云南省应用基础研究基金(2012FD083)
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
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- 云南半细毛羊毛囊干细胞表面标记物的鉴定被引量：2
- 2014年
- 设计8对引物(CK14、CK15、CK19、CD34、CD271、CD200、nestin和β1),分别扩增云南半细毛羊成纤维细胞和毛囊干细胞表面标记物。结果表明:在成纤维细胞中CK19和β1表现为阳性,而在毛囊干细胞中CK14、CK19和β1表现为阳性,其他标记物的表达都为阴性。因此,CK14可以作为鉴定云南半细毛羊毛囊干细胞的表面标记物之一。
- 李东江权国波杨红远吕春荣洪琼花
- 关键词：云南半细毛羊毛囊干细胞表面标记物
- 云南半细毛羊毛囊干细胞微生物污染检测被引量：2
- 2014年
- 为检测云南半细毛羊毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)是否受到微生物污染,为后续的诱导分化等研究奠定基础。用培养法检测细菌、真菌污染;利用荧光染色剂Hoechst33342检测支原体污染。结果表明:实验组细胞和阴性对照中均没有发现细菌污染,实验组中有25%的细胞受到霉菌污染;实验组细胞经Hoechst33342荧光染色后,仅细胞核显色,细胞表面及细胞周围干净、清晰,无荧光小点。说明云南半细毛羊HFSCs没有细菌、支原体污染,仅有25%细胞受到霉菌污染。霉菌孢子对环境的耐受力很强,普通的消毒液很难清除,所以对操作环境带来严重危害。
- 吕春荣李卫娟权国波洪琼花
- 关键词：云南半细毛羊污染
- 云南半细毛羊毛囊干细胞系的建立
- 2017年
- 【目的】研究云南半细毛羊毛囊干细胞(Hair follicle stem cells,HFSCs)的分离培养方法。【方法】用组织块法原代培养云南半细毛羊HFSCs,并进行细胞纯化和传代培养,培养液为无血清培养液DMEM/F12+40ng/mL bFGF+20ng/mL EGF+20μL/mL B27+100IU/mL青霉素+100IU/mL链霉素。对建立的细胞系进行免疫组化、RT-PCR和流式细胞术鉴定。【结果】HFSCs体积小,为贴壁生长细胞,呈典型的铺路石状,核质比高,在倒置显微镜下胞体透亮、折光性强。RT-PCR分析表明,HFSCs表达K14、K19和β1-integrin,但是不表达CD271和nestin。免疫组化分析结果表明,HFSCs表达K14,不表达CD271。流式细胞术鉴定表明,HFSCs表达K14,阳性率为93.5%;不表达CD271。【结论】建立了云南半细毛羊HSFCs无血清体外培养技术体系。
- 吕春荣权国波吴国权洪琼花
- 关键词：云南半细毛羊毛囊干细胞细胞鉴定
- 云南半细毛羊毛囊干细胞无血清培养体系的建立
- 2014年
- 试验旨在研究云南半细毛羊毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)的分离、培养及鉴定方法,为下一步的诱导分化研究奠定基础。方法:采用组织块法原代培养云南半细毛羊HFSCs。并对分离得到的细胞进行免疫组化鉴定。培养结果:HFSCs为贴壁生长细胞,体积小,核质比高,呈典型的铺路石状,在显微镜下折光性强、胞体透亮。免疫组化分析结果表明:细胞表达K14、不表达CD271。证明所培养的细胞为HFSCs。结论:试验采用组织块培养法初步建立了云南半细毛羊无血清培养HFSCs,这对于探讨云南半细毛羊毛囊生长发育调控机制以及成体干细胞增殖分化特性具有非常重要的意义。
- 吕春荣权国波欧阳依娜沈伟洪琼花
- 关键词：云南半细毛羊毛囊干细胞
- 云南半细毛羊毛囊干细胞凋亡研究被引量：2
- 2015年
- 采用2种不同方法检测云南半细毛羊毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)凋亡情况,为后续的诱导分化研究奠定基础。利用凯基TUNEL-细胞凋亡原位检测试剂盒和Annexin V-EGFP/PI标记结合流式细胞仪检测HFSCs凋亡。结果:凯基TUNEL-细胞凋亡原位检测试剂盒检测表明,第2代细胞凋亡率6.0%,第6代细胞凋亡率6.5%;Annexin V-EGFP/PI标记结合流式细胞仪检测表明,第2代细胞凋亡率0.24%,第6代细胞凋亡率0.80%。说明云南半细毛羊HFSCs细胞生长状态很好。随着传代次数的增加,细胞凋亡率有所上升。
- 吕春荣权国波吴国权洪琼花
- 关键词：云南半细毛羊细胞凋亡
- 云南半细毛羊毛囊干细胞生物学特性分析
- 2013年
- 为研究云南半细毛羊毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)的生物学特性,采用组织块法分离培养云南半细毛羊HFSCs,并对其细胞形态、生长动力学、冷冻与复苏、染色体核型等生物学特性进行分析。结果表明:HFSCs为贴壁生长,体积小,核质比高,呈典型的铺路石状,在显微镜下折光性强、胞体透亮。细胞生长曲线为"S"型。冻存前细胞活率98.2%,复苏后细胞活率96.4%。染色体中正常二倍体数目2n=54,其中,长染色体中有3对为中着丝点染色体,23对为端着丝点染色体,X染色体为最大的近端着丝点染色体,Y染色体为最小的亚中着丝点染色体。所得细胞呈现典型的HFSCs特征,细胞活性好,细胞系为稳定的二倍体细胞系。
- 吕春荣李东江权国波沈伟杨红远洪琼花
- 关键词：云南半细毛羊毛囊干细胞生物学特性
