北京市科委公益应用项目
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 相关作者：高正琴贺争鸣岳秉飞张强邢进更多>>
- 相关机构：中国药品生物制品检定所首都医科大学附属北京佑安医院中华人民共和国农业部更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 16S rRNA序列分析在多杀巴斯德氏菌鉴定中的应用被引量：6
- 2009年
- 目的应用16s rRNA序列分析方法,对多杀巴斯德氏菌进行鉴定。方法采集猝死家兔样本,进行病理组织学检查和病原菌分离培养。针对细菌16S rRNA基因保守区序列设计一对引物,以分离菌株抽提的DNA为模板,进行PCR扩增及16S rRNA序列分析。结果从死亡家兔肺脏中分离鉴定出了一株多杀巴斯德氏菌(PMr0901)。将分离菌株序列与GenBank中收录的序列进行比较,BLAST分析结果显示PMr0901与多杀巴斯德氏菌参考菌株PM70的16S rRNA核苷酸同源性大于99%。分离菌株对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、左氧沙星、四环素敏感,而对青霉素G已产生耐药性。结论16s rRNA序列分析的分子生物学方法可用于病原菌的鉴定。
- 高正琴张强贺争鸣岳秉飞
- 关键词：RRNA
- 贵州小型猪幽门螺杆菌的分离及其鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的对贵州小型猪幽门螺杆菌进行分离鉴定。方法采集1只生长发育异常迟缓的小型猪标本，采用细菌学分离培养、生化鉴定、药敏试验、血清学试验、PCR检测等方法进行鉴定，并对细菌的分子生物学特征进行分析。结果分离到1株细菌，经鉴定为幽门螺杆菌（HPp0812）。用螺杆菌属16SrRNA基因和幽门螺杆菌ureA基因特异引物对HPp0812细菌的PCR扩增为阳性，经核苷酸序列测定分析证实上述序列与幽门螺杆菌参考株基因序列同源性高达99％。结论首次从中国小型猪中分离到了幽门螺杆菌，为进一步研究该菌及开展流行病学调查提供了科学依据。
- 高正琴张强岳秉飞贺争鸣
- 关键词：小型猪幽门螺杆菌
- 布鲁氏菌和幽门螺杆菌等6种病原菌16S rRNA和cagA等基因的克隆与鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的克隆并鉴定布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法作准备。方法设计、合成布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌flaA、肝螺杆菌flaB和幽门螺杆菌的cagA基因的特异性引物;PCR扩增、克隆16SrRNA、flaA、flaB和cagA基因;对重组质粒进行酶切鉴定、PCR鉴定和测序分析。结果布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲杆菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的ca-gA基因PCR扩增产物分别在612bp、600bp、922bp、637bp、1545bp和1168bp处出现特异性目的条带,结果均与预期扩增的目的片段大小一致。将PCR产物分别与pMD18-T载体连接并转化感受态细菌大肠埃希菌JM109。对重组质粒pT-BC16SrRNA、pT-MP16SrRNA、pT-CP16SrRNA、pT-CJflaA、pT-HHflaB和pT-HPcagA分别进行酶切鉴定及PCR鉴定,结果均可见特异性目的条带。测序结果显示,布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因序列与GenBank中细菌相应序列同源性高达100%,说明上述6种致病菌的16SrRNA、flaA、flaB和cagA基因已成功克隆。结论成功克隆了布鲁氏菌16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法奠定了基础。
- 高正琴岳秉飞贺争鸣
- 关键词：布鲁氏菌空肠弯曲菌肝螺杆菌
- 中国小型猪空肠弯曲菌的首次分离及其鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的对中国小型猪空肠弯曲菌进行分离鉴定。方法采集发病小型猪标本,采用细菌学分离培养、生化鉴定、药敏试验、血清学试验、PCR检测等方法进行鉴定,并对细菌的分子生物学特征进行分析。结果分离到1株细菌,经鉴定为空肠弯曲菌(CJp0812)。用空肠弯曲菌flaA基因特异引物对CJp0812细菌的PCR扩增为阳性,经核苷酸序列测定分析证实上述序列与空肠弯曲菌NCTC11168基因序列(GenBank登录号:NC002163)同源性高达99%。结论首次从中国小型猪中分离到了空肠弯曲菌,为进一步研究该菌及开展流行病学调查提供了科学依据。
- 高正琴贺争鸣张强岳秉飞邢进
- 关键词：小型猪空肠弯曲菌
- 两个小型猪种群的部分细菌携带状况调查被引量：3
- 2009年
- 目的检测巴马和五指山小型猪细菌携带状况,为制定北京市实验用小型猪微生物检测标准提供基本数据。方法采集毛发、鼻拭子、气管分泌物、肛拭子和粪便等标本,采用分离培养、形态观察、生化反应等方法,检测不同部位细菌携带状况。结果两个品系小型猪群中均检出猪链球菌2型,大肠杆菌,绿脓杆菌,肺炎克雷伯杆菌,耳葡萄球菌和木糖葡萄球菌。结论采样部位和检测方法会影响细菌的检出率。
- 范薇隋丽华高正琴付瑞邢进刘永梅田克恭贺争鸣
- 关键词：小型猪细菌
- 乙型脑炎病毒结构蛋白C+pre M和E基因的克隆与序列分析
- 2009年
- 目的对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)结构蛋白基因进行扩增、克隆和序列测定。方法根据GenBank中发表的乙脑病毒结构蛋白基因C+pre M基因和E序列,设计合成两对引物,以JEV Nakayama-NIH株RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy载体连接并转化大肠杆菌DH5α菌株,提取的重组质粒用电泳、PCR和酶切鉴定后并进行测序。将JEV Nakayama-NIH与GenBank中报道的多株JEV结构蛋白C+pre M基因和E基因序列进行了比较。结果Nakayama-NIH与其他参考株C+pre M和E基因的核苷酸同源性为99%,证实扩增克隆的是JEV的结构蛋白C+pre M和E基因。结论对JEV分子生物学特征进行了分析,为JEV特异性核酸探针的研制奠定了基础。
- 高正琴岳秉飞贺争鸣
- 关键词：乙型脑炎病毒M基因E基因克隆测序
- 实验用小型猪呼吸道支原体检测及方法比较被引量：2
- 2009年
- 目的通过常用的三种不同方法对支原体的检测,了解实验用小型猪支原体感染情况,为今后实验用小型猪支原体检测方法国家标准的制定提供参考。方法采用培养法、PCR和ELISA方法分别对20头小型猪的气管、肺和血清进行检测。结果三种检测方法中,PCR方法支原体阳性检出率为15%,ELISA方法为20%,而培养法结果均为阴性。结论目前在普通级小型猪中存在支原体的感染。检测方法中PCR和ELISA方法较培养法更省时,敏感性更高。
- 邢进高正琴冯育芳岳秉飞贺争鸣
- 关键词：小型猪支原体检测
- 中国小型猪细菌分离鉴定及药敏试验被引量：9
- 2010年
- 目的对小型猪携带的细菌种群分布情况及耐药性进行调查分析。方法对小型猪采样进行细菌分离培养、生化鉴定和细菌16SrRNA基因PCR扩增、测序分析,并进行药敏试验。结果从25只小型猪中共分离到45株细菌。结果显示,小型猪携带的细菌种群主要有弯曲菌属(空肠弯曲菌)、螺杆菌属(幽门螺杆菌)、克雷伯菌属(肺炎克雷伯氏菌);肠杆菌属(阴沟肠杆菌);埃希菌属(大肠埃希菌、弗格森埃希菌);假单胞菌属(铜绿假单胞菌);窄食单胞菌属(嗜麦芽窄食单胞菌);葡萄球菌属(金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、模仿葡萄球菌);链球菌属(肺炎链球菌、猪链球菌、前庭链球菌、缓症链球菌、麻疹孪生球菌、绿色气球菌);肠球菌属(粪肠球菌);芽孢杆菌属(枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜂房芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌)。这些菌株对氨曲南、头孢噻吩等药物敏感,而对痢特灵等药物不敏感。结论小型猪携带的细菌种群具有多样性,研究结果为我国小型猪细菌学检测以及质量标准的制定提供了科学依据。
- 高正琴张强张强贺争鸣岳秉飞
- 关键词：小型猪细菌分离RRNA
