉴定被引量：2
- 2015年
- 本研究应用RT-PCR技术对孵化过程中死亡的不同品种种鸭胚进行常见病毒感染检测。结果表明,死亡的种鸭胚感染病毒种类多达9种,且首次从鸭胚中检测到禽坦布苏病毒（ATV）感染,不同品种的种鸭胚病毒感染率差异较大,以种番鸭胚感染率最高达58.82%。ATV囊膜蛋白（E）基因分析表明,3株种鸭胚ATV分离毒（PT15-4株、FJFQLL36株和PT15-27株）与GenBank中已发布鸭源ATV囊膜蛋白的核苷酸及氨基酸序列同源性分别在97.2%~99.8%及97.1%~99.4%之间,亲缘关系密切。动物试验表明,3株病毒对开产麻鸭的致病性不尽相同,其中PT15-4株和PT15-27株可引起麻鸭产蛋量显著降低及卵巢的出血病变,而FJFQLL36株病毒对麻鸭产蛋影响不明显,且未引起蛋鸭卵巢明显出血或卵黄液化病变。以上结果表明,我国种鸭胚中病毒性感染较为复杂,而且还出现了ATV的感染,尽管不同禽坦布苏病毒分离株间存在毒力差异,但均可从种鸭经卵传播到种蛋而成为新的传染源。
- 傅光华危斌勇陈翠腾傅秋玲潘飞龙程龙飞陈红梅万春和施少华黄瑜
- 鸭感染禽坦布苏病毒血清学检测与分析
- 为了解中国鸭群感染禽坦布苏病毒流行病学的情况,采用建立的间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)对于2010年6月—2013年9月三年内采白福建、江西、浙江、广东、广西五省(区)发生产蛋异常鸭场的各品种开产种(蛋)鸭、后备...
- 傅秋玲施少华陈珍傅光华程龙飞万春和陈红梅林建生黄瑜
- 鸭感染禽坦布苏病毒血清学的检测与分析被引量：4
- 2014年
- 为了解中国鸭群感染禽坦布苏病毒流行病学的情况,采用建立的间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)对于2010年6月—2013年9月三年内采自福建、江西、浙江、广东、广西五省(区)发生产蛋异常鸭场的各品种开产种(蛋)鸭、后备种(蛋)鸭及肉鸭血样共6854份进行禽坦布苏病毒抗体的检测,并对结果进行了分析。结果表明:开产种(蛋)鸭、后备种(蛋)鸭及肉鸭中除肉用番鸭血清中未检出禽坦布苏病毒抗体外,其他品种鸭血清中禽坦布苏病毒抗体阳性率高低不一,揭示存在不同程度的禽坦布苏病毒感染,且感染谱扩大到肉鸭,为以上省(区)乃至中国鸭群需做好禽坦布苏病毒感染的预防提供了科学依据。
- 傅秋玲施少华陈珍傅光华程龙飞万春和陈红梅林建生黄瑜
- 鸭坦布苏病毒琼脂扩散试验方法的建立被引量：2
- 2014年
- 研究建立了一种检测鸭坦布苏病毒的琼脂扩散试验方法。经摸索最佳的抗体和抗原最适浓度后,通过特异性试验、重复性试验和灵敏性试验验证了该方法的可行性。结果表明,该方法的最佳抗体和抗原稀释倍数分别为1∶16和1∶8,该抗体不与H9亚型禽流感病毒、副黏病毒、胰腺炎型鸭甲肝病毒、小鹅瘟病毒、鸭源大肠杆菌发生交叉反应,敏感性为1∶32,且重复性良好。采用此方法检测样品的结果与RT-PCR的符合率达87.9%。本研究建立的琼脂扩散检测方法具有特异性强,稳定性好,敏感性高等优点,为坦布苏病毒的检测提供了简单的方法。
- 傅秋玲傅光华苏荣茂黄瑜陈珍程龙飞万春和陈红梅施少华林建生
- 关键词：琼脂扩散试验
- 鸭坦布苏病毒E蛋白包被抗原间接ELISA方法的建立
- 以鸭坦布苏病毒E蛋白的主要优势抗原表位区E1蛋白作为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒中和抗体效价的间接ELISA方法。优化后确定最佳的抗原包被浓度为1.548 mg·L-1,血清的最佳稀释度为1:100,酶标二抗的稀释度为...
- 傅秋玲陈珍施少华傅光华程龙飞陈红梅万春和林建生黄瑜
- 关键词：E蛋白间接ELISA
- 文献传递
- 不同禽源坦布苏病毒抗原相关性的测定与分析
- 2015年
- 为了比较不同禽源坦布苏病毒(TMUV)抗原的相关性,通过细胞微量血清交叉中和试验测定了分离自种鸭、蛋鸡、肉鹅的不同禽源坦布苏病毒之间的抗原相关值,并进行了抗原相关性分析。结果测得抗鸭源TMUV阳性血清对鸭源TMUV、鸡源TMUV和鹅源TMUV的中和效价分别为1:1 349、1:1 202和1:1 318,抗鸡源TMUV阳性血清对鸭源TMUV、鸡源TMUV和鹅源TMUV的中和效价分别为1:1 023、1:1 023和1:977,抗鹅源TMUV阳性血清对鸭源TMUV、鸡源TMUV和鹅源TMUV的中和效价分别为1:933、1:912和1:955。根据亲缘值(R值)(R=√r1×r2)计算公式,得出鸭源TMUV与鸡源TMUV、鹅源TMUV间的抗原亲缘值(R)分别为0.94和0.95,鸡源TMUV与鹅源TMUV间的抗原亲缘值(R)为0.91,可见3种不同禽源TMUV之间的R均大于0.7,表明三者为同一血清型的坦布苏病毒。
- 傅秋玲傅光华黄瑜程龙飞万春和施少华陈红梅陈翠腾陈珍林建生
- 禽坦布苏病毒感染的宿主及临床表现被引量：17
- 2014年
- 自2010年4月至今近4年来,我国学者对坦布苏病毒的全基因组、生物学特性、分子生物学、致病性、快速检测技术和灭活疫苗等开展了研究,目前该病毒已成为我国禽病研究的热点和重点。本文结合我们广泛开展的临床流行病学调查、病原学检测、病毒全基因组序列测定与分析和人工感染试验结果,就我国坦布苏病毒的研究进展、感染的宿主范围、流行区域，不同源禽坦布苏病毒的全基因遗传进化关系、不同家禽感染的临床表现及类症鉴别介绍如下。
- 黄瑜苏荣茂傅光华万春和陈红梅傅秋玲陈珍施少华程龙飞林建生
- 关键词：病毒感染人工感染试验全基因组序列养鸭业樱桃谷肉鸭遗传进化分析
- 鸭坦布苏病毒E蛋白包被抗原间接ELISA方法的建立被引量：8
- 2015年
- 以鸭坦布苏病毒E蛋白的主要优势抗原表位区E1蛋白作为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒中和抗体效价的间接ELISA方法。优化后确定最佳的抗原包被浓度为1.548mg·L-1,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的稀释度为1∶6 000。特异性表明,用建立的ELISA方法对禽流感、新城疫病毒、1型鸭肝炎病毒、胰腺型鸭甲肝病毒、禽霍乱和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清进行检测,均未发生交叉反应;批内和批间重复试验的平均变异系数都小于10%;敏感性达1∶3 200。该方法与以全病毒为包被抗原的间接ELISA检测结果相关性达到95.1%。利用该方法对237份来自福建省开产麻鸭的血清样品进行检测表明,其血清阳性率达77.9%,表明福建省开产麻鸭感染鸭坦布苏病毒阳性率很高。本试验建立的间接ELISA检测方法具有特异性强,重复性好,敏感性高,为鸭坦布苏病毒抗体检测提供了简单快捷的检测方法。
- 傅秋玲陈珍施少华傅光华程龙飞陈红梅万春和林建生黄瑜
- 关键词：E蛋白间接ELISA
