中国博士后科学基金(20080431419)
- 作品数：4 被引量：35H指数：3
- 相关作者：苏磊刘志锋曾平童华生孟繁甦更多>>
- 相关机构：广州军区广州总医院南方医科大学广东省医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胃肠功能障碍与炎症反应在中暑发病机制中的作用被引量：18
- 2010年
- 刘志锋苏磊
- 关键词：发病机制炎症反应胃肠功能障碍中暑中枢神经系统功能障碍体温升高
- 脂多糖和热打击联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响被引量：8
- 2010年
- 目的观察脂多糖(LPS)与热打击单独和联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响。方法培养人肠上皮细胞株(SW 480),实验分组为:对照组,热打击组(又分为热打击1、3、6 h组),LPS刺激组,热打击和LPS联合刺激组,用骨架蛋白(肌动蛋白F-actin)的特异性染料罗丹明标记的F-actin特异性结合物鬼笔环肽(rhodam ine-phalloid in)和细胞核特异性染色剂(DAPI)行免疫荧光,检测在上述刺激作用下细胞形态的改变和F-actin在细胞内分布的变化。结果相比于对照组,热打击1 h就可以使细胞轮廓变圆,细胞伪足变短变粗,细胞间间隙变大。热打击3 h时上述情况更加明显,而热打击6 h时,细胞几乎全部坏死漂浮。单独LPS作用6 h时也能看到多数细胞出现伪足变短变粗,细胞间间隙增大情况,但较单独热打击1 h组程度轻。而热打击和LPS联合作用则可看到二者间存在一定的协同作用。正常对照组细胞的F-actin呈相对均匀分布,但以细胞周边和核的周围居多,而单独LPS作用即可看到细胞骨架发生重组,出现应力纤维,而和热打击联合作用时,细胞周边的F-actin明显减少,出现明显的应力纤维(变粗、变短、紊乱,排列呈明显的非极性单向分布)。结论热打击和LPS单独作用均可使细胞形态发生明显改变,细胞骨架发生重组,细胞间间隙增大,并且二者之间存在一定的协同效应,这为理解重症中暑至多脏器功能衰竭(MODS)发生发展过程中,肠屏障细胞的通透性增加进而引发肠道细菌和内毒素移位的作用机制提供了直观的实验依据。
- 刘志锋曾平刘亚伟唐柚青童华生苏磊
- 关键词：脂多糖细胞骨架肠上皮细胞重症中暑
- 乌司他丁对热打击诱导人肠上皮细胞释放白细胞介素-8与p38信号通路的研究被引量：12
- 2010年
- 目的 研究乌司他丁对热打击诱导人肠上皮细胞释放细胞因子的影响以及可能参与调控的信号通路.方法 用不同温度的热打击(39、41、43 ℃)1 h刺激培养的人肠上皮细胞株(SW480)后,继续于37 ℃下培养24 h,收集细胞和细胞上清液.另将细胞进行热打击(43 ℃,1 h),同时加用100 kU/L和1 000 kU/L的乌司他丁继续于37 ℃下培养24 h后收集细胞和细胞上清液;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中白细胞介素-8(IL-8)的含量,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测细胞裂解液中p38蛋白表达.结果 低温度的热打击(39 ℃)对SW480细胞分泌IL-8没有诱导作用,但高温(41 ℃、43 ℃)可明显诱导IL-8水平的升高(均P<0.01);而乌司他丁可明显抑制热打击对SW480细胞IL-8的诱导表达作用(均P<0.01),尽管大剂量乌司他丁对IL-8的抑制作用较小剂量组更加明显,但两个剂量乌司他丁组间无明显差异.不同温度的热打击可诱导SW480细胞p38表达上调,并具有一定剂量依赖效应(均P<0.01).而乌司他丁不仅可以抑制SW480细胞p38的基础表达水平,并且小剂量的乌司他丁即可明显抑制热打击对p38的诱导表达作用(P<0.01),但两个剂量乌司他丁组间无明显差异.结论 乌司他丁可能通过降低p38表达来抑制热打击对肠上皮细胞释放IL-8的诱导作用,但同时也存在其他信号通路参与的可能,这为理解肠屏障细胞的炎症反应在重症中暑中肠道细菌和内毒素移位中的作用机制提供了一定的实验基础,也为乌司他丁作为免疫调节剂未来用于治疗重症中暑提供了实验依据.
- 刘志锋唐丽群曾平李炳玲孙学刚童华生孟繁甦苏磊
- 关键词：白细胞介素-8肠上皮细胞乌司他丁重症中暑
- 脂多糖与高迁移率族蛋白B1联用对HepG2细胞释放细胞因子的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察脂多糖（LPS）与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）单用或联用对人肝癌细胞释放细胞因子的诱导作用。方法培养人肝癌细胞株HepG2，用原核重组表达载体pET14b—HMGB1原核表达纯化HMGB1蛋白；用不同浓度的HMGB1蛋白（0、0．01、0．1、1、10mg／L）或不同浓度的LPS（0、0．1、1、10、100mg／L）以及1mg／LHMGB1和10mg／LLPS联用分别刺激培养的HepG2，24h后收集细胞上清液，用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测上清液中粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）10种细胞因子的表达水平。结果LPS可以剂量依赖性的方式刺激HepG2分泌IL-6、IL-8表达（P〈0．05或P〈0．01），而对GM—CSF、IFN-γ、IL—1β、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、TNF—α等作用不明显；不同浓度的HMGB1刺激HepG2后发现，低浓度的HMGB1可明显上调IL-6、IL-8的表达（P均〈0．01），但随着浓度升高，这种诱导作用逐渐减弱，并逐渐恢复至对照水平，而对其他8种细胞因子也无明显诱导作用。HMGB1和LPS联用时，高浓度的HMGB1可明显抑制LPS对HepG2分泌IL-6、IL-8的诱导作用（P均〈0．01）。结论人肝癌细胞株HepG2对炎性刺激仅能产生很少种类的细胞因子，其中LPS作用可以上调IL-6和1L-8水平，而HMGB1则表现出量效的反作用，并且高浓度的HMGB1可明显抑制LPS对HepG2分泌细胞因子的诱导作用。
- 刘志锋王娟刘铮唐柚青孟繁甦刘靖华苏磊
- 关键词：脂多糖高迁移率族蛋白B1HEPG2细胞细胞因子脓毒症
