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Smad4诱导大规模染色质伸展结构域定位: 2004年; 目的 :了解Smad4能否调节大规模染色质结构改变并对其功能区域进行定位。方法 :将Smad4及其缺失突变体与 pRC lac载体上lac的阻遏物融合并在AO3 1细胞中表达。该细胞株由CHO细胞衍变而来 ,整合有 2 5 6个拷贝串联排列的lac操纵基因。在lac操纵子基因上游含有DHFR基因 ,可用甲氨蝶呤 (MTX)进行基因共扩增。在细胞中lac阻遏物识别和结合lac操纵子基因。用抗lac阻遏物抗体进行免疫组化试验 ,荧光显微镜下观察染色质结构的改变。结果 :野生型Smad4 (1～ 5 5 2aa)有一定的诱导染色质伸展能力 ,且不依赖于TGF β。N端区域 (1～ 15 0aa)、中间连接区域 (130～ 32 5aa)没有诱导大规模染色质伸展活性。C端区域 (2 6 0～ 5 5 2aa)有一定的诱导染色质伸展能力 ,而C端缺失 38个氨基酸残基的区域 (2 6 0～ 5 14aa)能强烈地诱导大规模染色质伸展。结论 :Smad4诱导大规模染色质伸展结构域位于 2 6 0～ 5 14位氨基酸之间 ,C端 38个氨基酸对Smad4诱导大规模染色质伸展有抑制作用。对Smad4诱导大规模染色质伸展活性特性的研究为揭示Smad4在肿瘤发生发展中的作用机制提供了新的途径。; 严景华方言吕秋军黄翠芬杨晓叶棋浓; 关键词：SMAD4 结构域

曲古抑菌素A对乙型肝炎病毒HBx蛋白与组蛋白去乙酰化酶1相互作用的影响: 2008年; 目的探讨曲古抑菌素A对乙型肝炎病毒HBx蛋白与组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）相互作用的影响。方法常规分了克隆技术构建HBx蛋白及HDAC1表达载体，Western blot分别验证蛋白质表达；谷胱甘肽转移酶沉降试验及免疫共沉淀技术分别于体内外验证HBX蛋白与HDAC1存在的相互作用。结果成功构建了HBx蛋白及HDAC1表达载体，体内外实验均证实HBx蛋白与HDAC1间存在相互作用，但HDAC1抑制剂曲古抑菌素A不影响两者间相互作用。结论HBx蛋白以曲古抑菌素A非依赖方式与HDAC1存在相互作用。; 韩聚强叶棋浓丁丽华李杰之杨晓黄翠芬; 关键词：组蛋白脱乙酰基酶曲古抑菌素A 蛋白相互作用

一种含多个CCP结构域的新型基因的克隆及生物学特性初探被引量：3: 2005年; 目的克隆并分析新型基因CCP22,研究其结构及初探生物学特性。方法常规分子克隆、生物信息学分析、Westernblot、RT-PCR。结果利用酵母双杂交技术从人乳腺文库中分离到一种含有22个补体调控蛋白(complement control protein,CCP)序列元件的新基因,命名为CCP22。生物信息学分析发现,该基因定位于人染色体9q31.2-32,共15个外显子,基因编码序列全长4494bp,编码1497个氨基酸。将CCP22基因全长编码序列克隆于真核载体中,该表达载体转染人胚肾细胞293T后获得的表达产物经Westernblot证实CCP22属于分泌蛋白。将CCP22与绿色荧光蛋白(EGFP)标签融合后证实CCP22主要分布在细胞核外。Northernblot证实,内源性CCP22mRNA转录本全长约6kb。RT-PCR检测表明,CCP22在正常乳腺细胞株中高表达,而在多种乳腺肿瘤细胞株中不表达或低表达。结论CCP22在乳腺肿瘤发生发展中可能发挥重要作用。; 韩聚强方言严景华焦园园吕秋军黄翠芬杨晓叶棋浓; 关键词：克隆乳腺癌

肝癌细胞雌激素受体显性阴性突变体ERδ5基因的分离及生物学功能分析被引量：3: 2006年; 临床流行病学研究显示,ERα基因第5外显子缺失突变体ERδ5在原发性肝细胞癌特异性高表达,它被认为是判断肝癌预后的最重要的新型分子标志.本研究从肝癌细胞分离雌激素受体突变体ERδ5基因,并对其进行克隆、表达,探讨其分子生物学特性及生物学功能.通过反转录PCR,从肝细胞分离出ERδ5基因并将其克隆到真核表达载体,通过体外翻译及Western印迹验证该基因成功表达;通过细胞荧光技术检测了ERδ5在肝细胞中的定位;利用荧光素酶报告基因检测技术确证ERδ5对ERα转录活性的影响.结果发现,从肝癌细胞分离出长1113bp的ERδ5基因,该基因编码蛋白在体外不稳定,易于降解.在肝癌细胞中,ERδ5蛋白主要定位在细胞核,与ERα定位极为相似,但在生物学功能上,ERδ5能够明显干扰ERα的转录活性.研究结果表明,ERδ5作为显性阴性突变体,在肝癌细胞中直接抑制ERα的转录活性.; 韩聚强袁斌丁丽华王晓辉熊志红杨智洪李杰之吕秋军杨晓黄翠芬叶棋浓; 关键词：雌激素受体分子克隆转录活性

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国家高技术研究发展计划(2002BA71102-5)