病毒学国家重点实验室开放研究基金
- 作品数：51 被引量：212H指数：8
- 相关作者：李玲叶啟发赵慧佳乐江沈秉正更多>>
- 相关机构：武汉大学华中科技大学中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 人乳头瘤病毒高低危基因型感染子宫颈组织的比较蛋白质组学分析及其差异被引量：3
- 2007年
- 目的观察人乳头瘤病毒(HPV)感染子宫颈组织后蛋白质组表达情况,探讨高、低危基因型感染子宫颈组织后表达的差异及意义。方法采用比较蛋白组学研究技术,对HPV高危基因型感染的子宫颈上皮内瘤变、低危基因型感染的子宫颈尖锐湿疣和正常对照的子宫颈上皮组织进行两两比较,筛选差异表达蛋白质,并对差异蛋白质点进行质谱分析。结果对3组26个差异蛋白质点的分析共获得了22张肽质量指纹图,搜索后得到18个与其相匹配的蛋白质点。通过查询NCBInr数据库获得初步鉴定的18个蛋白质功能信息,主要与细胞代谢、信号传导、细胞分泌、细胞骨架构建及细胞增殖、分化与凋亡等相关。结论高、低危基因型HPV感染子宫颈组织后蛋白质组表达存在明显差异。
- 齐淑贞张国成张津萍曾学思曹元华钟铭英陶小华刘彤云王千秋杨荣阁
- 关键词：人乳头瘤病毒子宫颈上皮内瘤变比较蛋白质组学
- 朊蛋白在口腔鳞状细胞癌和黏膜白斑中的表达及意义被引量：11
- 2013年
- 目的 检测朊蛋白在口腔正常黏膜、白斑、鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinomas,OSCC）以及其各亚组之间的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测OSCC（84例）、白斑（26例）及正常黏膜组织（20例）中朊蛋白的表达情况,并分析其在性别、种族、组织病理分期、临床分期等临床参数的相关性.结果 朊蛋白在正常黏膜、白斑及OSCC组织中的阳性表达率分别为15％（3/20）、42％ （11/26）和95％（80/84）;朊蛋白在白斑及OSCC中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）,阳性率随分化程度下降而升高（P＜0.05）.朊蛋白在肿瘤TNM分期及性别、种族中的表达差异无统计学意义（P＞0.05）.在TNM分期中,I、Ⅱ期朊蛋白表达强度随分化下降而明显升高（P＜0.05）,但与Ⅲ、Ⅳ期之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;而在I＋Ⅱ和Ⅲ＋Ⅳ期的总体表达差异中有统计学意义（P＜0.05）.结论 朊蛋白在OSCC中的高表达及在白斑、OSCC中的渐进性高表达与OSCC的发生、病理分期、及临床TNM分期密切相关,可为OSCC的早期诊断和靶向治疗提供依据.
- 张杰曾妍郑军徐江
- 关键词：口腔鳞状细胞癌白斑朊蛋白
- HCV NS5B蛋白对不同HCV基因型来源RNA模板复制活性的比较
- 2007年
- 目的分析HCV NS5B蛋白以不同HCV型来源的负链3’末端RNA为模板的复制活性,为优化以NS5B为靶点的抗HCV药物模型提供理论依据。方法利用原核表达系统表达HCV NS5B蛋白,Ni-NTA亲和层析柱纯化,分别以体外转录的1a(-)3′T RNA、1b(-)3′T RNA和2a(-)3′T RNA为模板进行体外RdRP反应,Northen blot检测RdRp产物。结果当以2a(-)3′T RNA为模板时,RdRp产物量最高,约为以1a(-)3′T RNA为模板时的RdRp产物量的220%,当以1b(-)3′T RNA为模板时产物量最低,约为1a(-)3′T RNA为模板时的RdRp产物量的60%。结论HCV NS5B对不同基因型来源的RNA模板具有选择性。
- 胡果宇陈绪林廖庆姣甘润良
- 关键词：丙型肝炎病毒
- 乙型肝炎病毒对SOX4表达的影响及其机制探讨被引量：1
- 2016年
- 目的观察乙型肝炎病毒(HBV)对SOX4表达的影响,并探讨其机制。方法 RT-PCR和Western印迹法检测Hep G2和Hep G2.2.15细胞中SOX4 mRNA和蛋白表达的差异,将HBV感染性克隆p HBV1.3及其空载体分别与含SOX4基因启动子的报告质粒p GL3-SOX4共转染Hep G2细胞,测定荧光色素酶的活性,RT-PCR和Western印迹法分别检测SOX4 mRNA和蛋白表达的情况。结果 Hep G2.2.15细胞中SOX4 mRNA和蛋白的表达水平明显高于Hep G2,HBV能够激活SOX4基因启动子的活性,并在mRNA和蛋白水平上调SOX4的表达。结论 HBV能够在转录和翻译水平上调SOX4的表达。
- 刘兴晖徐凤霞宋惠鲁作华沈振华
- 关键词：乙型肝炎病毒启动子
- KIR3DL1 rs35974949和rs35656676位点基因多态性与HCV易感性和慢性化关系被引量：1
- 2022年
- 目的探讨KIR3DL1基因rs35974949和rs35656676位点单核苷酸多态性(SNP)与丙型肝炎病毒(HCV)易感性和慢性化的关联性,为定制HCV感染的筛查、诊断和个体化预防策略提供理论依据。方法于2008年8月—2015年12月采用整群抽样方法抽取江苏省句容市和丹阳市25个自然行政村1788名既往有偿献血者和江苏省9家三级医院肾透析中心749例肾透析者共2537名18~79岁未接受过抗HCV治疗(包括干扰素和直接抗病毒药物)的HCV感染高危人群进行问卷调查和HCV抗体检测,将抗-HCV和HCV RNA均为阴性的1512人作为阴性组、抗-HCV阳性且HCV RNA阴性的382人作为自限清除组、抗-HCV和HCV RNA均为阳性的643人作为持续感染组,采用TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)进行基因分型,并应用多因素logistic回归模型分析KIR3DL1基因rs35974949和rs35656676位点基因多态性与HCV易感性和慢性化的关系。结果阴性组KIR3DL1rs35974949位点GG、GT和TT型基因型携带者分别占78.47%、20.05%和1.49%,自限清除组分别占76.64%、19.16%和4.20%,持续感染组分别占74.34%、19.60%和6.07%;阴性组KIR3DL1 rs35656676位点CC、CG和GG型基因型携带者分别占31.32%、50.60%和18.08%,自限清除组分别占31.68%、49.74%和18.59%,持续感染组分别占31.78%、50.47%和17.76%。在校正性别、年龄、谷丙转氨酶(ALT)值是否异常、谷草转氨酶(AST)值是否异常和感染途径后,多因素非条件logistic回归分析结果显示,与携带KIR3DL1 rs35974949位点GG/GT基因型的个体相比,携带KIR3DL1 rs35974949位点TT基因型的个体更易感染HCV(共显性模型:OR=2.802,95%CI=1.571~4.998,P<0.001;隐性模型:OR=2.860,95%CI=1.607~5.090,P<0.001);KIR3DL1 rs35974949位点基因多态性与HCV慢性化以及KIR3DL1基因rs35656676位点基因多态性与HCV易感性和慢性化均无相关性(均P>0.05)。结论KIR3DL1rs35974949位点基因多态性与HCV易感性有关。
- 沈超姚敏尹荣朱萍邵建国张津玮蔡卫华黄鹏董晨董晨张云
- 关键词：易感性慢性化
- H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达被引量：3
- 2012年
- 禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达载体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达。结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础。
- 郑方亮朱春玉商玲玲马杰良孙婷婷艾海新朱俊峰段艳婷朱应刘宏生
- 关键词：NS1原核表达纯化
- 肝细胞肝癌中长链非编码RNA LINC00844的表达及对细胞增殖和迁移能力的抑制作用被引量：2
- 2020年
- 目的:探讨长链非编码RNA LINC00844在肝细胞肝癌组织中的表达水平及其作用。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测12对临床肝细胞肝癌组织及相应癌旁组织中LINC00844表达水平;通过携带LINC00844基因的慢病毒与不携带外源性基因的慢病毒感染的方式构建HepG2和HCCLM9细胞系过表达LINC00844组(LV-LINC00844)和对照组(LV-NC),并通过荧光显微镜及q RT-PCR检测过表达的效率,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell分析LINC00844对HepG2和HCCLM9细胞增殖及迁移的影响。结果:在12对临床标本中,11对肝细胞肝癌组织中LINC00844的表达明显低于癌旁组织(P<0.01);成功构建了过表达LINC00844的HepG2和HCCLM9细胞系;过表达LINC00844可以抑制HepG2和HCCLM9细胞的增殖及迁移能力(P<0.01)。结论:LINC00844可以抑制细胞的增殖及迁移参与肝细胞肝癌的发生发展,LINC00844可能是肝细胞肝癌的一个潜在的生物标记物及治疗靶点。
- 黄康李玲叶啟发彭贵主
- 关键词：肝细胞肝癌增殖迁移
- 活细胞内基于Diels-Alder反应的量子点标记蛋白质研究
- 2017年
- 目的建立一种基于Diels-Alder环加成反应用于活细胞内量子点(quantum dots,QDs)标记蛋白质的新方法。方法反式环辛烯(trans-cyclooctene 2,TCO2)修饰的类转录激活因子效应物(transcription activator-like effectors,TALE)蛋白与偶联四嗪(tetrazine 1,Tz1)的红色量子点QD625在Vero活细胞内特异性结合,形成量子点荧光标记的蛋白TALE-QD625,通过激光共聚焦显微镜观察TALE-QD625在Vero细胞内的荧光信号分布。结果基于Tz1和TCO2的Diels-Alder环加成反应在Vero活细胞内将QD625标记至TALE蛋白,并随TALE进入细胞核内,在核内观察到红色的QDs荧光信号,成功建立活细胞内量子点标记蛋白方法。结论通过Diels-Alder环加成反应首次实现活细胞内量子点标记蛋白,为蛋白单分子成像提供一种新的标记方法。
- 王明秀张加玲刘云凤乔增杰
- 关键词：量子点活细胞
- 北京鸭CD8α分子克隆与表达及其多克隆抗体制备被引量：3
- 2008年
- 为了探讨鸭CTL免疫与病毒关系,本文用PCR技术从鸭cDNA文库中克隆了其CD8α基因(DuCD8α)。将DuCD8α成熟肽cDNA插入表达载体pQE30、构建了E.coliJM109(pQE30/DuCD8α)原核表达系。经诱导表达、蛋白纯化,制备了鼠抗DuCD8α多克隆抗体。结果表明DuCD8α成熟肽长645 bp,编码214个氨基酸。与已报道的DuCD8α在氨基酸水平上的同源性高达99.0%。SDS-PAGE证实重组DuCD8α(rDuCD8α)在JM109工程菌中的表达量可达15%。纯化的rDuCD8α分子量为26 kDa。ELISA结果显示鼠抗rDuCD8α多克隆抗体效价为1∶1 280 000。
- 廖定为唐秀山蒋一男张念之夏春
- 关键词：北京鸭CD8Α抗体
- 新疆出血热病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备被引量：4
- 2015年
- 目的：原核表达纯化新疆出血热病毒79121毒株糖蛋白截短片段（ Gn、Gc1和Gc2）并分别制备其多克隆抗体。方法采用反转录PCR的方法克隆79121毒株Gn、Gc1及Gc2基因片段，并将其构建到原核表达载体pET-28a（＋）中，转化到E．coli BL21（DE3）中进行诱导表达，经镍柱亲和层析法纯化Gn-His、Gc1-His及Gc2-His融合蛋白，SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量（ Mr ）。用纯化蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清，ELISA和Western blot法检测血清效价和特异性。结果双酶切鉴定和测序证实构建的pET-28a-Gn、pET-28a-Gc1和pET-28a-Gc2重组表达载体正确，表达的融合蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His其Mr 分别约为25×103、33×103和34×103。 ELISA法检测抗体效价分别为1∶25600、1∶6400及1∶25600。 Western blot结果表明兔多克隆抗体均能特异性识别相应的重组蛋白。结论新疆出血热病毒截短糖蛋白的表达纯化和效价高、特异性好的兔抗血清的制备，为新疆出血热病毒的检测和糖蛋白生物学功能的深入研究提供资料。
- 俞欢汪梅芳张渝疆彭倩寇春达尔肯·托肯李阳李轶杰孙素荣
- 关键词：新疆出血热病毒糖蛋白原核表达多克隆抗体
