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一种基于TIL的肿瘤相关抗原特异性T细胞的筛选方法: 2014年; Wolfl 等[1]的研究建立了一种以 CD137为表面标记，从人 CD8＋T 细胞中快速鉴定和分离抗原特异性 T 细胞的方法。由于 CD137分子表达于活化的 CD4^＋和 CD8^＋T 细胞表面[2]，其表达上调依赖于 T 细胞经抗原刺激后活化，并可在抗原刺激后12 h ~5 d 内持续表达[3]。因此可以CD137为标记，从 T 细胞中检测和分离比例较低的抗原特异性 T 细胞。; 吴凤麟韦嘉灝贾筠何免邵红伟黄树林; 关键词：抗原特异性T细胞 TIL CD137 CD8^+T 抗原刺激

甘草水提物中miRNA对人免疫细胞基因表达的影响被引量：19: 2017年; 微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的非编码小分子RNA,其调控基因表达、影响细胞活性的功能已为人们所重视。近年来miRNA的跨界调控成为新的研究方向,为人们更全面地认识和了解miRNA的功能提供了新的视角。植物miRNA由于通常经过了甲基化修饰,因此较为稳定,不易降解。前期研究表明,甘草干燥药材的水煎剂中存在着丰富的小分子RNA,这为了解甘草的作用机制提供了新的思路。在本研究中,利用从甘草水煎剂中提取的小分子RNA以及合成的miRNA模拟物(mimic)作用于分离自健康人的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),然后利用RT-PCR对其模式识别受体(PRR)基因以及部分转录因子、信号分子和细胞因子的基因表达变化进行了分析。结果表明甘草miRNA对人免疫细胞的基因表达具有明显的调节作用,能够显著抑制T细胞分化相关基因的表达,以及炎症和凋亡相关基因的表达。这为进一步更全面地了解甘草的作用机制以及中药新药的研制带来了新的思路。; 向静黄洁嫦徐畅何免徐鹏程张丹张文峰沈晗邵红伟; 关键词：小分子RNA 基因表达

肿瘤患者胸/腹水和外周血中TCR Vβ亚家族表达及调节性T细胞亚群的研究被引量：4: 2012年; 目的:探讨肿瘤患者胸/腹水中肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)和外周血T细胞中T细胞受体(TCR)Vβ亚家族的表达变化情况、CD4/CD8细胞比例变化和Treg细胞的分布情况,分析肿瘤患者的免疫状态。方法:分离11例肿瘤患者胸/腹水和外周血以及4例健康人外周血的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD3、CD4、CD8、CD25、CD127的表达情况,统计分析T细胞中Vβ24个亚家族、Treg细胞的特点。结果:TCR Vβ亚家族的表达在肿瘤患者胸/腹水TIL中与血液淋巴细胞中存在着显著差异,其中肺癌患者(4/5)TIL中TCR Vβ8,结肠癌患者(3/4)TIL中TCR Vβ2等亚家族显著高表达;11例肿瘤患者胸/腹水样本中Treg的比例均比外周血高(P<0.05),其中5例肺癌患者胸腹水中CD8+T细胞比例降低。结论:肿瘤患者胸/腹水中的淋巴细胞TCR Vβ亚家族表达与外周血存在差异,表明肿瘤患者体内淋巴细胞发生了明显的优势取用和定向趋化。此外肿瘤微环境可能影响了TIL中CD4+细胞的分化导致胸腹水中Treg细胞的比例升高,同时伴随着CD8+T比例的下降,并可能因此影响到TIL中TCR Vβ亚家族的优势取用情况,且导致免疫耐受。; 区裕升邵红伟吴凤麟黄树林肖兰凤; 关键词：肿瘤调节性T细胞

TCRαβ分子识别抗原肽-MHC复合物的争议问题探讨被引量：1: 2013年; T细胞抗原受体（TCR）是T细胞表面的特征性标志分子，其与CD3分子组成的TCR．CD3复合体，是进行抗原识别，发挥细胞免疫重要功能的基础。一般认为．TCR必须识别抗原肽一MHC分子复合物才能活化T细胞，; 沈晗邵红伟黄树林; 关键词：分子识别抗原肽 T细胞抗原受体活化T细胞标志分子

稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系的建立及CCL17活化T淋巴细胞功能的初步鉴定: 2012年; 目的建立稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系并初步验证CCL17活化T淋巴细胞的抗肿瘤功能。方法分离肝癌患者腹腔液单个核细胞及淋巴细胞,提取单个核细胞总RNA,RT-PCR扩增CCL17基因,经克隆测序后将CCL17插入真核表达载体pCDNA3.1(-);将真核表达质粒转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,利用G418筛选抗性单克隆细胞株,Western blot检测细胞培养上清中CCL17的表达水平;用含CCL17的培养上清液刺激腹腔液来源淋巴细胞后,再与BEL-7402细胞共孵育,利用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡率,倒置相差显微镜观察肿瘤细胞形态学改变。结果成功克隆出CCL17基因全长序列,并构建了真核表达质粒pCDNA3.1(-)-CCL17;质粒转染BEL-7402细胞后经G418筛选获得5个抗性单克隆细胞株,Western blot结果显示5株细胞培养上清液中均有CCL17表达,其中克隆株F9、F11和G8表达量较高;与对照组比较,含CCL17培养上清液刺激后的腹腔液淋巴细胞,能诱导BEL-7402细胞发生显著凋亡样改变。结论成功构建了稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系,并初步证实含CCL17的细胞培养上清液有活化T淋巴细胞,促进杀伤肿瘤的作用。; 沈晗聂建云邵红伟黄树林; 关键词：肝癌细胞系稳定转染 T淋巴细胞

肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及记忆性T细胞表达的研究被引量：6: 2011年; 目的探讨肺癌患者外周血T细胞及胸水肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的T细胞受体(TCR)Vβ亚家族及记忆性T细胞的表达情况。方法分离健康人和肺癌患者的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD45RO和CD28的表达情况,统计分析Vβ24个亚家族及记忆性T细胞的特点。结果 43例肺癌患者外周血TCR Vβ亚家族主要高表达Vβ3(11/43)、Vβ9(12/43)、Vβ13.2(7/43);15例胸水TIL主要高表达Vβ3(5/15)、Vβ9(3/15)、Vβ21.3(3/15);肺癌组记忆性T细胞(29/35)多于健康对照组(4/35)(P<0.05)。结论肺癌患者TCR Vβ亚家族存在选择性表达的情况;肺癌患者以记忆性T细胞为主。推测这种高表达Vβ亚家族的T细胞可能部分是记忆性T细胞。; 郭宁宁黄树林邵红伟吴凤麟王辉刘魁凤舒阳春贾筠肖兰凤; 关键词：肺癌 TCR VΒ基因记忆性T细胞

OP9-DL1细胞共培养系统在T细胞体外定向诱导分化中的应用: 2012年; T细胞是一类在机体免疫应答中起核心作用的免疫活性细胞。T细胞的分化发育指来自骨髓的淋巴样祖细胞(lymph-oid pregnitors)进入胸腺增殖、分化,并从胸腺皮质迁移至髓质,成为成熟T细胞的过程。长期以来,T细胞发育的体内外研究一直依赖于胸腺。但人或鼠的胸腺组织来源有限且取材困难,加大了T细胞发育的研究难度。近年来,随着T细胞发育过程中一些关键分子的发现及其研究的不断深入,一种可高效诱导造血干/祖细胞在体外向T细胞分化的简单模型骨髓基质细胞OP9-DL1体外培养系统得以建立,这种系统的出现大大简化了T细胞分化发育的研究,本文将就其在T细胞体外定向诱导分化中的应用作一综述。; 袁茵鲁欣王辉邵红伟黄树林; 关键词：基质细胞 T淋巴细胞分化

肿瘤特异性TCRαβ基因转染诱导记忆性T细胞分化及其免疫功能的研究: 2013年; 目的研究特异性TCR基因转染T细胞被肿瘤抗原激活后,记忆性T细胞的分化情况,并明确其表型特征和免疫功能。方法密度梯度离心法分离PBMC,重组TCR腺病毒感染T细胞,流式细胞术检测外源TCR表达效率。AFP表位肽刺激T细胞,流式细胞术检测TCR基因转染T细胞经抗原刺激后,记忆性T细胞标志分子表达。MTT法检测T细胞对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果重组腺病毒载体感染3 d后,外源TCR表达比例接近30%。特异性TCR基因转染可有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化,CD45RO+细胞比例逐渐上升至接近50%。CD45RO+细胞以CD62L–CD44+表型为主。此后CD62L+细胞比例逐渐上升。最终出现分群明显的CD62L+CD44+TCM表型细胞。特异性TCR基因转染能够促进T细胞杀伤AFP+靶细胞,诱导靶细胞凋亡,并促进IFN-γ分泌。抗原预先刺激能够进一步增强TCR基因转染T细胞抗肿瘤免疫效应。结论 TCR基因转染能够有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化。经肿瘤抗原预先刺激的TCR基因转染T细胞将启动记忆性T细胞分化,在再次遭遇表达相同抗原的肿瘤细胞时发挥更为强烈的免疫效应。; 吴凤麟张文峰何免杨暖薄华本邵红伟黄树林; 关键词：转染

HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应: 2012年; 目的探讨HLA—A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用。方法生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽；流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率；肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）诱导反应性CTLs，用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况；肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育，CytoTox96@非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况，倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化。结果生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2（KMSSGCAFL），流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞，HLA-A2表达率显著提高，经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ，Sur79M2诱导的CTLs能通过HIA．A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2，对HLA—A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用。结论点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生，该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系。; 沈晗黄昭亮陈晓华林燕梅王腾邵红伟黄树林; 关键词：SURVIVIN 抗肝癌 HLA-A2限制性

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广东省自然科学基金(10151022401000024)

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