南方医科大学南方医院院长基金(20050013)
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 相关作者：齐桓郑少斌姜耀东谭万龙赵善超更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：南方医科大学南方医院院长基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 以AdMax载体系统构建和制备肾癌相关抗原G250基因重组腺病毒表达载体被引量：7
- 2008年
- 目的构建肾癌相关抗原G250重组腺病毒载体,以期用于基因转染树突状细胞(DC)治疗肾癌的实验研究。方法利用AdMax包装系统,首先构建穿梭质粒pDC316-G250,然后将所得的穿梭质粒和辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre以CaCL2法质粒共转染293细胞得到重组腺病毒Ad/G250,CsCl梯度离心纯化病毒,TCID50法测定病毒滴度。Ad/G250转染DC细胞,RT-PCR及流式细胞仪检测G250的表达。结果采用双质粒共转染293细胞,Cre/loxP位点同源重组方法构建了E1和E3缺失的含外源基因的Ad/G250载体。经过PCR、RT-PCR和流式细胞仪证实腺病毒载体构建成功。病毒经过CsCl梯度离心纯化后,Ad/G250滴度达到5.6×109 U/ml。RT-PCR及流式细胞仪显示Ad/G250在DC中特异性表达。结论成功构建了G250重组腺病毒载体。
- 齐桓
- 关键词：腺病毒载体肿瘤相关抗原树突状细胞
- 肾癌相关抗原G250致敏的树突状细胞瘤苗体外诱导特异性抗肾癌免疫被引量：7
- 2007年
- 目的探讨肾癌相关抗原G250致敏的树突状细胞(DC)瘤苗体外诱导自体T淋巴细胞特异性抗肾癌免疫效应。方法自健康人外周血中提取单核细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4刺激活化、经肾癌相关抗原G250致敏(同时设未致敏的DC为对照),用流式细胞仪检测DC细胞和T细胞表面分子的表达,MTT检测肾癌相关抗原G250致敏的DC刺激自体T淋巴细胞增殖效应,以及诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对不同靶细胞(肾癌细胞株786-0、肺癌细胞株A549)的杀伤活性。结果两组细胞均高表达CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR,较低表达CD1a,两组无明显差异(P>0.05)。经G250蛋白致敏的DC激发自体T细胞增殖的能力明显强于未致敏组的DC,由其激活的CTL对786-0的杀伤率明显高于对照组(P<0.05),而两组对A549细胞均无明显杀伤活性。结论肾癌相关抗原G250致敏的DC瘤苗体外可有效的诱导特异性抗肾癌效应。
- 齐桓郑少斌谭万龙姜耀东赵善超
- 关键词：树突状细胞肾癌细胞毒性T淋巴细胞
