国家自然科学基金(30370318)
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
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- 血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立(英文)被引量：3
- 2005年
- 血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠,利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和SouthernBlot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布,我们将Tie2-Cre转基因小鼠分别与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配。Tie2-Cre;Smad4Co/+小鼠的多个组织的基因组DNA的PCR结果显示,Cre重组酶在所有包含血管内皮细胞的组织中表达并能介导LoxP间的重组。Tie2-Cre;ROSA26双转基因胚胎LacZ染色结果显示,Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。因此,Tie2-Cre转基因小鼠可作血管内皮细胞谱系分析和在血管内皮细胞进行条件基因打靶的理想工具小鼠。
- 李文龙程萱谭晓红张继帅孙岩松陈林杨晓
- 关键词：TIE2血管内皮细胞CRE-LOXP转基因小鼠CRE重组酶特异表达CRE-LOXP
- 低氧诱导因子-1α条件性敲除载体的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 通过建立低氧诱导因子 1α(hypoxiainduciblefactor 1α ,HIF 1α)条件性敲除载体 ,并在体外验证引入的LoxP介导的同源重组等情况 ,为最终建立HIF 1α条件性敲除小鼠模型奠定基础。方法 以含有neo、tk基因的pLoxPneo载体为基本骨架 ,用涵盖 3、4、5、6号外显子的HIF 1α基因组片段 ( 7.6kb)为构建载体的同源DNA片段 ,通过引入LoxP等步骤 ,最终建立旨在条件性敲除HIF 1α第 5号外显子的条件性敲除载体。结果 经酶切 ,测序和在体外细菌中用cre介导的重组等方法证明成功地构建了HIF 1α的条件性敲除载体。结论 成功地构建了HIF 1α的条件性敲除载体 ,为今后进一步获得HIF
- 赵玲宋瑞华孙晶苏楠苟元彬宋维威王建民陈林
- 关键词：低氧诱导因子-1Α同源重组CRE基因
- 多发伤患者血ESM-1的动态变化与脓毒症的关系被引量：2
- 2007年
- 目的探讨多发伤后血清ESM-1的变化与脓毒症发生发展的关系。方法选择多发伤患者25例,检测患者外周血ESM-1浓度,将患者按照ISS评分、并发脓毒血症与否分组,并进行比较分析。结果与正常对照组比较,重伤组第7天血清ESM-1含量显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);重伤组第7天较轻伤组的血清ESM-1浓度显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。并发脓毒症组与非脓毒症组间比较,第3、7天血清ESM-1含量比较均有显著增高,差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。结论动态监测血清ESM-1水平变化对脓毒症的早期预测及干预,有效防治创伤后脏器功能损害可能具有一定临床意义。
- 张亮陈林黄显凯
- 关键词：多发伤脓毒症
- 小鼠胚胎干细胞的培养被引量：3
- 2007年
- 目的:建立小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)的培养方法。方法:制备G418抗性的原代小鼠胚胎成纤维细胞,经丝裂霉素C处理后成滋养层细胞,将小鼠胚胎干细胞复苏后,应用含白血病抑制因子的ES细胞培养液,培养小鼠ES细胞,观察集落的生长情况,并在光镜下观察细胞形态。结果:小鼠胚胎成纤维细胞生长良好,ES细胞呈克隆状生长,且保持未分化状态。结论:建立了小鼠胚胎干细胞培养的有效方法,为下一步基因打靶奠定基础。
- 赵玲杜晓兰王建民陈林
- 关键词：胚胎干细胞小鼠
- 脓毒症大鼠ESM-1水平变化及其与肾损害的关系被引量：2
- 2009年
- 目的观察脓毒症大鼠血清及肾组织内皮细胞特异性分子1(ESM-1)含量的动态变化并探讨其与肾损害之间的关系。方法雄性SD大鼠36只,按照完全随机分组方法分成6组:①正常对照组(n=6);②假手术组(n=6);③脓毒症组,按时相点再分为3、6、12、24h组(n=6)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作大鼠脓毒症模型,假手术组除不结扎、穿孔盲肠外,其余处理同脓毒症组。动态观察各组大鼠血清ESM-1、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的改变;肾组织石蜡切片HE染色观察肾脏组织学改变;免疫组化定量检测肾组织ESM-1的表达情况。结果与正常对照组比较,脓毒症6h、12h、24h组血清ESM-1均显著升高(P<0.05,P<0.01),脓毒症12h组BUN水平显著升高(P<0.05),脓毒症24h组Cr水平显著升高(P<0.05)。脓毒症组随时相点的变化肾组织ESM-1表达呈进行性升高(P<0.01),与脓毒症3h、6h组比较,脓毒症12h、24h组肾组织ESM-1的积分光密度值和平均光密度值显著增高(P<0.05)。血清ESM-1水平变化与BUN及Cr水平呈正相关(r=0.97,P=0.01;r=0.82,P=0.04)。结论脓毒症大鼠血清ESM-1水平及肾组织ESM-1表达显著增高,且与肾损害密切相关;ESM-1对于早期肾损害的检测敏感性高于常规肾功能指标。
- 张亮陈林黄显凯
- 关键词：脓毒症多器官功能衰竭
- HIF-1α条件性基因敲除嵌合体小鼠的获得被引量：4
- 2007年
- 目的应用Cre/loxP系统建立HIF-1α条件性基因敲除小鼠模型。方法电击法将构建好的HIF-1α条件性基因敲除载体转染入小鼠ES细胞,用G418与Ganciclovir对转染的ES细胞进行正负筛选,经Southern杂交鉴定得到阳性ES细胞克隆后,将已发生正确重组的ES细胞显微注射入小鼠囊胚腔,对子代鼠进行基因型鉴定。结果经G418与Gan-ciclovir筛选培养得到490个阳性克隆,用5′端探针进行Southern杂交鉴定获得1株发生同源重组的ES细胞克隆,经显微注射,得到5只由基因敲除ES细胞和供体囊胚细胞共同发育而来的嵌合体小鼠。结论成功得到基于Cre/loxP系统的HIF-1α条件性基因敲除嵌合体小鼠模型。
- 赵玲杜晓兰苏楠宋瑞华何启芬李福兵戚华兵陈林
- 关键词：低氧诱导因子-1Α同源重组胚胎干细胞CRE/LOXP系统
- 脓毒症模型大鼠循环内皮细胞与肝功能状态间关系的相关性研究被引量：5
- 2007年
- 目的探讨大鼠脓毒症中循环内皮细胞(circulating endothelial cells,CEC)数量的变化及其与肝功能改变的关系。方法利用盲肠结扎穿孔模型(CLP)在大鼠制作脓毒症模型。观察CEC数量、白细胞数量的变化、以及肝组织病理组织学、血天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的改变。并探讨CEC数量与AST和ALT的相关关系。结果CLP6h后动物肝细胞明显肿胀,24h组肝细胞大量空泡变性,乃至坏死。CLP3h组白细胞和CEC数量比对照组明显升高。而CLP6h后AST、ALT才出现明显增高。CEC数量与AST和ALT水平呈负相关,Pearson相关系数(r)分别为-0·774和-0.734(P<0·01)。用非线性回归分析CEC数量与AST和ALT的关系,发现CEC数量对ALT的最佳拟合曲线为幂函数(P<0·05),其方程为ALT=33.052681+24.097309CEC-1。CEC数量对AST的最佳拟合曲线为对数函数,但无统计学意义(P=0.607)。结论在大鼠脓毒症模型中,比起常规肝功能指标,CEC数量更能敏感反映肝脏病理进程。当肝功能指标高于正常阈值时肝细胞已经出现了显著损伤。因此,早期监测CEC数量结合已有的肝功能指标有助于早期提示肝功能损害,及时针对治疗。
- 杨京戚华兵赵玲苏楠陈林
- 关键词：脓毒症循环内皮细胞盲肠结扎穿孔术肝功能
- 条件性缺氧诱导因子-1αRNAi转基因小鼠模型的建立被引量：2
- 2008年
- 缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞在缺氧等条件下稳定表达的具有转录活性的蛋白,通过与多种靶基因调控区的缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)结合,调控靶基因表达,使机体对缺氧、缺血等病理生理过程产生适应性反应。为从整体动物水平研究HIF-1α的作用,需要建立HIF-1α相关遗传修饰小鼠。分别针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点合成两对互补的寡核苷酸链,构建可诱导的RNA干扰真核表达载体HIF-AB和HIF-CD。分别将CRE重组酶真核表达载体CRE-ER^(T2)与HIF-AB或HIF-CD转染入RAW264.7细胞,筛选得到稳定表达CRE-ER^(T2)与HIF-AB,或CRE-ER^(T2)与HIF-CD的稳定细胞系。在用4-HT诱导去除上述细胞系中HIF-AB或HIF-CD所含的Neo基因后,用CoCl_2诱导HIF-1α表达,采用半定量RT-PCR检测HIF-AB或HIF-CD对HIF-1α基因表达的影响。结果发现干扰载体(HIF-AB和HIF-CD)对HIF-1αmRNA序列的沉默效果分别为85%和72%。选择干扰效率较高的表达载体HIF-AB经显微注射获得HIF-1α基因敲低小鼠模型,经PCR以及测序验证获得2个转基因阳性小鼠(Founders,G_0代)。G_0代雄鼠与FVB/N雌鼠交配后获得2只F_1代(first filial generation)转基因阳性小鼠,经与EIIA-Cre转基因小鼠交配,得到EIIA-Cre;HIFRNAi^(flox/+)小鼠,RT-PCR结果显示,EIIA-Cre;HIFRNAi^(flox/+)小鼠肝、肺、肾等组织的HIF-1αmRNA水平明显降低,分别约为正常对照的44%、38.2%和23.5%。该小鼠模型的建立为进一步研究HIF-1α的功能及作用机制提供了新的手段。
- 戚华兵宋瑞华杜晓兰赵玲苏楠刘道诚李福兵陈林
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α转基因小鼠
- 转基因小鼠技术与HIF-1α功能的研究被引量：6
- 2004年
- HIF 1α是介导机体低氧反应的主要基因之一 ,在多种细胞、组织低氧反应中有重要作用。已有许多有关HIF 1α结构、功能的分子、细胞水平的研究 ,但在整体动物水平用转基因小鼠技术等研究HIF 1α功能的工作近年来才逐渐开始。简要介绍HIF 1α的结构特点和与HIF 1α有关的转基因。
- 陈林赵玲
- 关键词：低氧低氧诱导因子1转基因小鼠基因敲除小鼠
