山东省科技攻关计划(2005GG1102003)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：崔亚洲韩金祥周小艳张登禄陈彧更多>>
- 相关机构：山东省医学科学院山东大学山东省医药生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ezrin的原核表达及与其相互作用蛋白的研究被引量：1
- 2009年
- 目的体外筛选人胰腺癌细胞中与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。方法提取人胰腺癌Panc-1细胞总RNA,RT-PCR法扩增Ezrin基因。将扩增得到的Ezrin基因片段和pET15b质粒转化E.coli DH5α,获得pET15b-Ezrin重组质粒,双酶切后测序鉴定。将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行Ni2+-NTA亲和层析和分子筛纯化后,行SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS/MS质谱分析和蛋白质印迹鉴定。裂解Panc-1细胞,获得总蛋白提取液,采用Pull-down方法体外筛选与Ezrin重组蛋白相互作用的蛋白,并对筛选出的目的蛋白进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF-MS/MS质谱鉴定。结果RT-PCR扩增出的Ezrin基因片段(1761bp)与理论DNA表达片段大小一致,测序鉴定显示克隆的Ezrin基因序列与GenBank报道序列相符。SDS-PAGE、质谱分析和蛋白质印迹分析显示纯化后Ezrin重组蛋白相对分子质量为69400,与质谱分析的相对分子质量结果相符,为带有His-6标签的特异蛋白。双向凝胶电泳和质谱鉴定结果共筛选出可与Ezrin重组蛋白相互作用的7种蛋白,其分别为RNA-binding motif protein39(RBM39)、Transgelin(TAGLN)、Albumin(ALBU)、Formin-1(FMN1)、Rho GTPases(RHGBA)、Tetratricopeptide repeat protein16 (TTC16)、Syntaxin-binding protein1(STXBP1)。结论在大肠杆菌中成功表达、纯化了Ezrin蛋白,并在体外成功筛选出可信的与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。
- 周小艳韩金祥崔亚洲张松涛钟宁宋冠华
- 关键词：细胞支架蛋白质类胰腺肿瘤
- C14orf166异位表达对Hela细胞增殖与迁移能力的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:研究C14orf166异位表达对肿瘤细胞增殖和迁移能力的影响。方法:构建C14orf166真核表达载体并转染Hela细胞,采用RT-PCR及蛋白质印迹法技术检测基因表达,用MTT、Transwell的方法检测C14orf166蛋白在Hela细胞的异位表达对其增殖和迁移能力的影响。结果:成功构建pcDNA3.1-C14orf166真核表达载体并使其在Hela细胞中大量表达,初步研究发现重组质粒转染组与空质粒转染组相比,细胞迁移能力增强,细胞穿膜数分别为39.6±11.7和25.7±8.6,而细胞增殖能力并没明显变化。结论:获得了真核表达载体pcDNA3.1-C14orf166,初步证实C14orf166表达能促进Hela细胞的迁移,为进一步研究c14orf166的功能奠定了基础。
- 张登禄韩金祥崔亚洲周小艳
- 关键词：HELA细胞细胞迁移转染基因表达
- 人胰液蛋白2D图谱的建立
- 2008年
- 目的建立人胰液蛋白表达谱。方法采用丙酮沉淀法处理来自于四个非胰腺癌患者的胰液标本,利用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)技术对胰液蛋白进行分离和鉴定。结果建立了高分辨率的人胰液蛋白表达谱,鉴定了91个独立的胰液蛋白,并对91个蛋白进行了功能注释分析。结论胰液蛋白表达谱为深入理解胰腺疾病的病理生理机制及筛选和发掘胰腺癌潜在生物标志物提供了理论基础。
- 田美崔亚洲宗美娟陈彧韩金祥
- 关键词：胰液蛋白蛋白谱
- 胰腺癌转移相关基因C14orf166的真核表达及其蛋白相互作用的蛋白质组学筛选被引量：3
- 2010年
- 目的旨在对胰腺癌转移相关基因C14orf166进行真核重组表达,并在此基础上结合蛋白质组学方法初步筛选其相互作用蛋白,为进一步研究C14orf166在肿瘤转移中的作用提供研究基础。方法构建人C14orf166的带双标签的真核表达载体pcDNA3.1-Flag-C14orf166-His,通过脂质体将其转染至人胚肾293T细胞。采用Ni-agrose进行His标签蛋白的pull-down纯化,分离C14orf166的蛋白结合复合体,对蛋白混合物进行SDS-PAGE分析,选择差异条带,进行MALDI-TOF-TOF质谱鉴定。结果在293T细胞中重组表达了C14orf166蛋白,对C14orf166蛋白复合体进行分离鉴定后,筛选出RS8、EFCB9和NRAP3个可能与C14orf166相互作用的蛋白。结论基因重组表达结合pull-down和蛋白质组学方法可以发现新的相互作用蛋白,为进一步了解C14orf166在肿瘤发病机制中的作用提供了新的线索。
- 张登禄韩金祥崔亚洲周小艳
- 关键词：胰腺肿瘤蛋白质组学
- 胰腺癌胰液蛋白质组学分析被引量：2
- 2008年
- 目的:利用比较蛋白质组学方法鉴定胰腺癌早期诊断的蛋白标志。方法:采用双向电泳(2-DE)分离比较9个胰腺导管腺癌患者和9个非胰腺癌患者的胰液蛋白质表达谱,用肽质量指纹图谱(PMF)为基础的基质辅助激光解析离子化飞行时间串联质谱(MALDF-TO-F-MS/MS)对差异蛋白进行鉴定。采用蛋白质印迹方法进一步验证蛋白质MMP-9和DJ-1在胰液中的表达。结果:2-DE显示共24个蛋白质点出现>2.0倍的表达差异,上调14个,下调10个。蛋白质印迹检测显示在胰腺癌胰液中高表达MMP-9和DJ-1蛋白。结论:MMP-9和DJ-1可能成为通过内镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)筛查胰腺癌高危患者及早期诊断胰腺癌的潜在的胰液肿瘤标志。
- 田美崔亚洲宗美娟陈彧韩金祥
- 关键词：胰腺肿瘤胰液蛋白质组学肿瘤标志生物学
