教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-06-0558)
- 作品数：16 被引量：114H指数：4
- 相关作者：朱国萍王宝娟王鹏赵旵军汪劼更多>>
- 相关机构：安徽师范大学安徽省工程技术研究中心复旦大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金安徽省优秀青年科技基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学更多>>
- 变铅青链霉菌异柠檬酸脱氢酶的异源表达及序列分析
- 2009年
- 通过同源性引物成功扩增和克隆了变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)TK54的异柠檬酸脱氢酶(isocitratedehydrogenase,IDH)(简称SlIDH)基因icd(GenBank登录号为EU661252)。icd的起始密码子为GTG,GC含量为69.55%,显示了链霉菌基因的高GC含量特征,实现了SlIDH在E.coli中的异源高效表达。0.5 mmol/L的IPTG为最佳诱导条件。SlIDH的分子量约为80 kD。在Mn^(2+)或Mg^(2+)条件下,SlIDH以NADP^+为辅酶时的活性分别为7.94 U/mg及4.00 U/mg,以NAD^+为辅酶时的活性分别为0.58 U/mg及0.27 U/mg,SlIDH更偏爱以NADP^+为辅酶。与不同种属单体IDH的氨基酸序列比对显示,SlIDH与单体IDH的序列一致性均在60%以上。因此本工作首次以实验性证据初步鉴定了SlIDH为NADP-依赖型单体IDH。本工作为进一步探索单体IDH的结构与功能以及单体IDH与同源二聚体IDH的进化关系奠定了基础。
- 张贝贝徐琴黄恩启刘爱民郝家胜朱国萍
- 关键词：变铅青链霉菌异柠檬酸脱氢酶活性同源二聚体
- 大肠杆菌arpA基因的表达及功能鉴定被引量：1
- 2010年
- E.coli的arpA基因位于异柠檬酸脱氢酶激酶(aceK)基因和异柠檬酸裂解酶调节因子基因(iclR)之间。根据E.coli基因组序列设计引物,利用PCR技术扩增了arpA基因,并将其克隆入pET-28b(+)。经IPTG诱导,ArpA蛋白可以获得高效表达。通过细菌染色体同源重组技术,构建arpA基因敲除菌株ΔarpA-MG1655。ΔarpA-MG1655在葡萄糖-MOPS培养基中的生长速率和野生型E.coli MG1655的生长速率很接近,前者约是后者的95%。ΔarpA-MG1655在乙酸-MOPS培养基中的生长速率几乎与野生型E.coliMG1655一样,说明ArpA对细菌在乙酸-MOPS培养基中的生长没有明显的影响,对乙酰辅酶A合成酶(Acs)没有明显的调控作用。ArpA包含锚蛋白重复序列,与很多真核生物包含锚蛋白重复序列的蛋白质高度同源,分子系统学分析认为一些在病毒和细菌中发现的锚蛋白重复类似蛋白,可能是进化过程中基因水平迁移的结果。
- 陶张欢赵旵军郑恩霞朱国萍
- 关键词：ARPA基因敲除
- 植物RNA沉默的分子机制研究进展被引量：3
- 2008年
- RNA沉默(RNA silencing)是真核生物中的一种抵抗外源遗传因子(病毒、转座子或转基因)及调控基因表达的防御机制。参与植物RNA沉默的酶及蛋白质主要包括6种RNA依赖的RNA聚合酶、4种Dicer-like(DCL)核酸内切酶和10种Argonautes蛋白。植物中4条RNA沉默途径分别由微小RNA (miRNAs)和3种小干扰RNA(siRNAs)介导,包括反式作用siRNAs(ta-siRNAs)、天然反义siRNAs(nat- siRNAs)和异染色质siRNAs(hc-siRNAs)。在植物RNA沉默的系统性传播中,由DCL4或DCL2将dsRNAs裁剪为次级siRNAs,以放大RNA沉默信号和增强沉默效应。
- 王鹏赵旵军朱国萍
- 关键词：RNA沉默微小RNA小干扰RNA
- 链霉菌酯酶研究进展被引量：4
- 2011年
- 酯酶是一类催化酯键水解和形成的酶类,主要包括脂肪酶和羧酸酯酶.作为生物催化剂,酯酶具有重要的应用价值并被广泛应用于工业领域.链霉菌富含丰富的、生物学特性多样的酯酶.本文对链霉菌酯酶的表达及分泌调节、酶学性质及晶体结构、筛选及发酵生产三个方面进行了综述,以期引起人们对于链霉菌酯酶研究的兴趣.
- 王宝娟苏蕊蕊朱国萍
- 关键词：链霉菌酯酶羧酸酯酶脂肪酶
- 银杏精细胞结构及受精作用的细胞学研究
- 2009年
- 采用常规石蜡制片技术和环氧树脂半薄切片技术,对银杏的精细胞结构及受精过程进行了研究。结果表明,临近受精前,精原细胞分裂形成两个半球形的精细胞,每个精细胞内含液泡状结构、生毛体和纤维性颗粒体各一个。两精细胞的液泡状结构其位置可同时或分别位于近极面和远极面,这种位置的变动可能是鞭毛摆动导致精细胞的旋转所引起,这说明银杏的精细胞在花粉管内也许即可以旋转运动。在银杏受精前后,珠孔端颈卵器室附近的珠心组织表现出向上隆起、出现受精滴、皱褶等规律性变化,这些现象是判断银杏受精时期的良好形态特征。在银杏受精时带有鞭毛的完整精细胞进入颈卵器,随后鞭毛带及精细胞质遗留于颈卵器口下方、卵细胞上面,仅精核进入卵细胞。进入卵细胞的精核直径约30μm,小于成熟精细胞的精核直径(约40μm)。这些对探讨银杏的系统地位及裸子植物的生殖演化具有一定意义。
- 王宝娟朱国萍安丽华
- 关键词：银杏精细胞受精作用
- 霍山石斛微卫星标记的筛选及遗传多样性分析被引量：8
- 2011年
- 目的:利用磁珠富集法构建霍山石斛的微卫星文库,用筛选出的微卫星引物对安徽霍山居群的24株野生霍山石斛进行遗传多样性分析。方法:根据链亲和素磁珠和生物素特异结合的特性,用3'端生物素标记的探针与两端连接已知序列人工接头的霍山石斛基因组DNA酶切片段杂交,杂交复合物结合到包被有链亲和素的磁珠上,洗脱并收集吸附在磁珠上的含有微卫星的片段。经过克隆和测序,再根据微卫星两侧的保守序列设计引物,最后利用从中筛选出的微卫星引物对霍山石斛居群进行遗传学分析。结果:本实验共筛选得到12对多态性位点丰富、带型清晰、重复性好的引物,并检测到65个等位基因,每个位点的等位基因数从2到8个不等,平均预期杂合度(HE)和平均观察杂合度(HO)分别为0.638,0.500。12个多态性位点的哈温平衡检测结果显示有2个位点显著偏离哈温平衡(P<0.05),可能是由于存在无效等位基因。连锁不平衡检测结果表明有3对位点显著连锁不平衡(P<0.05);结论:这些微卫星标记可以用于霍山石斛的居群遗传学分析。
- 郑基阳陈乃富王晖高鹏邵剑文朱国萍
- 关键词：霍山石斛微卫星标记
- 大肠杆菌苹果酸合酶A的酶学和生理功能研究被引量：2
- 2011年
- 苹果酸合酶是乙醛酸循环的关键酶之一。E.coli中苹果酸合酶A(malate synthase A,MSA)由aceB基因编码。根据E.coli基因组序列设计引物,利用PCR技术扩增aceB基因,并将其克隆入pET-29b(+),构建了重组表达质粒pET-MSA。经IPTG诱导,MSA在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达。纯化的MSA蛋白的分子量大小约为60 kDa,最适反应pH值和最适温度分别是pH值8.0、30℃。纯化的蛋白质在Mg2+存在时才能发挥最大的活性,其对乙酰辅酶A的Km和Vmax分别是8.07μM和3.6μM/min。此外构建了MSA和苹果酸合酶G(MSG)基因敲除菌株MG::ΔaceB和MG::ΔaceBΔglcB。研究发现缺少MSA的E.coli突变菌株在乙酸中的生长速率要比野生型菌株慢很多,表明MSA对大肠杆菌在乙酸中的生长起着重要作用。MSG虽然能部分补偿MSA的作用,但是包含MSA的乙醛酸旁路是更有效的乙醛酸代谢途径。
- 王程王敖赵旵军朱国萍
- 关键词：动力学生长速率大肠杆菌
- 柠檬酸合酶的分子生物学研究进展被引量：10
- 2010年
- 柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)是细胞内多种重要代谢途径的关键酶。CS可催化草酰乙酸和乙酰辅酶A之间的缩合反应生成柠檬酸和辅酶A。通常革兰氏阳性细菌、古菌以及真核细胞的CS为同源二聚体,而革兰氏阴性细菌的CS为同源六聚体。根据其在细胞内的定位不同,CS可分为线粒体CS、乙醛酸循环体CS、过氧化物酶体CS。这些同工酶在能量代谢、植物脂肪的代谢、脂肪酸的氧化及细胞解毒过程中起着重要作用。不同来源的CS空间结构、催化机制和动力学性质十分相似。针对其生化特性、空间结构特点、催化机制以及分子进化等研究进展进行综述。
- 葛亚东潘蔚汪劼朱国萍
- 关键词：柠檬酸合酶生化特性分子进化
- 枯草杆菌及大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶的酶学性质研究被引量：1
- 2010年
- 对枯草杆菌异柠檬酸脱氢酶(BsIDH)、大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶(EcIDH)和大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶的突变体酶(EmIDH)进行了纯化和酶学性质鉴定。BsIDH和EcIDH对辅酶NADP^+的特异性与NAD^+相比,分别是NAD^+的1 330倍和3 890倍。而EmIDH对NAD^+的特异性与NADP^+相比,是NADP^+的122倍。因此,BsIDH和EcIDH是NADP^+依赖性异柠檬酸脱氢酶,而EmIDH的辅酶特异性已转换为NAD^+依赖性。EcIDH、BsIDH和EmIDH对底物异柠檬酸的K_m值分别为67.4 μmol/L、60.6μmol/L和105.6μmol/L。BsIDH和EcIDH的最适反应pH分别为8.2和8.0,EmIDH的最适反应pH为7.0。BsIDH和EmIDH的最适反应温度是45℃,EcIDH的最适温度为43℃。三种IDH的活性依赖于不同的二价金属离子的存在,Mn^(2+)、Mg^(2+)存在时酶活性最强,Cu^(2+)、Ca^(2+)、Zn^(2+)和Ni^(2+)强烈抑制酶的活性。系统的酶学性质研究为深入认识IDH的催化与调节机制提供了更多依据。
- 许希晨葛亚东王敖王程朱国萍
- 关键词：枯草杆菌大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶酶学性质
- 皖油离体培养再生植株体系的建立
- 2008年
- 甘蓝型油菜(Brassica napus L.)皖油14具柄子叶为外植体,进行安徽省地方性油菜品系离体培养再生植株体系的研究。通过不同浓度的激素组合实验,结果表明:在愈伤组织诱导中,以MS-C7(MS+2mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.25mg/L2,4-D+7.5mg/L AgNO3)培养基的出愈率最高,且可产生大量绿色芽点;以MS-B3(MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+7.5mg/LAgNO3)培养基的芽苗分化率最高,可分化出丛生的不定芽;生根培养基MS+0.1mg/L NAA+7.5mg/L AgNO3的生根率达100%。7.5mg/L的AgNO3可以明显减少愈伤组织的褐化,良好的空气流通可以减少玻璃苗的形成。初步建立了皖油14品系的高频再生植株体系。
- 朱咸艳刘祥朱国萍
- 关键词：甘蓝型油菜皖油14
