吉林省科技厅国际合作项目(20060722)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
- 相关作者：谭岩方艳秋徐立许淑芬熊斌更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院吉林大学第二医院济宁医学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅国际合作项目吉林省杰出青年科学基金吉林省科技厅基础研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Anti-β_2-GPⅠ抗体ELISA检测方法的建立及在RSA患者的临床应用
- 2009年
- 目的:应用重组人β2-糖蛋白Ⅰ(recombinant humanβ2-glycoproteinⅠ,rhβ2-GPⅠ),建立检测抗β2-GⅠ抗体(anti-β2-GPⅠantibody,anti-β2-GPⅠ)的ELISA方法,将其用于临床反复自然流产(recurrent spontaneousabortionRSA)患者的检测。方法:应用SDS-PAGE、ELISA、Western Blot方法鉴定制备的rhβ2-GPⅠ蛋白,以制备的rhβ2-GPⅠ蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,对RSA患者血清进行检测。结果:SDS-PAGE结果显示在34KD处的蛋白带与理论大小相当,westblot和ELISA实验结果显示多克隆抗体能够与其特异性结合;应用制备的rhβ2-GPⅠ蛋白建立了检测anti-β2-GPⅠ抗体的ELISA方法,实验结果与商品化的进口试剂盒无差异。结论:制备的rhβ2-GPⅠ蛋白具有很好的抗原性,可用于临床anti-β-GPⅠ抗体的检测,为临床RSA患者的检测提供了一种新的检测试剂盒。
- 徐立于庭金玉芬谭岩方艳秋
- 重组人β2糖蛋白1第一结构域二聚体作为抗磷脂抗体综合征B细胞耐受原的初步探讨
- 2009年
- 目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域二聚体(rhβ2-GP1-DⅠ2)对重组人β2糖蛋白1(rhβ2-GP1)免疫小鼠β2-GP1特异性B细胞反应的抑制作用。方法:应用固相ELISA方法,检测静脉注射rhβ2-GP1-DⅠ2后免疫小鼠产生的抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)滴度及anti-β2-GP1产生水平比率;应用ELISPOT方法,检测静脉注射rhβ2-GP1-DⅠ2后免疫小鼠脾脏β2-GP1特异性抗体形成细胞(AFC)数量。结果:静脉注射rhβ2-GP1-DⅠ2后,与对照组比较,rhβ2-GP1免疫小鼠βanti-β2-GP1滴度明显降低(P<0.01),anti-β2-GP1产生水平比率下降,β2-GP1特异性AFC数量明显减少(P<0.01)。结论:静脉注射rhβ2-GP1-DⅠ2能够抑制rhβ2-GP1免疫小鼠β2-GP1特异性B细胞的反应能力。
- 付嘉谭岩方艳秋熊斌徐立
- 关键词：抗磷脂抗体综合征
- 人铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化被引量：4
- 2008年
- 目的构建人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白,为其临床应用奠定基础。方法根据已报道的hCu,Zn-SOD基因序列,采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞(PBMC)中获得SODcDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,重组质粒经酶切,PCR及测序鉴定正确后,将目的片段插入原核表达载体PET20b(+)中并转化大肠杆菌DE3,通过IPTG诱导表达出目的蛋白,经镍固定金属亲和层析纯化。采用邻苯三酚自身氧化法测定SOD生物学活性。结果序列分析表明SOD基因成熟肽编码区含有465bp与GenBank(X02317)中已报道序列一致的SOD核苷酸。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示表达的目的蛋白分子质量约为19kD并与商品化的人SOD单抗呈特异性反应。经Ni2+-NTA琼脂糖纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带。可溶蛋白酶活力达1300U/ml。结论在大肠杆菌中获得了人SOD的高效表达,为研究其生物学功能和广泛应用奠定了基础。
- 刘磊许淑芬方艳秋谭岩
- 关键词：表达纯化大肠杆菌
- 口服重组β2糖蛋白1的实验性抗磷脂综合征小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞及Foxp3 mRNA表达变化被引量：3
- 2010年
- 目的:观察口服重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)的实验性抗磷脂综合征(EAPS)小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)数量和功能变化,探讨EAPS口服耐受机制。方法:以rhβ2GP1主动免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型,口服耐受组在EAPS小鼠免疫10天前经胃肠道给予rhβ2GP1,在免疫12周后检测各组小鼠抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)、抗心磷脂抗体(aCL)、流产率(%)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、血小板计数(PLTPBC);以流式细胞术检测各组小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg细胞百分率;RT-PCR检测转录因子Foxp3mRNA的表达。结果:耐受组小鼠与模型组相比,anti-β2-GP1、aCL水平明显降低,aPTT缩短,PLTPBC升高,流产率降低,均具有显著性差异(P<0.05);耐受组小鼠PBMC中Foxp3mRNA表达在第4、8、12周均高于对照组(P<0.05),此后下降,20周时与正常对照组无明显差异(P>0.05),4周时与模型组无差异(P>0.05),8周后模型组逐渐降低,12周后降低明显(P<0.05);耐受组PBMC中CD4+CD25+Treg细胞百分率与对照组相比,未见显著性差异(P>0.05)。结论:CD4+CD25+Treg在口服耐受的诱导中发挥作用。
- 付嘉方艳秋司传平熊斌谭岩徐立
- 关键词：抗磷脂综合征口服耐受FOXP3
- 人白细胞介素24基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达
- 2008年
- 目的:构建人白细胞介素24(hIL-24)基因原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达hIL-24蛋白,并测定其生物学活性。方法:用PCR方法从含有hIL-24的质粒中扩增hIL-24cDNA序列,测序鉴定正确后,应用基因重组技术构建PQE/hIL-24,并转入大肠杆菌(E.coli)M15。IPTG诱导表达目的蛋白,镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析鉴定结果,应用外周血单核细胞(PBMCs),通过ELESA法分别在48和72h检测rhIL-24刺激的PBMCs中IL-6、IFN-γ及TNF-α产生情况。结果:获得与GenBank中报道一致的hIL-24基因片段。SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,获得具有hIL-24免疫原性、相对分子质量约为18400目的蛋白。Ni2+-NTAagarose纯化得到单一条带蛋白,获得rhIL-24蛋白刺激的PBMCs,PBMCs分泌IL-6、IFN-γ、TNF-α的水平显著高于未刺激前分泌水平(P<0.05),rhIL-24具有与天然hIL-24蛋白相同的生物学活性。结论成功地构建了hIL-24的原核表达载体,在E.coli中高效表达了rhIL-24蛋白,获得了与天然hIL-24蛋白具有相同生物学活性的rhIL-24。
- 杨丹方艳秋许淑芬段秀梅谭岩
- 关键词：白细胞介素24白细胞介素6肿瘤坏死因子
- 重组可溶性TRAIL的表达及其诱导A549和H460^(wt)细胞凋亡被引量：6
- 2008年
- 目的:获得人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)蛋白,并探讨其应用于非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的前景。方法:RT-PCR从外周血单核细胞(PBMCs)中获取目的基因片段,构建重组质粒PQE30-TRAIL并转化入大肠杆菌(E.coli)M15,IPTG诱导目的蛋白表达并经镍固定金属亲和层析纯化,MTT法检测细胞增殖情况,荧光显微镜观察H460wt细胞的形态学改变,流式细胞仪检测其凋亡率。结果:获得与GenBank中报道一致的TRAIL基因片段。SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,获得具有TRAIL免疫原性、相对分子质量约为21000目的蛋白。Ni2+-NTAagarose纯化得到单一条带蛋白。rsTRAIL处理H460wt细胞24h后,细胞凋亡率为43.2%,顺铂可以增强rsTRAIL对A549细胞的杀伤作用。结论:获得了与天然TRAIL蛋白具有相同生物学活性的目的蛋白,该目的蛋白具有诱导NSCLC细胞凋亡的作用,联合顺铂能够增强rsTRAIL对NSCLC的杀伤作用。
- 刘磊方艳秋许淑芬谭岩
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞凋亡
- 重组人β2糖蛋白1作为抗磷脂抗体综合征口服耐受原的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨口服重组人β2糖蛋白1(rhβ2-GP-1)诱导小鼠β2-GP-1特异性免疫耐受机制。方法:以rhβ2-GP-1免疫小鼠,在免疫的不同时间给予小鼠口服不同剂量的rhβ2-GP-1,应用3H-TdR掺入法检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖水平,应用ELISA方法检测免疫小鼠抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP-1)产生滴度以及免疫小鼠IL-4、IL-10、IL-2、IFN-γ、TGF-β等细胞因子的产生情况。结果:在免疫的不同时间、口服不同剂量的rhβ2-GP-1可不同程度地诱导免疫小鼠anti-β2-GP-1滴度下降;耐受小鼠T淋巴细胞增殖水平明显降低(P<0.01);IL-4、IL-10、TGF-β水平显著升高,IL-2水平显著降低,IFN-γ水平未见显著变化。结论:在合适的时间口服适当剂量的rhβ2-GP-1能够诱导小鼠β2-GP-1特异性免疫耐受。
- 付嘉谭岩方艳秋熊斌徐立司传平
- 关键词：抗磷脂抗体综合征免疫耐受
