国家自然科学基金(81101875)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：卢大儒李坤雨韩泽广更多>>
- 相关机构：复旦大学华东理工大学更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- RNA干扰沉默编码跨膜蛋白35基因表达对肝癌细胞生长及细胞周期的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究跨膜蛋白35(T MEM35)基因在肝癌细胞生长、细胞周期中的作用,探讨跨膜蛋白TMEM35作为潜在肝癌治疗靶点的可行性。方法利用跨膜蛋白二级结构预测工具SPLIT对TMEM35蛋白的二级结构进行分析;利用实时定量多聚酶链反应技术检测TMEM35基因在肝癌患者癌组织及相应癌旁组织中的表达情况;采用化学合成干扰小RNA片段(siRNA)干扰TMEM35基因在肝癌细胞MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,通过软琼脂克隆形成实验观察肝癌细胞非贴壁依赖性克隆生长情况,流式细胞术分析细胞周期;通过蛋白功能相互作用网络数据库STRING推测TMEM35蛋白发挥相应功能的搭档基因。结果 TMEM35为具有4个跨膜结构域的四跨膜蛋白,实时定量多聚酶链反应检测发现TMEM35基因在肝癌中表达紊乱,其中与相应癌旁组织相比较,TMEM35在14例癌组织中表达显著上调,在20例癌组织中表达显著下调(P<0.05)。针对TMEM35基因设计合成siR NAs能够特异性沉默TMEM35基因在肝癌细胞株MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,并且肝癌细胞在软琼脂培养条件下,形成的克隆显著减少。流式细胞术分析发现干扰TMEM35基因表达,能够减缓细胞周期进展,表现为细胞G_1期增多,S期减少。结论 TMEM35基因编码具有四跨膜结构域的膜蛋白,在肝癌细胞生长中发挥重要作用。
- 李坤雨李牛王群张壮壮韩泽广邓庆
- 关键词：RNA干扰肝癌细胞周期
- 肝细胞癌中转录因子E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响被引量：2
- 2014年
- 探讨肝细胞癌(HCC)中非典型性E2F家族成员E2F7在肝癌细胞生长、分化中的作用及可能涉及的分子机制.本研究运用实时荧光定量PCR检测38例原发性肝细胞癌及对应的癌旁组织中E2F7基因mRNA的表达情况;分别通过基因过表达和RNA干扰技术上调或下调E2F7基因表达,并运用实时荧光定量PCR和Western印迹检测肝癌细胞株MHCC-H中β-catenin及其靶基因cmyc的表达情况;双荧光素酶报告基因系统检测E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响;核浆分离实验检测过表达E2F7基因对β-catenin入核的影响;免疫共沉淀实验检测异位表达E2F7与内源β-catenin的相互作用.结果显示,肝细胞癌组织中E2F7基因的表达量显著高于相应的癌旁组织(P<0.001);转录因子E2F7可与β-catenin相互作用并促进β-catenin进入细胞核.转录因子E2F7可以促进Wnt/β-catenin信号通路的活性.
- 翟杨杨卢大儒韩泽广邓庆
- 关键词：肝细胞癌WNTΒ-CATENIN信号通路
