国家自然科学基金(81160099)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：洪艳覃晓莉张芬熙梁文妹韩晶更多>>
- 相关机构：贵州医科大学武汉大学贵阳医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省社会发展科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Sox9在人脐带间充质干细胞向胰岛前体细胞诱导过程中的表达被引量：2
- 2019年
- 目的探讨转录因子Sox9在人脐带间充质干细胞(human umbilicalcord mesenchyreal stem cells,hUMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的表达变化。方法(1)分离培养并鉴定hUMSCs;(2)采用联合分阶段诱导法,取P5代hUMSCs向胰岛前体细胞分化,倒置相差显微镜观察诱导前后细胞形态变化,免疫组织化学技术检测诱导后胰高血糖素的表达;(3)诱导后7、14、21 d分别取细胞进行免疫荧光化学法、QPCR检测Sox9水平变化。结果hUMSCs经诱导后,细胞胞体呈现宽大形态,并出现胰岛前体细胞的集落,免疫组织化学技术检测诱导后细胞Ngn3、胰高血糖素和PDX-1呈阳性表达;QPCR检测Sox9在诱导过程中逐渐升高,其中诱导14 d达到峰值,21 d下降。结论在hUMSCs向胰岛前体细胞诱导过程中转录因子Sox9表达水平改变,可能参与胰岛前体细胞形成调节过程。
- 韩晶洪艳王琪吴邢陈进
- 关键词：SOX9人脐带间充质干细胞
- 小鼠睾丸支持细胞对人脐带间充质干细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨睾丸支持细胞(SCs)对体外培养人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖能力的影响。方法体外分离培养并鉴定hUCMSCs和SCs;Transwell-insert系统共培养SCs和hUCMSCs(共培养组);普通DMEM-F12培养基培养的hUCMSCs作为对照(对照组);添加细胞因子(白细胞介素-3,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)的DMEM-F-12培养基培养的hUCMSCs作为阳性对照(细胞因子组)。用流式细胞术、免疫细胞化学等方法检测SCs对hUCMSCs增殖、细胞周期、表面标记分子表达的影响,透射电镜观察细胞超微结构。结果与对照组相比,共培养组和细胞因子组hUCMSCs增殖明显加快,以共培养组尤为显著(P<0.05);共培养组和细胞因子组hUCMSCs表面分子CD29和CD105阳性率均增高;细胞周期分析显示,共培养组G0/G1期细胞数与对照组相比无明显改变,而细胞因子组略有减少。透射电镜观察对照组与共培养组细胞均呈现原始细胞的超微结构特点。结论SCs共培养可促进hUCMSCs增殖,且共培养后仍保持其干细胞特性。
- 张芬熙洪艳梁文妹
- 关键词：脐带间充质干细胞支持细胞共培养体外培养流式细胞术
- 神经元素3基因沉默对脐源性胰岛前体细胞MafA表达的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探讨神经元素3(Ngn3)基因在人脐带间充质干细胞(h UMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的作用以及对肌腱膜纤维肿瘤基因同系物A(MafA)表达的影响。方法组织块法分离培养并鉴定h UMSCs;采用分阶段联合诱导法诱导h UMSCs向胰岛前体细胞分化,将其分为正常诱导组、基因沉默组、空病毒转染组,后两组在诱导第7天分别转染干扰病毒和空病毒,嘌呤霉素筛选后检测感染效果;21 d诱导结束后倒置相差显微镜和电子显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学技术检测诱导后各组细胞胰岛素、胰高血糖素、Ngn3的表达;Real-time PCR、Western blotting检测Ngn3以及MafA的表达变化。结果成功分离培养h UMSCs;分阶段联合诱导使正常诱导组和空病毒转染组细胞分化为胰岛前体细胞,Ngn3、胰岛素、胰高血糖素呈阳性表达,电子显微镜观察可见分泌颗粒;成功沉默了基因沉默组细胞的Ngn3基因,且该组细胞Ngn3、胰岛素、胰高血糖素呈阴性表达;Ngn3、MafA在基因沉默组明显下降(P<0.05)。结论Ngn3基因沉默阻滞了h UMSCs向胰岛前体细胞的分化,并抑制了MafA的表达。
- 吴邢檀梦天覃晓莉洪艳
- 关键词：人脐带间充质干细胞实时定量聚合酶链反应
- 葡萄糖转运蛋白2在人脐带间充质干细胞向胰岛前体细胞分化过程中表达的变化被引量：5
- 2017年
- 目的探讨葡萄糖转运蛋白2(Glut2)在人脐带间充质干细胞(h UMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的表达变化。方法分离、培养、鉴定及诱导h UMSCs,分别收集诱导过程中第7天、14天和21天细胞和细胞上清液,采用免疫细胞化学、ELISA、免疫荧光、Western blotting及Real-time PCR检测诱导后细胞相关蛋白和基因的表达。结果免疫组织化学检测诱导后细胞胰腺十二指肠同源盒基因-1(PDX-1呈阳性表达;免疫荧光检测诱导后细胞Ngn3和胰岛素呈阳性表达;Western blotting检测Glut2在诱导过程中逐渐升高,诱导14 d达到峰值,与正常组比较P<0.01;Real-time PCR显示,Glut2基因自第7天即增高(P<0.05)。结论 h UMSCs经诱导后分化为胰岛前体细胞,表达Glut2后能引起胰岛素分泌,已初步具有胰岛B细胞功能。
- 覃晓莉檀梦天洪艳
- 关键词：人脐带间充质干细胞葡萄糖转运蛋白2免疫组织化学免疫荧光实时定量聚合酶链反应
- hUMSCs向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch1和神经元素3的表达
- 2020年
- 目的:探讨人间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch信号通路受体Notch1与神经元素3(Ngn3)变化。方法:分离培养并鉴定hUMSCs,采用分阶段联合诱导法(前10 d用含EGF低糖培养基诱导,后11 d用含激活素A和尼克酰胺高糖培养基诱导)诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化,设单独培养的hUMSCs作为对照;观察诱导分化前后细胞的形态变化,免疫细胞化学法检测诱导后细胞Ngn3、胰高血糖素(Glucagon)表达鉴定胰岛前体细胞,电镜下观察诱导后胰岛前体细胞改变;采用免疫细胞化学法、real-time PCR法及Western blot法检测诱导第7天、第14天及第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达;Western blot法检测诱导并加入γ分泌酶抑制剂(DAPT)后第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达水平。结果:诱导后Glucagon免疫组化染色呈阳性,出现胰岛前体细胞集落,电镜下可见胞体内有分泌颗粒;real-time PCR和Western blot结果显示,Notch1水平在诱导后第7天时最高,Ngn3水平至第14天时达到峰值;添加Notch信号通路抑制剂后Ngn3表达水平升高。结论:Notch信号通路可能通过激活Notch1受体与下游基因Ngn3共同调控体外诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化过程。
- 韩晶洪艳王琪檀梦天
- 关键词：间质干细胞NOTCH1人脐带间充质干细胞
