艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2013ZX10004-101)
- 作品数：12 被引量：36H指数：4
- 相关作者：李德新梁米芳李川芜为张硕更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心传染病预防控制所复旦大学更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中东呼吸综合征冠状病毒N蛋白的原核表达、纯化和鉴定被引量：7
- 2014年
- 目的：对中东呼吸综合征冠状病毒（ middle east respiratory syndrome coronavirus， MERS-CoV）的核衣壳蛋白（ nucleocapsid，N）进行原核表达、纯化和鉴定，了解其免疫原性。方法通过人工合成N基因，构建重组质粒pET30a-MERS-CoV-N，然后转化E．coli BL21（DE3），利用 IPTG进行诱导表达，并优化确定表达条件；采用镍柱亲和层析纯化，SDS-PAGE和Western blot验证。结果原核表达成功并纯化获得与预期大小（46＆#215;103）一致的高纯度可溶性N蛋白。 Western blot表明重组蛋白可与免疫阳性兔血清及His标签抗体发生特异性反应，但与北京地区2008年收集的30份成人血清无反应。结论 MERS-CoV的N蛋白成功在原核系统中实现表达并纯化、鉴定，为MERS-CoV的免疫学诊断和免疫原性研究奠定了基础。
- 王延群郝春绪邓瑶杨扬赵莉沈晓玲谭文杰
- 关键词：核衣壳蛋白原核表达纯化
- 巢式PCR与LAMP方法在蜱的莱姆病螺旋体检测中的应用被引量：4
- 2014年
- 目的应用巢式PCR方法与环介导等温扩增(LAMP)方法检测蜱中莱姆病螺旋体带菌率。方法从青海省循化县与辽宁省新宾县共采集蜱112只,采用巢式PCR与LAMP两种方法检测蜱的莱姆病螺旋体带菌率。结果采用两种方法检测青海循化蜱标本51份,12份阳性,阳性率为23.53%;辽宁省新宾县蜱标本61份,18份阳性,阳性率为29.51%。采用巢式PCR方法检测112份蜱标本,20份阳性,阳性率为17.86%;采用LAMP方法检测112份蜱标本,15份阳性,阳性率为13.39%,两种方法差异无统计学意义(χ2=0.85,P>0.05)。结论巢式PCR与LAMP方法均可用于蜱标本莱姆病螺旋体的检测,两种方法共同使用可以提高莱姆病螺旋体的检出率。同时,本研究首次报道了青海循化县和辽宁新宾县蜱的莱姆病螺旋体带菌率,完善了我国高林区覆盖率地区的蜱媒带菌率数据。
- 张琳侯学霞耿震郝琴
- 关键词：莱姆病螺旋体巢式PCRLAMP带菌率
- 人类肠道病毒71型亚单位疫苗壳聚糖佐剂作用的研究被引量：2
- 2014年
- 为了解人类肠道病毒71型(EV71)重组保护性衣壳蛋白(rVP1)亚单位疫苗壳聚糖佐剂的作用,本研究利用rVP1蛋白与壳聚糖佐剂制备的疫苗口服免疫新西兰白兔,通过ELISA方法检测兔血清、粘膜洗液(小肠、鼻腔和肺)及粪便中特异性IgG、IgA抗体水平,中和试验检测血清中和抗体滴度,并通过抗原刺激体外培养的兔脾淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平评价rVP1口服免疫效果。结果显示,单纯口服rVP1蛋白仅可诱导产生较低水平的血清IgG和粘膜IgA抗体,而含佐剂疫苗组与单纯抗原免疫组差异显著,并可诱导产生中和抗体。细胞免疫检测结果显示rVP1含佐剂组兔脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4水平明显高于未加佐剂组。本研究为研制EV71VP1口服疫苗奠定了基础。
- 张硕张福顺李阿茜刘林芜为李川张全福梁米芳李德新
- 关键词：肠道病毒71型VP1蛋白壳聚糖口服疫苗免疫原性
- 质粒型甲病毒复制子载体系统的构建及其功能鉴定
- 2014年
- 目的 构建质粒型甲病毒复制子载体系统,并对其功能进行鉴定.方法 在XJ-160病毒感染性cDNA克隆的基础上,将病毒非结构基因序列分为三个片段扩增,分步克隆至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游,并用多克隆位点序列替代病毒的结构基因构建XJ-160病毒质粒型复制子载体.将病毒核蛋白基因及包膜糖蛋白基因分别克隆至pVAX1 CMV启动子下游构建载体的两个辅助质粒.通过绿色荧光蛋白报告基因及海肾荧光素酶报告基因的表达检验该质粒型载体系统的功能特性.结果 成功构建了包括复制子载体和辅助质粒的质粒型甲病毒复制子载体系统,且该复制子载体系统可成功表达绿色荧光蛋白报告基因及海肾荧光素酶报告基因.结论 本研究构建了能够表达外源基因的质粒型甲病毒复制子载体系统,为目标基因表达、重组病毒颗粒制备等奠定了基础.
- 张凤娟唐丽尉研王焕琴杨蕴芝吴萌张鹏梁国栋朱武洋
- 关键词：复制子基因
- 上海市重症急性呼吸道感染儿童中可检出多种型别的人腺病毒被引量：9
- 2016年
- 目的了解上海市重症急性呼吸道感染（SARI）儿童中人腺病毒（HAdV）的感染情况及其分型特征。方法2013年6月至2014年3月从上海复旦大学附属儿科医院收集441份重症急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物（NPAs）。采用巢式PCR的方法进行人腺病毒的检测，对阳性样本进行分型分析及基本流行病学特征分析。结果人腺病毒共检出51例（11．6％，95％CI8．6％～14．6％）阳性，以0．5—1岁之间的患儿感染率较高，分型分析发现感染者中B组所占比例最高，共33例（64．7％），其中HAdV-3共17例（33．3％），HAdV-7共检出16例（31．4％）；其次为C组共14例（27．5％）；HAdV—D（HAdV-8）与HAdV—E（HAdV-4）各1例；HAdV—F（HAdV-41）检出2例。结论人腺病毒在上海市重症急性呼吸道感染患儿中有较高的感染率．存在多种基因型且以HAdV—B中的HAdV．3、7型感染最为常见。
- 李亚敏刘高山周为民赵彦杰李玉川沈军谭文杰
- 关键词：儿童人腺病毒分型检测
- 李斯特菌选择性培养基的研究被引量：1
- 2016年
- 单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,目前李斯特菌受到了越来越多的关注,虽然近些年来应用分子生物学方法对李斯特菌进行诊断的技术不断增多,但传统的细菌分离培养仍然是李斯特菌实验室检测的金标准。本文对各种李斯特菌选择培养基的原理进行阐述,并且比较其分离效果及不足之处,为发展新的分离培养方法和研制新的选择培养基提供了基础。
- 刘东鑫叶长芸
- 关键词：李斯特菌选择性培养基
- 发热伴血小板减少综合征病毒感染Balb/C小鼠和金黄地鼠的免疫病理反应被引量：2
- 2015年
- 发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome irus,SFTSV)是新发传染病发热伴血小板减少综合征的致病病原,为布尼亚病毒科白蛉病毒属的一种新型病毒。为了分析SFTSV感染Balb/C小鼠和金黄地鼠引起的免疫病理反应,本研究采用两个攻毒剂量组分为高剂量组(105 TCID50),低剂量组(103TCID50),以及溶剂对照组,并采用经静脉、肌肉、脑、和腹腔4种途径分别进行攻毒。在攻毒后不同时间点取血样,应用全自动血细胞计数仪检测血细胞亚群,Real-time PCR实验检测血液中病毒RNA拷贝数,悬浮芯片实验检测血浆中IgG和IgM抗体水平。在攻毒后第14d处死动物,收集心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉和脑8种组织器官进行HE染色,观察组织病理改变。研究结果显示,SFTSV可感染Balb/C小鼠和金黄地鼠,在攻毒后第7d检测到病毒特异性IgM和IgG,其中IgM在第7d达到峰值后下降,IgG在攻毒后第14d达到峰值。组织病理学分析显示病毒感染Balb/C小鼠和金黄地鼠的肝组织和肾组织出现明显病变。本研究揭示SFTSV可以感染不同品系的啮齿类动物,引起相似的免疫抗体反应和组织病理变化。
- 金聪韩颖李川顾雯蒋虹陈霆朱华魏强仇佩虹梁米芳李德新
- 关键词：BALB/C小鼠金黄地鼠免疫病理反应
- 海南省关节炎和神经系统疾病患者莱姆病调查被引量：6
- 2015年
- 目的了解我国海南省关节炎或神经性疾病患者的莱姆病感染状况,并确认海南省是否存在莱姆病人。方法海南省三亚市人民医院提供血清542份,均为关节炎或神经性疾病患者。采用间接免疫荧光法(Indirect Fluorescent-Antibody Test,IFA)和免疫印迹法(Western Blot,WB)对血清标本进行莱姆病抗体检测;并采用巢式PCR法对WB抗体阳性的血清标本进行病原学检测。结果 IFA方法检测血清样本542份,54份阳性,阳性率为9.96%。应用WB法对上述54份IFA阳性血清样本进行检测,12份阳性。采用巢式PCR方法检测12份WB阳性样本,2份阳性,测序结果表明两份均为B.garinii基因型。结论本研究证实了海南省人群中存在莱姆病。建议当地医生在诊治关节炎和神经性疾病患者时,可以考虑其是否罹患莱姆病。
- 朱雄张琳侯学霞耿震陈海陈婷俞书义郝琴
- 关键词：莱姆病血清标本抗体检测病原学检测
- Heartland病毒血清学诊断方法的初步建立被引量：1
- 2014年
- 目的初步建立Heartland病毒血清学诊断方法。方法利用原核表达系统及杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达并纯化Heartland病毒核蛋白(Nucleocapsid protein,NP),通过间接免疫荧光法、间接ELISA法及基于Luminex技术的荧光微球法建立Heartland病毒核蛋白IgG抗体血清学检测方法,并利用原核系统表达纯化的Heartland NP所制备的兔免疫血清进行评价。结果原核及真核两系统纯化后的Heartland病毒核蛋白经SDS-PAGE鉴定,均呈现单一蛋白条带,相对分子量约为25kDa。Heartland NP兔免疫血清经间接免疫荧光检测,其IgG抗体滴度可达1∶6 400;经间接ELISA法检测可达1∶409 600以上,经Luminex荧光微球法检测可达1∶4 096 000。上述3种方法检测EV 71VP1兔免疫血清,均无明显非特异性反应。结论本研究初步建立了3种Heartland病毒血清学诊断方法,需进一步完善以应用于实验室诊断。
- 张硕芜为张全福李川梁米芳李德新
- 关键词：血清学诊断
- 六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白抗原性初步研究被引量：2
- 2014年
- 初步研究六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白(Nucleocapsid protein,NP)抗原的抗原性,为开发相应的血清学诊断试剂提供理论依据。利用原核表达系统表达纯化六种致病性白蛉病毒核蛋白,并分别免疫新西兰白兔。通过间接ELISA方法及Western-blotting方法对所获得的兔免疫血清进行交叉反应检测,确定其抗体ELISA滴度。此外,分别用上述六种致病性白蛉病毒NP抗原包被ELISA反应板并对发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)病人血清进行间接ELISA检测,确定其血清学交叉反应及IgG抗体滴度。通过原核表达系统表达并纯化的六种白蛉病毒NP抗原浓度及纯度均达到免疫和检测要求。ELISA及Western-blotting检测结果显示六种病毒NP抗原兔免疫血清中的每种血清与其余五种病毒NP抗原可能存在血清学交叉反应。SFTSV病人血清与除SFTSV-NP以外的五种NP抗原亦可能存在部分交叉反应。本研究初步评价了原核表达的六种致病性白蛉病毒核蛋白的抗原性和免疫反应性,为相应诊断试剂的研制奠定了基础。
- 芜为张全福李川张硕梁米芳李德新
- 关键词：核蛋白间接ELISA血清学诊断
