江西省自然科学基金(2008GZN0070)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：南昌大学更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金江西省科技攻关计划江西省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库的构建和亲环蛋白基因序列的初步分析被引量：5
- 2011年
- 实验利用灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)诱导处于四龄池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)14h,将诱导后的池蝶蚌血细胞的总RNA进行逆转录,用LD-PCR法合成双链cDNA,从而首次成功构建池蝶蚌血细胞的全长cDNA文库。原始文库的滴度为4×106 cfu/cm3,重组率为90%,扩增后文库的滴度为3.55×109 pfu/mL。目前文库已随机测序672个样品,将所得双向序列进行拼接,去除载体,并多序列比对去除重复序列后,发现436条为已知功能序列,其余为未知功能序列。序列中最小长度270 bp,最大长度为2153 bp,平均大小608.6 bp,表明插入片段大小理想。从文库中筛选获得免疫相关基因池蝶蚌亲环蛋白A(HsCyp A)全长基因并进行序列分析。结果显示,HsCyp A全长1229 bp,序列包括52 bp的5′非编码区、495 bp的开放阅读框、682 bp的3′非编码区和29 bp的poly(A)尾,没有明显的加尾信号。对Cyp A氨基酸序列二级结构进行了较详细的分析并进行了三维建模,同时构建了其系统进化树,分析表明亲环蛋白家族是一个在进化上非常保守的蛋白家族。综合分析,Cyp A在水生动物中不仅仅只是一种组成型蛋白,而是可能在病原感染防御中发挥重要作用。
- 谢凯徐灵盛军庆曾柳根王军花洪一江
- 关键词：池蝶蚌血细胞CDNA文库嗜水气单胞菌亲环蛋白
