国家自然科学基金(30571388)
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 相关作者：张红易明林张改平李姣王健更多>>
- 相关机构：河南省动物免疫学重点实验室河南教育学院郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省基础与前沿技术研究计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鸡免疫球蛋白λ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞的分泌表达
- 将鸡Igλ轻链信号肽与pEGFP-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体pEGFP-C1-SP,通过对鸡Igλ轻链基因的定向克隆,构建了带有纯化标签的鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白真核表达载体。转染COS7细胞...
- 张红李姣王丽席俊
- 关键词：绿色荧光蛋白COS7细胞分泌表达
- 文献传递
- 荧光标记的T7噬菌体在噬菌体展示技术中研究配体/受体相互作用的应用
- 将法氏囊病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2展示到T7噬菌体表面,重组噬菌体用PEG沉淀法纯化后用FITC标记,并用此标记的噬菌体与病毒受体细咆法氏囊B细胞结合,荧光显微镜下观察。结果展示有IBDV VP2蛋白的噬菌体经FIT...
- 李姣王爱萍张红张改平王选年鲁琨王秋霞冯丽丽
- 关键词：噬菌体展示VP2蛋白
- 文献传递
- 利用荧光标记的T7噬菌体研究配体/受体的相互作用被引量：1
- 2008年
- 将鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2展示到T7噬菌体表面,以FITC标记纯化的重组噬菌体,通过荧光显微镜观察与流式细胞仪检测,研究标记噬菌体与病毒受体细胞——法氏囊B细胞的相互作用。结果展示有IBDVVP2蛋白的噬菌体经FITC标记后仍然具有与受体细胞结合的特性,荧光显微镜下可见绿色荧光,流式数据显示其平均荧光强度明显高于阴性对照,且IBDV疫苗株TAD可明显阻断其结合。由此得出结论,FITC标记与噬菌体展示技术相结合,可进行配体/受体间相互作用的研究。
- 李姣王爱萍张红张改平王选年易明林鲁琨王秋霞冯丽丽
- 关键词：噬菌体展示VP2蛋白
- 鸡Igλ轻链基因克隆、序列分析及其在COS7细胞膜上的定位表达被引量：1
- 2009年
- 为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基酸构成轻链信号肽,随后是2个Ig样结构域。运用融合PCR的方法将该基因与牛IgG Fc受体γRⅡ跨膜区序列嵌合形成重组跨膜分子,构建真核表达载体pcDNA-λR2T,转染COS7细胞,荧光抗体染色及流式细胞术检测到重组鸡Igλ轻链在细胞膜上的表达。所扩增的鸡Igλ轻链基因以及构建表达于细胞膜上的重组鸡Igλ轻链跨膜分子,为研究鸡免疫系统中的抗体轻链基因,探索Igλ轻链和B细胞膜免疫球蛋白的功能奠定技术基础。
- 张红王健王丽席俊易明林张改平章金刚
- 关键词：COS7细胞
- 重组鸡Igλ轻链真核细胞分泌表达及其单克隆抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的:构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链,制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb)。方法:PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因,限制性酶切消化后,定向克隆于真核表达载体pcDNA3,构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ。重组载体转染COS7细胞后,SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达。用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆。结果:成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体,SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达。杂交瘤细胞经筛选与鉴定,获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株,Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性。结论:构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链。并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb。为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础。
- 张红张改平章金刚杨艳艳易明林李姣韩鸿鹏
- 关键词：COS7细胞单克隆抗体
- 信号肽对鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞上分泌表达的影响被引量：4
- 2008年
- 分别将鸡Igλ轻链信号肽、小鼠纤溶酶原信号肽与pEGFP-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合,产生带有信号肽的中间载体pEGFP-SPc和pEGFP-SPm。对鸡Igλ轻链基因的定向克隆,构建了带有纯化标签的鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-SPc-λ和pEGFP-SPm-λ。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察及Western blotting检测融合蛋白的分泌表达,结果显示,鸡Igλ轻链信号肽能引导鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子的分泌表达;而小鼠纤溶酶原信号肽不具备引导该重组蛋白分泌表达的功能。表明信号肽在蛋白分泌表达中的关键作用,重组蛋白的分泌表达要选择合适的信号肽。
- 张红王健李姣易明林韩鸿鹏张改平
- 关键词：绿色荧光蛋白分泌表达
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白GFP融合分子在COS7细胞内的表达被引量：1
- 2008年
- 将鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2蛋白基因插入增强型绿色荧光表达载体pEGFP-C1中,构建了真核表达载体pEGFP-VP2。PCR与酶切鉴定结果表明VP2基因成功插入到表达载体pEGFP-C1中。脂质体法转染COS7细胞后,荧光显微镜检测到了GFP-VP2融合蛋白的表达。用200μg/ml的G418成功筛选到了稳定表达GFP-VP2融合蛋白的细胞系,表达蛋白经镍亲和柱得到了纯化。
- 李姣张红张改平王爱萍易明林郅玉宝鲁琨张丽萍
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白真核表达GFP融合蛋白
