国家教育部博士点基金(20060660001)
- 作品数：12 被引量：47H指数：5
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- p38MAPK介导高糖下调肾小管上皮细胞表达BMP-7被引量：8
- 2010年
- 目的:观察高糖环境中培养的原代肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的作用。方法:原代培养大鼠肾小管上皮细胞,随机分为正常对照组、高糖组、p38MAPK阻断剂SB202190+高糖组和高渗组,处理72h后收集贴壁细胞,免疫细胞化学检测BMP-7和纤维连接蛋白(FN)表达;Westernblotting检测p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达;RT-PCR法检测BMP-7和FNmRNA水平。结果:正常对照组肾小管上皮细胞BMP-7主要表达于细胞浆,有少量总p38MAPK与FN表达,未见p-p38MAPK;高糖状态激活了p38MAPK,p-p38MAPK蛋白表达明显增加,FN的表达也明显增多而BMP-7的表达显著减少;与SB202190共同培养72h后,p-p38MAPK的表达较高糖组减少约80%,BMP-7的表达却被显著上调,而FN的表达减少。高渗组与正常对照组比较无明显差异。结论:高糖状态下肾小管上皮细胞BMP-7蛋白和mRNA均减少,阻断p38MAPK信号通路可促进内源性BMP-7增多,提示p38MAPK可能参与高糖下调肾小管上皮细胞BMP-7的表达。
- 肖瑛方开云石明隽刘瑞霞桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：P38MAPK
- Snail1 siRNA对高糖诱导肾小管上皮细胞表型转变的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:观察Snail1 siRNA对高糖诱导的肾小管上皮细胞向间充质细胞转变(TEMT)的影响。方法:原代培养肾小管上皮细胞分为5组:(1)对照组(含糖5.5mmol/L);(2)高糖组(含糖25mmol/L);(3)Snail1 siRNA处理组,转染Snail1 siRNA,6h后更换为高糖(含糖25mmol/L)培养;(4)control siRNA处理组,转染control siRNA作为siRNA阴性对照,6h后换为高糖(含糖25mmol/L)培养;(5)高渗组(含D-manntio19.5mmol/L);72h后收集细胞,用Western blotting和半定量RT-PCR检测Snail1、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、vimentin和E-cadherin蛋白和mRNA表达。结果:与高糖组比较,肾小管上皮细胞转染Snail1 siRNA后,Snail1 mRNA和蛋白表达水平分别下降62%和68%(P<0.01)。同时,Snail1 siRNA处理组α-SMA和vimentin蛋白和mRNA表达显著下调(P<0.01),而E-cadherin蛋白和mRNA表达显著上调(P<0.01)。结论:Snail1参与了高糖诱导TEMT的调节。
- 方开云石明隽肖瑛桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：SNAIL1SIRNA高糖
- 阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖被引量：5
- 2009年
- 目的探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导的原代培养系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制。方法原代培养肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24、48h收集细胞。用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术测定cyclinD1和细胞周期;免疫细胞化学检测p53蛋白的表达。结果48h内,高糖促进GMC增殖,使GMC由G1期进入S期细胞比例增高;同时cyclinD1蛋白表达上调而p53蛋白的表达减少;SF能明显对抗高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强。结论SF可能通过抑制cyclinD1蛋白表达和促进p53蛋白生成,从而抑制高糖诱导的GMC增殖。
- 石明隽罗华肖瑛桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：系膜细胞高葡萄糖阿魏酸钠CYCLIND1
- 糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化逆转可能性的研究被引量：2
- 2009年
- 目的动态观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素(E-cadherin)在糖尿病(DM)大鼠肾组织中的表达,探讨糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏纤维化逆转的可能性。方法选择SD大鼠随机分为正常对照组、DM组和胰岛素治疗组,链脲佐菌素(STZ)诱发大鼠DM。正常对照组和DM组按病程分为2、4、8、12、16、20和24 w组,胰岛素治疗组从第13周起用胰岛素控制血糖至正常水平,分为16、20和24 w组。检测各组血糖、24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)和肾脏指数(RI);PAS染色光镜观察肾脏病理改变;免疫组化检测肾皮质α-SMA和纤连蛋白(FN)的表达;Western印迹检测肾皮质α-SMA和E-cadherin蛋白表达量;RT-PCR检测肾皮质α-SMA和FN mRNA水平。结果DM组大鼠血糖、24 h尿蛋白、Scr、RI均较正常对照组明显升高(P<0.05,P<0.01),胰岛素治疗组上述指标均较DM组显著降低(P<0.05,P<0.01)。正常大鼠α-SMA只在血管壁表达,DM组2 w开始有少量间质细胞胞浆内有阳性染色,随病程进展间质细胞阳性染色增多;8 w时肾小球系膜细胞胞浆内见阳性表达;从16 w开始在DM大鼠肾小管上皮细胞可见α-SMA蛋白阳性表达,胰岛素治疗组未见表达;DM组肾皮质α-SMA和FN蛋白与mRNA表达水平较正常对照组显著增多(P<0.01),胰岛素治疗组则显著低于DM组(P<0.01);DM组E-cadherin蛋白的表达水平较正常对照组显著降低(P<0.01),而胰岛素治疗组显著高于DM组(P<0.01)。结论控制血糖可使DN大鼠肾脏一定程度的纤维化逆转,其机制可能与肾脏固有细胞表型转变被抑制或反转有关。
- 方开云娄晶磊肖瑛石明隽桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：Α-平滑肌肌动蛋白E-钙黏素
- 糖尿病大鼠肾小管BMP-7和p38MAPK表达关系的研究被引量：1
- 2009年
- 目的动态观察糖尿病(DM)大鼠肾小管骨形态发生蛋白-7(BMP-7)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在糖尿病肾病(DN)发病机制中的相互关系。方法将SD大鼠分为正常对照组(N组)、糖尿病组(DM组)和糖尿病胰岛素治疗组(DMT组),分别于成模后2、4、8、12、16和24周测定生化指标和肾脏指数,PAS染色观察肾脏病理形态改变,免疫组织化学检测BMP-7、p-p38MAPK、α-SMA和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质BMP-7mRNA的表达。结果随DM病程延长,BMP-7蛋白和mRNA的表达较N组低,至24周时BMP-7蛋白仍有少量表达但mRNA无表达,DMT组表达显著增多;p-p38MAPK蛋白于N组无表达,DM组显著增多,8周时达高峰,DMT组则显著减少;α-SMA开始表达于DM16周组,而DMT组无表达。24周DM组和DMT组BMP-7蛋白表达与24h尿蛋白、肾脏指数、α-SMA、FN和p-p38MAPK呈显著负相关。结论BMP-7与p38MAPK之间可能相互调节,共同参与糖尿病肾病的发生发展过程。
- 肖瑛方开云石明隽刘瑞霞桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶纤维连接蛋白
- 丹芪合剂对DM大鼠肾小管BMP-7及其受体表达的影响被引量：11
- 2009年
- 目的观察丹芪合剂和依那普利对糖尿病(DM)大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及其受体ALK-3表达的影响,探讨丹芪合剂的药理机制。方法将SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病丹芪合剂组(C组)和糖尿病依那普利组(D组)。以链脲佐菌素复制DM大鼠模型。于实验12周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,PAS染色观察肾组织的形态结构变化;免疫组化检测肾小管上皮细胞BMP-7和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质BMP-7和ALK-3 mRNA水平。结果①B组的血糖、甘油三酯和总胆固醇、血肌酐、肾脏指数均显著高于A组并出现明显的蛋白尿,C和D组上述指标除血糖外均明显低于B组。②免疫组化结果显示BMP-7蛋白高表达于A组肾小管上皮细胞胞浆,FN仅有少量表达;B组BMP-7蛋白的表达明显减少,FN表达却明显增多;C和D组肾小管上皮细胞BMP-7蛋白表达显著高于B组,但低于A组,同时FN的表达减少。③RT-PCR结果显示,与A组相比,B组肾皮质BMP-7表达明显减少,且ALK-3 mRNA未见表达,C和D组BMP-7及其受体ALK-3 mRNA表达均显著高于B组,D组ALK-3 mRNA表达甚至高于A组。结论丹芪合剂和依那普利可能通过促进内源性BMP-7及其受体ALK-3的表达,使FN的沉积减少,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。
- 肖瑛石明隽桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：骨形态发生蛋白-7丹芪合剂
- 丹芪合剂对糖尿病大鼠肾小管p38MAPK表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:观察丹芪合剂对糖尿病大鼠肾小管p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响,从而探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:设立正常对照组(NG)、糖尿病组(DG)和糖尿病丹芪合剂治疗组(DQT),链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,12周后测定大鼠血糖、血肌酐和24 h尿蛋白及肾脏指数;PAS染色观察肾脏病理变化;免疫组织化学方法检测肾小管p38MAPK和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质p38MAPK mRNA的水平。结果:与NG相比,DG大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白及肾脏指数均显著升高,肾小管上皮细胞p38MAPK蛋白及mRNA和FN蛋白表达明显增多,DQT除血糖外,血肌酐和24 h尿蛋白均显著下降,p38MAPK蛋白及mRNA和FN蛋白表达明显减少。结论:丹芪合剂可能通过抑制p38MAPK的表达而减少FN的分泌和沉积,延缓糖尿病肾小管间质损害的进程。
- 肖瑛石明隽桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：SPRAGUE-DAWLEYP38丝裂原活化蛋白激酶丹芪合剂纤维连接蛋白
- 小干扰RNA对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail 1表达的抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的:观察小干扰RNA对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail1表达的抑制作用及意义。方法:将原代培养肾小管上皮细胞分为5组,(1)对照组(含糖5.5 mmol/L);(2)高糖组(含糖25 mmol/L);(3)Snail1 siRNA处理组,转染Snail1 siRNA,6 h后更换为高糖(含糖25 mmol/L)培养;(4)Control siRNA处理组,转染Control siRNA作为阴性对照,6 h后换为高糖(含糖25 mmol/L)培养;(5)高渗组(含甘露醇19.5 mmol/L)。72 h后收集细胞,用Western blot检测Snail 1、Vimentin蛋白表达,用半定量RT-PCR检测Snail 1、Vimentin、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)和纤维连接蛋白(FN)的mRNA表达。结果:肾小管上皮细胞转染Snail1 siRNA后,与高糖组比较Snail1mRNA和蛋白表达分别下降62%和68%(P<0.01);与高糖组比较,Snail1 siRNA处理组Vimentin、FSP-1、FN蛋白和(或)mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论:(1)小干扰RNA能显著抑制高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail1表达;(2)Snail1参与了高糖作用下肾小管上皮细胞病理改变,并在细胞外基质的沉积中起重要作用。
- 方开云石明隽肖瑛桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：肾小管SNAIL1波形蛋白蛋白质类
- 丹芪合剂对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7和蛋白激酶Cα表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察丹芪合剂对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、蛋白激酶Cα(PKCα)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响,以期进一步探讨丹芪合剂防治糖尿病肾病的作用机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组和丹芪合剂组,以链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,喂养12周后处死大鼠,生化方法测定大鼠血糖、血肌酐(Scr)和24h尿蛋白及肾脏指数;PAS染色观察肾脏病理改变;免疫组化检测肾小管上皮细胞BMP-7、PKCα、AngⅡ和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质BMP-7、PKCα和AngⅡmRNA的水平。结果与对照组相比,模型组大鼠血糖、Scr、24h尿蛋白及肾脏指数均显著升高,肾小管上皮细胞PKCα、AngⅡ的蛋白及mRNA、FN蛋白的表达明显增多,而BMP-7蛋白和mRNA的表达明显减少;丹芪合剂组上述升高指标均显著低于模型组,并且PKCαmRNA未见表达,同时BMP-7蛋白和mRNA的表达却明显增加;相关分析显示模型组、丹芪合剂组肾小管上皮细胞BMP-7分别与PKCα、AngⅡ和FN蛋白的表达呈显著负相关(P<0.05)。结论丹芪合剂可能通过下调肾小管上皮细胞PKCα和AngⅡ及上调BMP-7表达,使FN的沉积减少,从而发挥对糖尿病大鼠肾小管间质损伤的保护作用。
- 肖瑛石明隽桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：丹芪合剂糖尿病肾病骨形态发生蛋白-7蛋白激酶CΑ
- 原代肾小管上皮细胞的培养和鉴定被引量：8
- 2008年
- 目的:建立大鼠肾小管上皮细胞原代培养及鉴定方法。方法:采用研磨、消化培养法,用免疫细胞化学和RT-PCR鉴定细胞。结果:培养的细胞CK18蛋白表达阳性,基本没有α-SMA和Vimentin的蛋白表达,E-cadherin mRNA强表达。结论:成功建立大鼠肾小管上皮细胞原代培养方法,为肾脏疾病的研究提供实验平台。
- 方开云石明隽肖瑛桂华珍郭兵张国忠
- 关键词：上皮细胞肾小管细胞培养
