云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目([2009]171)
- 作品数：15 被引量：50H指数：5
- 相关作者：严玉霖高洪赵汝臧雅婷李祥峰更多>>
- 相关机构：云南农业大学云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南农业职业技术学院更多>>
- 发文基金：云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目国家自然科学基金云南省高校科技创新团队支持计划资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：6
- 2013年
- 根据副猪嗜血杆菌16SrRNA基N的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针，通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及对临床样品的检测，建立了副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果表明，该方法与猪肺炎支原体、巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽孢杆菌、奇异变形杆菌以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应；标准品浓度在6．92×10^8-6．92×10^3 copies／μL范围内具有良好的线性关系，最低可检测到6．92×10^1copies／μL的标准品阳性质粒；批内和批间变异系数均小于3％。临床样品检测结果表明，该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和快速的优点，可用于副猪嗜血杆菌感染的早期诊断和流行病学调查以及副猪嗜血杆菌的定量分析。
- 李富祥熊和丽姚俊李华春
- 关键词：副猪嗜血杆菌16SRRNA基因流行病学调查
- 云南省楚雄地区散养户猪伪狂犬病野毒感染的血清学调查被引量：6
- 2015年
- 为了解云南省楚雄地区散养户猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染的情况,试验从楚雄地区9个散养户随机采集154份血清样本,并应用间接ELISA方法对血清样本进行PRVg E抗体检测。结果表明:在154份猪血清中,抗PRV g E抗体的阳性率为25.32%。说明楚雄地区散养户PRV野毒株感染率偏高。
- 吴程华高洪严玉霖赵汝刘欢欢董骎谭瑞杨培昌
- 关键词：散养户血清学调查
- 云南省芒市猪圆环病毒感染的血清学与病原学监测被引量：1
- 2018年
- 为了解猪圆环病毒2型（PCV-2）感染在云南省芒市的流行情况,试验从当地规模化猪场及散养户未接种PCV-2疫苗的猪群采集血清和组织样品,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和PCR方法分别检测血清抗体和病毒衣壳（N）蛋白基因片段（ORF2）,并取PCR扩增阳性产物进行TA克隆、细菌转化和筛选培养,随后每个核酸样品随机挑取3个细菌克隆做DNA测序,最后应用DNAStar软件进行病毒DNA序列同源性比较和进化关系分析。结果表明：2013-2016年一季度、二季度、三季度、四季度猪群抗体阳性率分别为32.34%、53.53%、52.45%、40.22%,二季度抗体阳性率比较高。散养猪抗体阳性率略高于规模场猪群。病原学检测发现该市PCV-2的平均感染率达53.51%,且第三季度病原检出率高达77.42%,散养猪阳性率明显高于规模场;分析的8株毒株与河北株和广西株遗传距离较近,而与美国株和湖北株较远;当地流行毒株与PCV-2b基因型接近,并可分为明显不同的2个基因亚型。说明该市养殖猪群普遍存在PCV-2感染,其流行有明显的季节性和毒株基因型差异;结合当地引种情况,当地流行毒株可能来源于外省,建议引种时防范种猪携带PCV-2的风险,严格进行隔离和检疫。
- 李晓红李佳赟张容萍段锐锐郑玉芳陈培富
- 关键词：圆环病毒2型血清学病原学基因型
- Livin基因表达在内毒素致肝损伤中的作用及阳离子A的保护效应
- 2013年
- 为研究内毒素(ET)对大鼠肝Livin基因表达的影响及阳离子A(CA)的保护效应,将72只清洁级SD大鼠随机分为3组:对照组(Ⅰ组)、内毒素组(Ⅱ组)和阳离子A保护组(Ⅲ组)。3组SD大鼠经相应处理后分别在第3、4、8、12小时采集肝样本,采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组织化学技术进行分析。结果显示,在mRNA水平和蛋白水平上,ET可下调Livin基因的表达,CA则能明显上调Livin基因的表达。结果表明,这是诱导肝细胞凋亡的途径之一,也是内毒素对肝损伤的重要机制之一;CA对内毒素导致的组织和细胞的损伤有显著的保护效应。
- 臧雅婷孔令青高洪赵汝严玉霖蒋欢黄慧陈冈
- 关键词：内毒素LIVIN基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为模板,通过RT-PCR扩增编码非结构蛋白2(Nsp2)的基因,插入到pET32a表达载体中并在大肠埃希氏菌中进行表达。SDS-PAGE电泳结果显示融合表达的Nsp2分子量约为68 kDa,Western blotting分析该融合蛋白能与PRRSV阳性血清发生特异性反应。纯化融合表达产物Nsp2,按100μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经腹腔免疫BALB/c小鼠3次后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以Nsp2和His-Tag为抗原,通过间接EL ISA方法对融合细胞的上清液进行检测,筛选阳性克隆。经过3次亚克隆后,最终得到了6株能稳定分泌抗Nsp2抗体的阳性细胞克隆株。间接免疫荧光试验、Western blotting和间接ELISA试验鉴定这6株单克隆抗体均能够特异、单一地识别Nsp2,亚型鉴定结果显示6株单抗均属IgG2a型,其轻链均为κ链。所制备的这些单抗将为鉴定PRRSV Nsp2的B细胞抗原表位以及分析该蛋白的结构和功能奠定基础。
- 严玉霖高洪陈玲陈培富杨建发孙文汇高利波赵汝
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体
- 致病性大肠埃希菌HPI研究进展被引量：3
- 2012年
- 强毒力岛(HPI)首先在耶尔森菌属中发现,由于水平转移等原因在致病性大肠埃希菌中也有发现,这在基础生命和生命科学领域已成为对HPI研究的热点。随着研究的不断深入,HPI与人及动物的致病关系非常密切,目前研究发现铁载体与细菌致病性有着重要的关系。论文主要对致病性大肠埃希菌HPI的基本特征、流行病学特征、HPI的获取机制、HPI与致病性关系的研究现状做以综述。
- 臧雅婷严玉霖高洪高利波赵汝李祥峰邵志勇卢琴崔艳艳
- 关键词：致病性大肠埃希菌基因
- 大肠埃希菌外膜蛋白F与细菌耐药性研究进展被引量：11
- 2013年
- 随着抗生素的广泛应用及滥用,大肠埃希菌对抗生素的耐药性已严重影响养殖业的发展。外膜通透性改变是耐药机制中的一种因素,而外膜蛋白(Omp)F表达变化可引起外膜通透性的改变。因此,弄清楚影响OmpF表达变化的因素对研发新药降低大肠埃希菌的耐药性有重要意义。论文从大肠埃希菌OmpF的结构、生理功能、调控系统及转录因子等方面与大肠埃希菌的耐药性关系进行综述。
- 崔艳艳高洪严玉霖赵汝卢琴李祥峰邵志勇臧雅婷
- 关键词：大肠埃希菌转录因子
- 草金鱼腐皮病病原菌的分离及鉴定被引量：2
- 2019年
- 昆明某郊县一个养殖场的草金鱼患腐皮病,为了有效治疗该病,笔者从患腐皮病草金鱼的肝脏、肌肉溃烂及病灶边缘处采集病料并划线接种于绵羊血琼脂培养基上,培养后分别获得3株病原菌,菌株编号分别为AR0091、AR0027和UMH12,对其进行细菌形态学观察、药敏试验,并采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增16S rRNA基因序列并测序。结果表明:菌株AR0091、AR0027、UMH12均为革兰阴性短杆菌,大部分成对排列。AR0091、AR0027菌株均对阿米卡星、庆大霉素、复方新诺明、卡那霉素、头孢他啶、环丙沙星、多西环素高度敏感;UMH12菌株对阿米卡星、庆大霉素、复方新诺明、头孢他啶、环丙沙星药物高度敏感,而对卡那霉素和多西环素敏感;3株菌株均对氨苄西林耐药。基因测序获得长度为1 463 bp、1 465 bp和1 464 bp的基因序列,经与GenBank做在线BLAST分析发现菌株之间同源性为98.5%,有25个核酸位点的共同差异性,分离菌株为黏质沙雷氏菌。
- 李晓红陈丽英陈梦婷吴世洲蒋文贤陈培富
- 关键词：草金鱼腐皮病RRNA黏质沙雷氏菌药敏试验
- 致病细菌诱发细胞焦亡研究进展被引量：1
- 2017年
- 细胞焦亡(pyroptosis)是一种新发现的促炎性细胞程序性死亡方式。炎性小体和半胱天冬酶在细胞焦亡发生的过程中起着重要作用。细胞焦亡主要依赖半胱天冬酶1(caspase-1)、半胱天冬酶4(caspase-4)、半胱天冬酶5(caspase-5)及半胱天冬酶11(caspase-11)也可以介导。致病细菌刺激细胞内模式识别受体激活炎性小体形成,依赖于caspase-1的经典焦亡途径和依赖于caspase-4、caspase-5、caspase-11的非经典焦亡途径启动诱发细胞焦亡。细胞焦亡的形态特征以发生机理与凋亡、坏死存在着差异。论文主要对细胞焦亡的形态学特征、发生机制及致病细菌诱发的焦亡进行综述,以期为进一步研究细胞焦亡提供理论基础。
- 卫朝辉刘超英高飞龙王世玉严玉霖高洪
- 关键词：致病细菌半胱天冬酶
- 云南省楚雄地区猪伪狂犬病病毒野毒株的血清学调查被引量：4
- 2014年
- 为了调查云南楚雄地区猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒株感染的阳性率,从楚雄地区3个规模化养殖场以及18个散养户随机采集360份血清,采用间接ELISA方法对血清样本进行PRVgE抗体的检测。结果表明:360份猪血清中抗PRV抗体阳性率为35.00%。规模化猪场的196份样品中,阳性47份,阳性率为23.98%;散养户共164份样品,阳性79份,阳性率为48.17%。说明楚雄地区散养户饲养猪只PRV阳性率较规模化猪场高。
- 陈冈高洪严玉霖赵汝蒋欢黄慧杨培昌
- 关键词：血清学调查
