国家自然科学基金(30972181)
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- 犬钩虫(Ancylostoma caninum)daf-1基因的克隆和表达鉴定
- 2013年
- 目的对犬钩虫(Ancylostoma caninum)TGF-βⅠ型受体daf-1基因进行了克隆和鉴定,并在原核系统中进行表达。方法以犬钩虫总RNA为模板,用RT-PCR对犬钩虫TGF-β受体基因daf-1的cDNA进行扩增和克隆,用PCR筛选阳性克隆,双酶切鉴定并测序。将测序正确的阳性克隆双酶切后构建到表达载体pET-32m中,转化到E.coli DH5α内,提取质粒,酶切鉴定阳性,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌株内,对转化菌株用IPTG进行诱导培养。收集培养液,破菌、离心进行SDS-PAGE检测重组蛋白的表达。蛋白纯化后进行免疫,并通过免疫印迹检测在钩虫各时期的表达。结果电泳发现转化了重组质粒的菌株在IPTG诱导下表达的重组蛋白为58kDa,在钩虫各时期都有AcDAF-1的表达。结论成功进行了犬钩虫TGF-βⅠ型受体daf-1基因的扩增、克隆和表达并在各期检测到该蛋白的表达。
- 乔莹杨玉荣
- 关键词：克隆
- 秀丽线虫中p53/cep-1基因克隆、表达及其对寿命的影响
- 2010年
- Caenorhabditis elegans中的cep-l基因与哺乳动物中的肿瘤抑制因子p53同源,能够引发由DNA损伤导致的细胞凋亡。cep-l基因与寿命的关系研究并不多。我们利用C.elegans的cDNA进行PCR扩增得到cep-l的片段并构建到表达载体以及RNA干扰载体上,经过IPTG诱导表达得到了约90kDa的CEP-1融合蛋白。同时对C.elegans三种虫株:野生型,daf-2(e1370),daf-16(e1038)进行RNAi(RNA-mediated interference),发现cep-l RNAi之后野生型的寿命显著延长,另外两种虫株的寿命没有显著改变,并以RT-PCR的方法检测了cep-l在这三种虫株中的表达情况。
- 苏小珊杨玉荣
- 关键词：CAENORHABDITISELEGANS克隆RNAI
- 旋毛虫中C.elegans同源基因Tspar-6的克隆表达、定位和功能研究
- 旋毛虫是一种重要的人畜共患寄生虫,寄生于人体可导致严重的疾病。在C.elegans中par-6基因编码一个含有两个PDZ结构域的蛋白,与另一极性蛋白PAR-3一起和非特异性的蛋白激酶C(atypical protein ...
- 杨玉荣秦伟闻田桂梅
- 文献传递
