广东省科技计划工业攻关项目(2003A10905)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：颜光美邱鹏新江伟健刘爱伶苏兴文更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 氯胺酮预先给药对缺氧复氧诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究氯胺酮预先给药对缺氧复氧诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响,及磷脂酰肌醇-3-激酶(P13K)/Akt通路在其中的作用。方法出生7～8 d的清洁级SD大鼠,雌雄不拘,体重15～20g；制备CGNs,培养的8d的CGNs随机分为5组,对照组(A组)、缺氧复氧组(B组)、氯胺酮预先给药组(C组)、PI3K/Akt通路的特异性抑制刺Ly294002-氯胺酮预先给药组(D组)、Ly294002组(E组)。B组将CGNs放入特制缺氧盒中,缺氧3h后复氧；C组缺氧前1h加入200μmol/L氯胺酮；D组加入氯胺酮前30 min加入20μmol/L Ly294002；E组加入20μmol/L Ly294002。复氧16h后进行下述指标的观察。二乙酸荧光素染色法测定CGNs存活率,Hoechst 33258核染色检测CGNs凋亡细胞核,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化水平,蛋白免疫印迹法(Westem blot法)检测CGNs磷酸化A kt、磷酸化GSK3β及总Akt水平。结果缺氧复氧可诱导CGNs的凋亡,降低CGNs磷酸化Akt和磷酸化GSK3β水平(P＜0．05),氯胺酮预先给药可减轻缺氧复氧诱导的上述改变,氯胺酮对CGNs的这种保护作用可被Ly294002部分抑制。结论氯胺酮预先给药可减轻缺氧复氧诱导大鼠CGNs凋亡,其机制与激活PI3K/Akt通路有关。
- 曹林曹德雄苏兴文刘爱伶邱鹏新颜光美
- 关键词：氯胺酮细胞低氧小脑神经元
- 大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒重组体构建
- 2006年
- 目的构建大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒介导的表达载体。方法提取大鼠脑组织总RNA,用逆转录PCR扩增DNA多聚酶β(POLB)的编码区,与T载体连接,作DNA测序后,酶切POLB基因并连入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。酶切鉴定,重组腺病毒质粒(pAd-polb)和Lipofectamine2000转染293细胞,用293细胞扩增重组腺病毒。结果 8个TA克隆中有2个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLB cDNA序列完全一致。DNA序列正确的POLB重组腺病毒质粒 Ad-polb转染293细胞后,荧光显微镜下可见绿色荧光。结论用TA克隆和AdEasy系统,成功构建了大鼠 DNA多聚酶β的腺病毒重组体。
- 钟建辉邱鹏新颜光美
- 关键词：逆转录PCRTA克隆腺病毒载体
- 基因重组蛇毒纤溶因子rFII理化特性及纤溶能力的研究被引量：5
- 2005年
- 【目的】研究重组蛇毒纤溶因子的理化特性和纤溶能力。【方法】SDS鄄PAGE及高效液相法分析重组蛇毒纤溶因子rFII相对分子质量、纯度,等电聚焦分析其等电点;纤维平板和SDS鄄PAGE检测重组蛇毒纤溶因子对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解能力。【结果】重组蛇毒纤溶因子rFII是一个相对分子质量在28000,等电点9.0的碱性蛋白酶。它水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、酌亚基,水解能力随时间和浓度的增加而增加。它对纤维蛋白的水解能力比相同浓度下的纤溶酶强4倍。【结论】rFII是一种高效的水解纤维蛋白原和纤维蛋白的碱性蛋白酶。
- 江伟健邱鹏新颜光美
- 关键词：蛇毒尖吻蝮蛇纤维蛋白原蛋白酶
- 基因重组蛇毒纤溶因子rFII的酶学特性研究被引量：3
- 2005年
- 目的研究重组蛇毒纤溶因子的酶学特性。方法通过SDS-PAGE分析其分子量、纯度,用SDS-PAGE方法检测其对纤维蛋白原的水解能力,用分光光度法检测其水解azocasein的能力和PMSF及EDTA对蛇毒纤溶因子的作用。结果蛇毒重组纤溶因子rFII是一个分子量在28000的蛋白酶。它呈时间和浓度依赖性水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基,EDTA和PMSF均可以抑制该因子水解azocasein的能力。结论rFII是一种纤维蛋白原酶,它的酶活性可同时被EDTA和PMSF所抑制。
- 江伟健邱鹏新颜光美
- 关键词：蛇毒尖吻蝮蛇纤维蛋白原EDTAPMSF
