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国家自然科学基金(31001074)

作品数：7 被引量：27H指数：4
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文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 4篇农业科学
  • 3篇生物学

主题

  • 7篇犬病
  • 7篇伪狂犬病
  • 7篇狂犬
  • 7篇病毒
  • 6篇伪狂犬病病毒
  • 6篇狂犬病病毒
  • 4篇原核表达
  • 3篇抗原表位
  • 2篇主要抗原表位
  • 2篇伪狂犬病毒
  • 2篇克隆
  • 2篇基因
  • 2篇间接ELIS...
  • 2篇GB基因
  • 1篇蛋白
  • 1篇原核
  • 1篇糖蛋白
  • 1篇猪伪狂犬病
  • 1篇猪伪狂犬病病...
  • 1篇流行株

机构

  • 7篇华南农业大学

作者

  • 7篇琚春梅
  • 6篇程艺
  • 6篇吉艺宽
  • 6篇王雨
  • 4篇张宝石
  • 3篇周慧英
  • 3篇孙磊磊
  • 1篇罗永文
  • 1篇任涛
  • 1篇梁梓森
  • 1篇潘慧

传媒

  • 3篇中国畜牧兽医
  • 2篇动物医学进展
  • 2篇华南农业大学...

年份

  • 1篇2016
  • 3篇2015
  • 1篇2014
  • 1篇2013
  • 1篇2012
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
伪狂犬病毒EP0基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究被引量：5
2012年
为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0。经测序鉴定正确后,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因与经同样双酶切处理的pET-32a(+)进行连接,构建重组质粒pET-EP0。将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达情况及反应原性。结果表明,成功扩增得到EP0基因编码区序列,大小为1227bp;重组表达质粒pET-EP0经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约为75ku,主要以包涵体形式存在,且能与伪狂犬病毒阳性血清反应。
孙磊磊程艺梁梓森周慧英琚春梅
关键词：伪狂犬病毒克隆
猪伪狂犬病病毒新流行株主要糖蛋白的分子特征分析被引量：6
2016年
【目的】进一步了解猪伪狂犬病毒新流行株的遗传特征。【方法】对从安徽某猪场分离的1株猪伪狂犬病病毒(PRV)AH株进行遗传进化分析及主要糖蛋白gB、gC、gD、gE的序列分析。【结果】PRV AH株与国内2011年以来的流行毒株非常相似,但与Bartha株及其他国外毒株遗传关系较远;国内流行毒株与Bartha株及其他国外毒株相比,其主要糖蛋白均存在明显的连续氨基酸的缺失和插入,且部分突变位点位于这些糖蛋白的重要功能区。【结论】从分子水平上解析了PRV新流行株与疫苗株Bartha株的遗传差异,为进一步深入研究Bartha株疫苗免疫失败的原因提供了理论依据。
向柯宇潘慧吉艺宽王雨张宝石罗永文琚春梅
关键词：伪狂犬病病毒糖蛋白分子特征
伪狂犬病病毒gB基因的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：7
2015年
为了建立评价伪狂犬病疫苗免疫效果的方法,应用PCR方法扩增gB基因的主要抗原表位区序列,大小为768bp,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pETgB768,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,通过IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白的表达情况及其反应原性。用纯化的gB768蛋白作为包被抗原建立间接gB768-ELISA检测方法,试验结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性、重复性。用该方法检测128份临床送检猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率为93.8%。该方法的建立为猪伪狂犬病疫苗免疫效果的评估奠定了基础。
王雨吉艺宽程艺张宝石向柯宇琚春梅
关键词：伪狂犬病病毒GB基因
伪狂犬病病毒EP0基因的克隆及原核表达被引量：5
2013年
为研究伪狂犬病病毒EP0蛋白与病毒粒子中其他蛋白的相互作用,应用PCR方法从伪狂犬病病毒基因组中扩增EP0基因的编码区并克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0;用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因,并将其亚克隆至pGEX-4T-1中,构建带有GST标签的重组质粒pGEX-EP0;重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况。结果表明,扩增到EP0基因的编码区序列大小为1 227bp;重组表达菌经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约71.4ku,且能与伪狂犬病病毒EP0单克隆抗体发生特异性反应。该蛋白的成功表达为进一步研究EP0蛋白与宿主细胞及病毒粒子中其他蛋白的相互作用奠定了基础。
周慧英程艺孙磊磊王雨吉艺宽任涛琚春梅
关键词：伪狂犬病病毒
伪狂犬病病毒立即早期180基因的克隆及序列分析被引量：1
2014年
为了研究伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）立即早期180基因（immediate early 180，IE180）及其功能，试验采用设计的特异性引物通过PCR法对IE180基因进行扩增，并成功构建了IE180克隆载体，经序列测定后，用DNAStar软件对该序列和已发表的7个PRV参考株的IE180基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比对分析。结果表明，HB-98株IE180基因编码区大小为4425 bp，编码1474个氨基酸，与GenBank中登录的参考株的IE180基因核苷酸同源性为98.4%～99.1%,氨基酸同源性为97.8%～98.4%。系统进化树分析结果表明，该毒株与毒株TNL（登录号：AF352564.2）的亲缘关系较近。
程艺王雨吉艺宽孙磊磊周慧英琚春梅
关键词：伪狂犬病病毒克隆
伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：3
2015年
【目的】为了区分伪狂犬病病毒疫苗免疫猪和自然感染猪,建立快速诊断的方法.【方法】利用PCR方法从伪狂犬病病毒中扩增出糖蛋白E(g E)基因的主要抗原表位区,用Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建重组表达质粒p ET-g E184,并转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,用纯化后的g E184蛋白作为包被抗原,建立间接g E184-ELISA检测方法.【结果和结论】用该方法检测290份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为93.1%.
吉艺宽王雨程艺张宝石向柯宇琚春梅
关键词：伪狂犬病毒GE基因原核表达
伪狂犬病病毒gB蛋白抗原表位基因串联构建及原核表达被引量：2
2015年
本试验通过自行设计两段引物,利用重叠延伸PCR方法,将伪狂犬病病毒(PRV)gB基因两段优势抗原表位序列串联,克隆至pMD18-T载体,测序正确后双酶切连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒;重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白表达情况。经检测,诱导后的重组蛋白获得表达,重组蛋白大小约为54ku,其中串联蛋白大小约为34ku。该重组蛋白可与伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体发生特异性反应,表明重组蛋白的抗原性良好。
王雨吉艺宽程艺向柯宇张宝石琚春梅
关键词：伪狂犬病病毒GB基因抗原表位
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